1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1708-2006 出入境口岸新变异型克雅病监测规程Codes of surveillance for new variant creutzfeldt-jakob disease at entry-exit port 111 1 1111111111 11川2006-01-26发布2006-08-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局目Ui=i 本标准的附录C为规范性附录，附录A、附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SNjT 1708-2006 本标准起草单位:中华人民共和国海南出入境检验检疫局、中华人民
2、共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人:黄廷学、黄健民、汪莉、辛小兰、孙虹、杨泽、郝秀华。本标准为首次发布的出入境检验检疫行业标准。I SN/T 1708-2006 出入境口岸新变异型克雅病监测规程1 范围本标准规定了在人出境口岸对新变异型克雅病监测对象、内容、方法、结果判定与处置。本标准适用于入出境口岸新变异型克雅病的监测。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
3、是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 19489 实验室生物安全通用要求SN/T 1229一2003国境口岸艾滋病疫情监测规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 肮蛋白prion 肮蛋白又称阮毒体CPrion protein, Prp)或阮病毒Cvirino) ，是引起人和动物传染性海绵状脑病CTtransmissible Pongiform Encephalopathy, TSE)的病原体。主要包括牛海绵状脑病CBovineSpongl form Encephalopathy, BSE)和新变异型克雅病。3.2 新变异型克雅病ne
4、w variant creutzfeldt寸akobdisease , NvCJD 又称人类疯牛病，是一种慢性、进行性、退化性病变为特征的、致死性中枢神经系统疾病。4 监测对象4.1 来自疯牛病疫情国家的密切接触者。4.2 来自疯牛病疫情国家的牛、羊和人体组织、器官、血被及生物制品、食品、化妆品。4.3 在口岸所在地NvCJD发生时，并且与TSE有密切接触嫌疑的口岸工作人员。4.4 来自疫区污染或疑似污染的物品。5 监测内窑与方法5. 1 监测内容监测内容包括:一一一首例病例的来源和原因;一一对来自疫区的入境人员，通过医学观察临床表现和体征，发现疑似感染者。5.2 监测方法5.2.1 症情收集
5、、分析通过世界卫生组织、国际动物卫生组织、国家卫生部、国家农业部、国家质量监督检验检疫总局及各省疾病与预防控制中心等官方网站收集疫情信息。建立NvCJD的登记、报告制度，对有关疫情资料进行统计分析，预测其流行趋势。1 SN/T 1708-2006 5.2.2 日常监测在入出境人员来自地、经停地有NvCJD疫情报告时，对入出境人员实施医学巡查，收验并审查入/出境检疫健康申明卡，对于有医学巡查中发现的或在入/出境检疫健康申明卡上申明的焦虑不安、抑郁、萎靡或其他行为改变及进行性精神异常的入出境人员，询问与NvCD接触史，对可疑病人做医学检查。5. 2. 3 个案调查对入境人员、国外进口被TSE污染的
6、食品、化妆品进行动态监测。根据患者对BSE暴露史及流行病学特征CNvCD病例感染者，及时进行个案5.2.4 发病学监测通过对发病和死亡趋势。5. 2.5 临床医学观察通过临床医学观察，可见如下临床表-焦虑、不安、抑郁、萎靡或其一一晚期有健忘、一一晚期出现肌阵6 临床实验室检查6.1 神经病学病理检神经病学病理检查方法参见附录A。6. 2 免症组织化学检查免疫组织化学检查方法参见6. 3 实验室判定依据实验室判定可依据如区域最显著;免疫组织化块数较少。7 结果判断NvCD的确诊应根一一流行病学资料;一一相应的临床表现;一一神经病理学检查阳性结果;一一免疫组织化学检查阳性结果。8 结果处置8. 1
7、 症情报告龄不等)。发现NvCD疑似229-2003附录D的规定。的人、地、时三间分布及变化，海绵状病变、神经元空泡化呈灶状，在融合海绵状病变底神经节、丘脑和下丘脑斑为周围被海绵状病变带环在监测中发现的NvCD疑似感染者应在2h内报上级主管部门及当地卫生行政部门。2 SN/T 1708一20068.2 对疑似感染者的处置8.2.1 进行流行病学调查，并做好记录。8.2. 2 根据初步诊断，决定是否采取隔离、留验、发放就诊方便卡或送当地卫生行政部门指定医院进行进一步检查或放行。8.2.3 检验检疫机构应保存与所发现的密切接触者的入/出境检疫健康申明卡和其他有关记录，确保在监测病例被确定为NvCJ
8、D疑似感染者后，能及时与当时的密切接触者取得联系，以便对其进行告知、随访和调查。8. 3 发现NvCJD疑对在监测中发现送医院治疗。一步检查，以确定其病情及时3 SN/T 1708-2006 附录A(资料性附录)NvCJD神经病学病理诊断技术A. 1 材料一一-10%福尔马林生理盐水固定液:氧化铀8.5g，水900mL，40%福尔马林100mL; 一苏木素、伊红染液;一-70%、90%、10D%酒精，酸性酒精(含0.1%盐酸); 一-三氯甲烧;一一石蜡F一-二甲苯;一一-1.5%碳酸哩蓝;一-封片油、切片机、光学显微镜、包埋机。A.2 检测步骤A.2.1 第一次固定:将完整的脑组织浸入10倍2
9、0倍体积的固定液中(约4L8L)ol周后更换固定液，再维持1周。在送往诊断中心时，可将脑组织装入较小的容器并进行适当包装，以确保安全运送。A.2.2 切块:把脑组织横切成3mm5 mm厚的组织块，选以下四块脑干组织作进一步处理z脑问处延髓、小脑腹侧角处延髓、四叠体上丘脑处中脑和红核区中脑。A. 2. 3 第二次固定:将选择的四块脑组织置于新鲜固定液中，再维持1周，中间换三次固定液，并用振荡器不断振荡，以提高固定被的渗透力。在进行常规切片程序之前，将病理组织浸于96%甲酸中处理60 min，以降低其感染性。A.2.4 组织学处理:用7D%的酒精漂洗组织块后，组织块的处理程序见表A.1。表A.1组
10、织块处理程序处理程序时间70%酒精2X30 mm 90%酒精2X30 min 100%酒精3X 1 min 三氯甲烧第一次1X1 mm 二氯甲烧第二次14 h 浸蜡第一次2 h 浸蜡第二次1 h 浸蜡第二次1 h 注1:三氯甲烧处理时间可调到处理机最大档(12h 18 h)。注2:所有试剂使用三次后应废弃，更换新试剂。A.2.5 染色程序:染色程序见表A.204 表A.2苏木素-伊红染色程序染色程序切片用二甲苯脱蜡100%酒精70%酒精自来水冲洗哈里斯酸性苏木精自来水漂洗酸性酒精(0.1%的盐酸)自来水漂洗用饱和(1.5%)的碳酸铿蓝染自来水冲洗伊红(2%的伊红，用含0.2%福尔马林的自来水配
11、制，为黄色)流动水冲洗100%的酒精二甲苯用封固剂封固注:苏木素-伊红的染色时间应根据室温调节保证色温。A.2.6 组织学检查:依照病理组织学检查方法，用光学显微镜亮视野检查。A.3 结果判断结果判断可依据如下特征:一一被空泡围绕的大量淀粉样蛋白斑块(HE和PAS染色清晰可见); 一一基底神经节海绵状病变最显著;一一丘脑星形细胞明显增生;一一-脑组织中无炎症反应。SN/T 1708-2006 时间2X2 mm 30 s 2 mm 8 mm 2 mm 10 s 5 mm 30 s 10 mm 14 mm 5 mm 2X2 mm 3X1 mm 5 SN/T 1708-2006 附录B(资料性附录)
12、NvCJD肮蛋白免疫组织化学检测法B. 1 材料B. 1. 1 Tris/ HCl( pH B. 1.2 氯化钙(CaClzB. 1. 3 蛋白酶K(50Tris/ HCl(1 mol, pH8. 0) 氯化钙(0.1 mol) 0. 75 mL 加水至50.0 用前加蛋白酶K(14.7mg/ mL)17 B. 1.4 甲醇-双氧水(M-HzOz)甲醇PBS(pH7.4) NSS B. 1. 6 10 X PBS(pH 氯化铀(NaCl)氯化御(KCl)磷酸氢二铀(NazHP04) 磷酸二氢饵(KHzP04) L UMP nunv 却80 . 0 g 2. 0 g B. 1. 8 A瓶(生物素
13、标记抗兔扮俺)B瓶(亲和素-HRP结合物)C瓶(底物榕液)B. 2 检测步骤B. 2. 1 按常规制备脑组织(或淋巴组织)固定，包埋，切片，脱蜡、乙醇脱二甲苯直至放入水中。单抗度孵育时间室温过夜室温过夜室温过夜室温过夜PrPCKG 9) 50 PrPC3F4 ) 。PrPC6 H 4) 000 PrPClA8) 800 GFAP 室温30min 1 ) 给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对这一(或这些)产品的认可。6 SN/T 1708- 2006 B. 2. 2 将切片在PBS中，洗5minX3次。B. 2. 3 将蛋白酶K缓冲液50mL放入水浴，预热至37C时，加入蛋白酶K，并
14、立即将切片攫入洛液中，消化15min。B. 2.4 在一个不锈钢饭盒中倒入刚煮沸的蒸馆水，并立即将切片浸入水中，盖好盒盖，在121C高压20 min，而后自然冷却。该处理能增加细胞的通透性，以利抗体渗入。B. 2. 5 将切片在PBS中，洗5minX3次。B. 2. 6 将切片放入甲B. 2. 7 B. 2. 8 特异结合位点。室温作用10min。B. 2. 12 将切片在PBS中，洗5B. 2.13 滴加Dako-KitB 中，室温作用10min。B. 2.14 将切片在PB. 2.15 将切片在蒸B. 2.16 滴加Dako-Ki5 min10 min。B. 2.17 将切片在蒸馆水中放1
15、min2 min, B. 2. 18 加GlyeergelCDAKO产品)1)封片。B. 2. 19 用光学显微镜观察。B. 3 结果判断细胞免疫化学染色判为阳性。注意每次试验均1、5 min，灭活内源过氧化物酶。中，室温作用20min，封闭非，确保组织全部覆盖。将切片放湿盒中，HRP结合物)，确保组织全部覆盖。将切片放入湿盒，确保组织全部覆盖.1将切片放入湿盒中，室温作用) 给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对这一(或这些)产品的认可。7 SN/T 1708-2006 附录C(规范性附录)实验室安全及个人防护措施C.1 户体消毒措施病人尸体必须焚烧。解剖时，应尽一切可能减少血液和
16、其他陌物对解剖室的污染，并即时迅速进行消毒处理。C.2 病人体液污染消毒措施被病人的血液、其他体液、胎盘等污染，应将一切可烧毁的物品全部焚烧;对不能焚烧的物品可选用下列方法之一进行消毒z一一用1mol氢氧化纳溶液消毒1h以上。一-一用20g/L含氯硝毒剂浸抱1h以上。-一被污染的器械用1mol氢氧化铀溶液消毒1h以上后，洗净干燥，再用预真空蒸汽灭菌1240C1360C 18 mino 一一阮蛋白污染的生物安全柜和其他表面可以采用含20g/L有效氯的次氯酸铀处理1h清除污染。C.3 对含有肮蛋白物质的防护8 对含有阮蛋白物质的防护包括如下措施:一一使用专用仪器设备，亦即不与其他实验室共用仪器;一
17、一穿戴一次性防护服(如:隔离衣和围裙)和手套(对病理学家而言，要在两层橡胶手套间戴钢丝网手套); 一一使用一次性塑料制品按干废物处理并废弃;一一不能使用组织处理机(tissueprocessors)灭菌，应当使用广口瓶或烧杯替代;一一所有操作应在生物安全柜中进行;-一应特别小心以避免气搭肢的产生、意外食人、划伤或刺伤皮肤;一福尔马林固定的组织，即使延长福尔马林的暴露时间，仍应视作具有感染性;二一实验台垃圾，包括一次性手套、隔离衣和围裙，均应当高压灭菌后焚烧;一一钢丝网手套等非一次性用具，应收集起来清除污染;一一污染有阮蛋白的感染性废液应当用2mol/L的氢氧化铀(终浓度)处理1h后高压灭配二一
18、多聚甲醒熏蒸的方法不能降低阮蛋白的滴度，肮蛋白对紫外线照射具有抵抗力。生物安全柜须用标准方法来清除污染(如:甲醒蒸气).以灭活其他可能存在的感染性物质;一阮蛋白污染的生物安全柜和其他表面，可以通过反复用2mol/L的氢氧化铀浸温1h.然后用水清洗来进行清除污染。HEPA过滤器应当定期高压灭菌并焚烧;一一用具应当在2mol/L的氢氧化锅中浸泡1h.然后用水彻底清洗再进行高压灭菌;SN/T 1708-2006 一-不能高压灭菌的用具可以反复用2mol/L的氧氧化纳润湿超过1h来进行清洁，并要求用水冲洗以清除残留的氢氧化铀。C.4 个人防护措施按照GB19489要求进行。9 CON-chhFHZ 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出入境口岸新变异型克雅病监测规程SN/T 1708-2006 导中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷9峰开本880X12301/16 印张I字数17千字2006年4月第一版2006年4月第一次印刷印数1-2000:rc 定价10.9峰书号:155066.2-16764 SN/T 1708-2006
