1、ICS 6720010X 14 固园中华人民共和国国家标准GBT 23890-2009油菜籽中芥酸及硫苷的测定 分光光度法Rapid determination of erucic acid and glacosinolate in rapeseed-Photometry2009-05-26发布 200910-01实施丰瞀髁鬻瓣警雠瞥星发布中国国家标准化管理委员会“”。刖 置GBT 23890-2009本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部油料及制品质量监督检验测试中心、中国农业科学院油料作物研究所。本标准主要起草人：李培武、张文、吴
2、渝、李光明、汪雪芳、谢立华、王友平。1范围油菜籽中芥酸及硫苷的测定分光光度法本标准规定了油菜籽中芥酸、硫苷含量测定的分光光度法。本标准适用于双低油菜种子和商品籽中芥酸、硫苷含量的快速检测。本方法的最低检出限：芥酸为05，硫苷为10 btmolg。GBT 23890-20092规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注It期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 5491粮食、油料检验扦样、分样法GBT 668
3、2分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。31芥酸erucic acid油菜籽油中所含顺”一二十二碳一烯酸，以所占脂肪酸组成的百分率表示。32硫苷glucosinolate油菜籽中所含硫代葡萄糖苷，简称硫苷，以每克饼粕或每克油菜籽中所含硫苷总量的微摩尔数表示。4原理41芥酸测定原理油菜籽油中芥酸含量不同，在聚乙二醇辛基苯基醚乙醇溶液中形成的浊度不同，根据浊度与芥酸含量的相关关系测定芥酸含量。42硫苷测定原理油菜籽中硫苷与米曲霉硫甙水解酶反应生成硫苷降解产物，和邻联甲苯胺乙醇溶液反应生成有特征吸收峰的有色产物，采用光度法测定硫苷含量。5试剂除非另有规定，使用试剂均为分
4、析纯试剂。51水，GBT 6682，二级。52超纯水，GBT 6682，一级。53聚乙二醇辛基苯基醚(c。H。0。)乙醇溶液：10 mgmL。称取100 g聚乙二醇辛基苯基醚用无水乙醇溶解并定容至1 000 mL。54硫酸二氢钾(KHzPO。)溶液：01 molL。称取136 g磷酸二氢钾用蒸馏水溶解并定容至100mL。】GBT 23890-200955 pH为60的buffer溶液：05 mgmL米曲霉硫甙水解酶和01 molL的K：HPO。于纯水中定容，在pH计上用稀H。PO。调节pH值为60，冰箱中冷藏备用。56 062 mgmL的邻联甲苯胺：称取062 g邻联甲苯胺充分溶解于无水乙醇中
5、，定容至1 L。贮藏于棕色瓶中，冰箱中冷藏，于一周内使用。57油菜籽硫苷测试板”：使用96孔板，试剂为pH为60的buffer溶液和062 mgmL的邻联甲苯胺溶液。6仪器设备61微孔板光度计：参见附录A。62脂肪制备器：参见附录B。63微型粉碎机。64恒温箱。65天平：量程0200 g，感量10 mg。66可调微量移液器：200“L。67微量移液器：1 000 pL。7取样按照GB 5491执行。取样时，应清除样品外来杂质。样品含水量大于13时，需风干或50烘干至水分小于13。8分析步骤81芥酸测定811预先将石英比色杯和20 mL超纯水置于32o5恒温箱(64)中预热恒温。812取5 g-
6、8 g油菜籽(第7章)倒人脂肪制备器，制取油样，用取油管收集，静置备用。813称取030 g油样于50 mL具塞三角瓶中，用移液管加入25 mL聚乙二醇辛基苯基醚乙醇溶液(53)，旋紧塞子，用力振摇，充分混匀后，放入32土o5恒温箱(64)中保温15 min。814在恒温箱内，用微量移液器(67)将1 000 pL恒温至32的超纯水(52)加入三角瓶，边滴加边摇动三角瓶，旋紧塞子后摇匀，随即倒入比色杯，用微孔板光度计(61)进行芥酸测定，测定值即为油菜籽芥酸含量。82硫苷测定821 取油菜籽样品约3 g-5 g(第7章)，用微型粉碎机或研钵磨碎，细度40目。822称取050 g粉碎样品，置于5
7、 mL具塞试管，用移液管加入3 mL水(51)，塞紧塞子，充分混匀后室温下放置8 min。823用脱脂棉过滤，或离心机(3 000 rmin)离心5 rain，取上清液50 pL加人到硫苷测试板孔(57)内，静置8 rain，用微量移液器(66)加入150 pL磷酸二氢钾溶液(54)后再静置2 rain。824微孔板光度计测定硫苷，作空白调零后测定值即为每克饼粕或每克油菜籽中所含硫苷总量的微摩尔数(pmolg)。同一样品进行两次重复测定，测定结果取算术平均值。1) 油菜籽硫苷测试板是由农业部油料及制品质量监督检验测试中心提供的产品的商品名称。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产
8、品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。9精密度GBT 23890-200991芥酸芥酸含量大于5时，两次平行测定结果绝对相差不大于10；芥酸含量小于5时，两次平行测定结果绝对相差不大于05。92硫苷饼粕中硫苷含量两次平行测定结果绝对相差不大于80-molg。油菜籽中硫苷含量两次平行测定结果绝对相差不大于40tmolg。GBT 23890-2009附录A(资料性附录)微孔板光度计微孔板光度计参数如下：光源：卤钨灯；测量范围：00013500 Abs；精确度：土1或土O001 Abs；重复性：一0505；稳定性：O005 Abs线性度：一11；波长：450 nm士10 rim。微孔板光度计原理如图A1所示。L0弋Lp专4注：下标A为硫甙测定系统，下标B为芥酸测定系统。图A1微孔板光度计原理图脂肪制备器的平面图如图B1所示。1压榨塞；2压榨缸；3环形盛油凹槽4千斤顶；5一一矩形固定框架6导油槽。附录B(资料性附录)脂肪制备器图B1脂肪制备器平面图GBT 23890-2009
