1、ICS 67050X 04备案号：25147-2008中华人民 共禾口S日国商业行业标准SBT 105012008畜禽肉中地西泮的测定高效液相色谱法Determination of diazepam in muscle of livestock and poultryHigh performance liquid chromatography2008-09-27发布 2009-03-01实施中华人民共和国商务部 发布刖 罱本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国商务都提出并归口。本标准由中华人民共和国商务部屠宰技术鉴定中心负责起草。本标准主要起草人：侯晓林、宋德华、金社胜、刘文娟。本
2、标准委托商务部屠宰技术鉴定中心负责解释。SBT 1050120081范围畜禽肉中地西泮的测定高效液相色谱法本标准规定了畜禽肉中地西泮的高效液相色谱(HPLC)测定方法。本标准适用于鸡肉和猪肉中地西泮残留的检测。本方法的最低检测限为001 mgkg。2规范性引用文件SeT 105012008下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6
3、682-2008，ISO 3639：1987，MOD)3方法原理被检样品组织中地西泮经乙腈提取，固相萃取净化，用反相高效液相色谱一紫外检测器进行检测，采用外标法定量。4试捆与材料除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，水为符合GBT 6682规定的二级水。41乙腈：色谱纯。42甲醇；色谱纯。43乙酸铰。44异丙醇。45乙酸。46高氯酸。47三乙胺。48地西泮标准品。49 C18固相萃取小柱：500 mg，3 mL。或相当者。410 1高氯酸溶液：取1 mL高氯酸，用水稀释至100 mL。411微孔针筒式滤膜02zm。412标准溶液4121标准贮备液分别精密称取500 mg(根据纯度折算成纯
4、物质)地西泮标准品，用乙腈溶解并于50 mL容量瓶定容，一18避光可稳定保存6个月。4122标准工作液临用前，取上述标准贮备液，用1高氯酸水溶液稀释成浓度为005-gmL，010-gmL，020-gmL，050 pgmL和100-gmL的标准工作液，进样测定。413淋洗液：甲醇：水：三乙胺(36 t 65；01，体积比)。】SBT 1050120085仪器与设备51配有紫#b-可见光检测器的高效液相色谱仪。52天平：感量001 g。53天平：感量0000 1 g。54冷冻离心机。55组织匀浆机。56旋转蒸发仪。6样品制备肌肉组织样品经高速组织匀浆机匀浆。保存于一20冰箱待用。7分析步骤71样品
5、处理711提取称取5 g(准确至001 g)匀浆试样，加无水硫酸钠5 g，用20 mL乙腈提取，超声15 rnin，4 000 rmin离心5 min，取上清液，再用20 mL乙腈重复提取一次，超声，离心，收集两次上清液于鸡心瓶中，加10 mL异丙醇，50减压旋转蒸至近干，用5 mL甲醇一水(2：8，体积比)溶解。712净化c。固相萃取柱依次用5 mL甲醇，5 mL水，5 mL甲醇一水(2：8，体积比)平衡，将上述复溶液上样：再用5 mL淋洗液(413)洗涤鸡心瓶，用鸡心瓶洗涤液洗涤小柱；最后用5 mL甲醇一乙酸(95：5，体积比)洗脱样品残留，收集洗脱液。将收集的洗脱液于50水浴氮气吹干，用
6、1高氯酸水溶液1 mL，正己烷2 mL复溶，静置分层后取下层水相过02 Mm滤膜，供HPLC(高效液相色谱)分析。72测定721液相色谱参考条件色谱柱：Grace Smart RPl8(25046 mm，5pm)或相当者。流动相：002 mol乙酸铵水溶液：乙腈(40：60，体积比)。流速：10 mLmin。检测波长：230 nm。进样量：50 pL。722标准曲线分别配制浓度为005 pgmL，010#gmL，020 MgmL，0，50 pgmL和100 pgmL的5个地西泮标准工作溶液，然后依据上述色谱条件，每个标准工作液迸样量50 pL，测定其峰面积，以标准液浓度对应峰面积做校正曲线，求
7、出线性回归方程和相关系数。标准溶液的色谱图参见图A1。723样品测定在上述色谱条件下，吸取已净化的样品溶液50“L，进行HPLC分析。样品中待测组分的浓度按式(1)计算。X：cv式中：x样品中待测组分的浓度，单位为毫克每千克(mgkg)；c由标准瞳线得出的样液中地西泮的浓度，单位为微克每毫升(pgmL)2m检测样品取样量，单位为克(g)；y样品定容体积，单位为毫升(mL)。对测定结果用平行样测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位。8精密度在重复性条件下获得的两个平行测定结果的相对偏差不大于lo。SBT 1050卜一2008SBT 105012008附录A(资料性附录)地西泮标准品色谱图图A1地西泮标准品色谱图(地西泮标准品保留时间为6287 min)
