1、GB/T 5413.20一1997前言本标准参照瑞士雀巢公司的方法.本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85。本标准由中国轻工总会提出.本标准由全国乳品标准化中心归口.本标准负责起草单位s雀巢中国投资服务有限公司、国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位，卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司。本标准主要起草人z张福才.304 中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉胆碱的测定Mllk powder and formula f佣dsfor infant and young chlldren - Determlnstlon of cboline 1 范
2、围本标准规定了胆碱的测定。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中胆碱的测定.本方法最低检测限度约为2mg/100g.2 方法原理试样经酸解，过滤，酶氧化后，比色测定。3试JGB/T 5413.20一1997代替GB541385 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯s所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水.3. 1 O. 05mol/L Tris缓冲液(pH8.0):含质量分数0.05%的笨酷.在注入约500mL蒸饱水的1000mL容量瓶中溶入6.057g三经甲基氨基甲烧和0.5g苯盼，再用蒸馆水稀释至刻度。如需要可用6mol/L的盐酸调pH至8.0。3. 2 用于酶反应的发色剂在一个50mL容量
3、瓶内溶入7.81mg胆碱氧化酶(12.8U/mg) ,1. 31 mg过氧化酶(190U/mg)和7. 5mg 4-氨基安替比林，用Tris缓冲癖液(3.1)稀释至J度。3.3 标准溶液z含胆碱氢氧化物250g/mL。在100mL容量瓶中溶入523mg胆碱酒石酸氢盐，用蒸馆水稀释至刻度。用J度吸管吸取该溶液lOmL于100mL容量瓶中并用蒸饱水稀释至刻度。3.4 氮氧化销溶液g质量分数为60%.3.5 盐酸:c(HCll为3mol/L。3.6盐酸:c(HCI)为lmol/L.4 仪器常用实验室仪器及24. 1 回流抽提器。4.2 层析柱，长25cm，内径1cm。4.3 分光光度计.国东技术监督
4、局1997-05-28批准1998-09-01实施305 GB/T 5413. 20-1997 5 操作步骤5. 1 准备试样用混合或研磨的方法将样品均匀化，以O.Olg的精确度准确称量样品，使其胆碱含量约为llOmg(以氢氧化物计算。5. 1. 1 固体样品称取5g混合均匀的样品于250mL的平底磨口烧瓶中，加入30mL盐酸(3.们，搅拌。5. 1.2 液体样品称取20日混合均匀的样品于250mL平底磨口烧瓶中，加入lOmL盐酸(3.5) .搅拌。5.2 水解将装有样品的容器与回流冷凝器连接，在70C水浴中加热弛，同时磁力搅拌。冷却。用氢氧化销溶液(3.4)调pH3.43. 6。若必要的话再
5、次冷却，并转入50mL容量瓶中，用蒸馆水稀释至刻度。5.3 过滤过滤水解液(5.2)。滤液应是澄清的，如果不澄清，通过O.45m的滤膜再次过滤。如果因样品的性质得不到澄清滤液，或者过滤困难，建议调pH值至44.5.而不是3.43. 6(见5. 2)。5.4 酶反应每个试样准备3支试管仙，B，C)，按表I加入试剂。表1mL 试剂试管A试管B试管C试剂空白滤液空白试样 待分析滤液O. 100 0.100 蒸懵水0.100 3.00 发色剂3.00 3.00 用密封保护膜盖住试管，振荡.把试管置于37C水浴中保温反应lOmin。5.5 比色测定调整分光光度计波长至505nm.用蒸馆水作空白.5.6
6、标准曲线用J度吸管移2.4.6.8mL标准溶液(3.3)于4支10mL的容量瓶内，用蒸馆水稀释至刻度。准备6支试管，一个试管用作试)lj空白(A).另五支试管由1至5编号，分别用于标准溶液和标准溶液的囚个稀释度。按表2加入试剂。表2mL 试剂管A管1管2管3管4管5稀稀度1(50g/mLlO. 100 稀释度2000g/mLl。.100 稀稀度3050g/mL)0.100 稀释度4(200g/mL)O. 100 标准溶液(250g/mLl0.100 蒸馆水O. 100 发色弗l3 3 3 3 3 3 306 GB/T 5413. 20-1997 用密封保护膜盖住试管，振荡，置试管于3TC水浴中
7、保温反应lOmin，然后按5.5以后的步骤操作。6 分析结果的寝述6. 1 净透光率的计算通常非新鲜配制的试剂会产生轻微的颜色，且由于水解作用滤液也不是无色的，为了除去这些干扰因素，应从全透光率中减去各自的空白透光率(管A和管B)。式中，A净透光率，A，ot-全透光率(管C), Abl-试剂透光率(管A), A，-拍摄液透光率(管B)。A = A101 - Abl -A四Abl和A.不应大于全透光率的20%.对于标准曲线.A民=0。6.2 结果的计算( 1 ) 在标准曲线上查出净吸光值的位置，并记下相应的浓度c.以每100g样品中胆碱氢氧化物的毫克数表示的胆碱含量，按式(2)计算g样品中胆碱的含量(m川Og)=马王注。式中，c一一自标准曲线上查得的胆碱浓度，何/mL，V一水解液被稀释的体积(通常为50mL).mL , m-一一样品的质量.g0 7 允许缝 ( 2 ) 用同一方法对同一样品，在同样操作条件下(同一操作者，同样的仪器，同一实验室，较短的时间间隔).测得的两次独立结果差值不应超过两次结果平均值的8%。307
