1、G8/T 5413. 32 1997 前去口乳粉中含有的硝酸盐、亚硝酸盐主要来源于原料乳中的人为掺假和牛饲料，对其含量的测定国际上广泛采用钢还原和光度分析法。本标准等同采用国际乳品联合会标准IDF95Ad 984(乳粉一硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定(铺还原和分光光度法l中的铺柱再生部分稍做修改。其他内容均相同。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85. 本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位z卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准主要起草
2、人z黄敏、回阅、:X1J波、王芸、王心祥。355 中华人民共和国国家标准乳粉硝酸盐、亚的测定Milk powder-Determlnatlon of nitrate and nitrlte contents 1 范围本标准规定了采用锅还原和光度分析法测定硝酸盐利亚硝酸盐的方法。本标准适用于乳粉中硝酸盐和亚硝酸盐的测定。本方法检出极限分别为s硝酸盐1.5mg/kg;亚硝酸盐0.2mg/kgo2 方法原理GB/T 54 13. 32-1997 代替GB5413-85 将乳粉样品溶解于水中，沉淀脂肪和蛋白后，进行过滤。用镀铜铺粒使部分滤液中的硝酸盐还原为亚硝酸盐。在未还原的滤液和己还原的滤液中，加入
3、磺胶和N-1茶基-乙二胶二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在538nm波长下测其吸光度。将测得的吸光度与亚硝酸纳标准系列溶液的吸光度进行比较，就可计算出样品中的亚硝酸盐含量和硝酸盐还原后的亚硝酸盐总量z从两者之间的差值可以计算出硝酸盐的含量。3试弗j测定用水应是不含硝酸盐和亚硝酸盐的蒸馆水或去离子水。注.为避免镀铜铜柱(4.10)中濡入小气泡，柱制备(5.1)、柱还原能力的检查(5.2)和柱的再生(5.3)时所用的燕馆水或去离子水，最好是刚煮拂过并冷却至室湿的。3. 1 镀铜铺粒g直径。.30. 8mm。也可按下述方法制备。将适量的铸棒放入烧杯中，用40g/L的硫酸铺(CdSO， 8H2
4、0)溶液浸没铮棒。在24h之内，不断将铮棒上的海绵状锅刮下来。取出铸棒，i1!;出烧杯中多余的溶液，剩下的溶液能浸没锅即可。用蒸馆水冲洗海绵状铺23次，然后把铺移入小型搅拌器中，同时加入400mLO.1moljL的盐酸.搅拌几秒钟，以得到所需粒度的颗粒。将搅拌器中的锯粒连同溶液一起倒回烧杯中，静止几小时，这期间要搅拌几次以除掉气泡oj顷出大部分溶液，立即按5.1. 1至5.1. 8中叙述的方法镀铜。3. 2 硫酸铜溶液g溶解20g五水硫酸铜(CuSO， 5H20)于水中，稀释至1000mL。3. 3 盐酸-氨水缓冲溶液，pH9.69. 7。用600mL水稀释75mL浓盐酸P201.199/mL
5、.质量分数约为38%J。混匀后，再加入135mL浓氨水P200.91日/mL.质量分数等于25%的新鲜氨水。用水稀释至1000mL.混匀。用精密pH计调pH值为9.609. 700 3. 4 盐酸溶液，c(H+)约为2mol/L。用水将160mL的浓盐酸(P201.98g/mL)稀释至1000mL。3. 5 盐酸溶液，c(H可约为O.lmol/L。将50mL2mol/L的盐酸溶液用水稀释至1000mL。3. 6 沉淀蛋白和脂肪的溶液g3. 6. 1 硫酸铮溶液z将53.蚀的七水硫酸镑(2nSO， 7H20)溶于水中，并稀释至100mL。3.6.2 亚铁氟化饵溶液:将17.2日的三水亚铁氟化御K
6、，Fe(CN)， 3HiOJ溶于水中，稀释至100mL。3.7 EDTA溶液z用水将33.5g的二水乙二胶四乙酸二锅(Na2C，oH14N，O， 2H，O)溶解，稀释至1000mLo 国家技术监督局1997-05-28批准1998-09-01实施356 GB/T 5413. 32-1997 3.8 显色液1:体积比450: 550盐酸溶液。将450mL浓盐酸加入到550mL水中，冷却后装入试剂瓶中。3. 9 显色液Z:5g/L的磺胶溶液。在75mL水中加入5时，浓盐酸，然后在水浴上加热.用其溶解0.5g磺胶(NH，C，凡S02NH。冷却至室温后用水稀释至100mL。必要时进行过滤。3. 10
7、显色液3:19/L的茶胶盐酸盐溶液。将O.19的N-l-茶基-乙二胶二盐酸盐(C，oH，NHCH2CH2NH，2HCl)溶于水，稀释至100mLo必要时过滤。注g此榕液应少量配制，装于密封的棕色瓶中.冰箱中2-5C保存。3. 11 亚硝酸销标准溶液:相当于亚硝酸盐的浓度为O.OOlg/Lo将亚硝酸销(NaNO，)在1l0120.C的范围内干燥至恒重。冷却后称取0.150g.溶于1000mL容量瓶中，用水定容。在使用的当天配制该溶液。于1000mL容量瓶中，取10mL上述溶液和20mL缓冲溶液(3.3) .用水定容。1mL该标准溶液中含1.00月的NO;-0 3.12 硝酸饵标准溶液，相当于硝酸
8、盐的浓度为0.0045g/L将硝酸饵(KN03)雀1l0120C的温度范围内干燥至恒重，冷却后称取1.4680g.溶于1000mL容量瓶中，用水定容。在使用当天，于1000mL的容量瓶中，取5mL上述溶液和20时，缓冲溶液(3.3) .用水定容。lmL的该标准溶液含有4.50吨的NO;0 4 仪器所有玻璃仪器都要用蒸馆水冲洗，以保证不带有硝酸盐和亚硝酸盐。4. 1 分析天平。4.2 烧杯:100mL。4.3 锥形瓶:250mL. 500mL 4.4 容量瓶dOOmL、500mL和1000mLo4.5 移液管:2mL、5mL、10mL、20mL。4.6 吸量管:2mL、5mL、10mL、25mL
9、。4. 7 量筒:根据需要选取。4.8 玻璃漏斗:直径约9cm，短颈。4.9 定性滤纸z直径约18cmo4.10 还原反应柱z简称铺柱，如图1所示。4. 11 分光光度计z测定波长538nm.使用12cm光程的比色皿。4.12 pH 计，精度为士0.01.使用前用pH7和pH9的标准溶液进行校正。357 GB/T 5413. 32-1997 的。【材。自磕璃丝棉辑。问bHU。mNnu止在英硝酸盐还原装置图1操作步骤5 5. liJ备镀铜锅柱5. 1. 1 置锅粒(3.1)于锥形烧瓶(4.3)中(所用锅粒的最以达到要求的锚柱高度为准)。5. ,. 2 加足量的盐酸(3.4)以浸没锅粒，摇晃几分钟
10、。5. ,. 3 湾出溶液，在锥形烧瓶中用水反复冲洗，直到把氯化物全部冲洗掉。5. ,. 4 在锅粒上镀铜。向锅粒中加入硫酸铜溶液(3.2)(每克铺粒约需2.5mL)，摇晃lmino5. ,. 5 港出液体，立即用水冲洗镀铜锅粒，注意铺粒要始终用水浸没。当冲洗水中不再有铜沉淀时即可停止冲洗。5. .6 在用于盛装镀铜锅粒的玻璃柱的底部装上几厘米高的玻璃纤维见图1)。在玻璃柱中灌入水，排净气泡。5. ,. 7 将镀铜锅粒尽快地装入玻璃柱，使其暴露于空气的时间尽量短。镀铜锅粒的高度应在1520cm的范围内。注1 避免在颗控之间遗留空气.Z 注意不能让液面低于镀铜锅粒的顶部。5. 1. 8 新制备柱
11、的处理。以不大于6mL/min的流量将由750时，水、225mL硝酸仰标准溶液(3.12)、20mL缓冲溶液(3.3)和20mLEDTA溶液(3.7)组成的混合液通过刚装好锅粒的玻璃柱，接着用50mL35S 水以同样流速冲洗该柱。5. 2 检查柱的还原能力GB/T 5413. 32一1997这种检查每天至少要进行两次，一般在开始时和一系列测定之后。5. 2. 1 用移液管将20mL的硝酸锦标准溶液(3.12)移入还原柱顶部的贮液杯中，再立即向该贮液杯中添加5mL缓冲溶液(3.3)。用一个100mL的容量瓶收集洗提液。洗提液的流量不应超过6mL/mino5.2.2 在贮液杯将要排空时，用约15m
12、L水冲洗杯壁。冲洗水流完后，再用15mL水重复冲洗。当第二次冲洗水也流完后，将贮液杯灌满水，并使其以最大流量流过柱子。5. 2. 3 当容量瓶中的洗提液接近100mL时，从柱子下取出容量瓶，用水定容至刻度，混合均匀。5. 2. 4 移取10mL洗提液于100mL容量瓶中，加水至60mL左右。然后按5.8. 2、5.8.3和5.8. 4操作。5. 2. 5 根据测得的吸光度，从标准曲线(5.8.5)上可查得稀释洗!lt液(5.2.4)中的亚硝酸盐含量(严g/mL)。据此可计算出以百分率表示的柱还原能力(N02的含量为O.067g/mL时还原能力为100%)。如果还原能力小于95%，柱子就需要再生
13、。5.3 柱子再生柱子使用后，或铺柱的还原能力低于95%时，按如下步骤进行再生。5. 3. 1 在100mL水中加入约5mLEDTA溶液(3.7)和2mL盐酸溶液(3.5)。以10mL/min左右的速度过柱。5.3.2 当贮液杯中混合液排空后，按顺序用25mL水、25mL盐酸溶液(3.5)和25mL水冲洗柱子。5. 3. 3 检查铺柱的还原能力，如低于95%，要重复再生。5. 4 样品的称取和溶解5. 4. 1 液体乳样品:量取90mL样品于500mL锥形瓶中，用22mL50 55.C的水分数次冲洗样品最筒，冲洗液倾入锥形瓶中，混匀。5.4. 2 粉祥品:在100mL烧杯中称取10g样品，准确
14、至O.OOlg。用112mL5055.C的水将样品洗入500mL锥形瓶中，混匀。5. 4. 3 乳清粉及以乳清粉为原料生产的婴儿配方粉样品:在100mL烧杯中称取10g样品，准确至O.OOlgo用112mL5055.C的水将样品洗入500时，锥形瓶中，混匀。用铝街纸盖好锥形瓶口，将溶好的样品在沸水中煮15min，然后冷却至约50.C0 5.5 脂肪和蛋白的去除5. 5. 1 按顺序加入24mL硫酸镑溶液(3.6.1)、24mL亚铁氟化饵溶液(3.6.2)和40mL缓冲溶液(5.3)，加入时要边加边摇，每加完一种溶液都要充分摇匀。5. 5. 2 静止15minlh。然后用滤纸(4.9)过滤，滤液
15、用250mL锥形瓶收集。5. 6 硝酸盐还原为亚硝酸盐5. 6. 1 移取20mL滤液于100mL小烧杯中，加入5mL缓冲溶液(3.3) ，晃匀，倒入锅柱顶部的贮液杯中，以小子6mL/min的流速过柱。洗提液(过柱后的液体)接入100mL容量瓶中。5. 6. 2 当贮液杯快要排空时，用15mL水冲洗小烧杯，再倒入贮液杯中o冲洗水流完后，再用15时，水重复刊次。当第二次冲洗水快流完时，将贮液杯装满水，以最大流速过柱。5. 6. 3 当容量瓶中的洗提液接近100mL时，取出容量瓶，用水定容，混匀。5. 7 测定5.7.1 分别移取20mL洗提液(5.6.3)和20mL滤液(5.5.2)子100mL
16、容量瓶中，加水至约60mLo5.7.2 在每个容量瓶中先加入6mL显色液1(3.剖，边加边混，再加入5mL显色液2(3.9)。小心混合溶液，使其在室温下静置5mn，避免直射阳光。5. 7. 3 加入2mL显色液3(3.1的，小心混合，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。用水定容至刻度.混匀。359 GB/T 5413.32-1997 5. 7. 4 在15min内用538nm波长，以空白试验液体为对照测定上述样品溶液的吸光度。5.8 标准曲线的制作5. 8. 1 分别移取或用滴定管放出)0.2.4.6.8.10.12.16和20mL亚硝酸纳标准溶液(3.11)于九个100mL容量瓶中。在每
17、个容量瓶中加水，使其体积约为60mL.5.8.2 在每个容量瓶中先加入6mL显包液1(3.8).边加边混;再加入5mL显色液2(3. 9)。小心混合榕液，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。5.8.3 加入2mL显色液3(3.10).小心混合，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。用水定容至刻度，混匀。5. 8.4 在15min内，用538nm波长，以第一个溶液(不含亚硝酸销为对照测定另外八个溶液的吸光度。5.8.5 将测得的吸光度对亚硝酸根质量浓度作图。亚硝酸根的质量浓度可根据加入的亚硝酸纳标准溶液的量计算出。亚硝酸根的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标。亚硝酸根的质量浓度以用/100m
18、L表IJ 0 6 分析结果的寝述6. 1 亚硝酸盐含量20000 X c 样品中亚硝酸根含量(mg/kg)=-z女77. . . ( 1 ) 式中:Cl-一根据滤液(5.5.2)的吸光度(5.7.4).从标准曲线上读取的NO，的浓度，用/100mL，m 样品的质量(液体乳的样品质量为90X1.030g).g , V，一-所取滤液(5.5.2)的体积(5.7.1).mL.样品中以亚硝酸纳表示的亚硝酸盐含量W(NaNO,) = 1. 5 X耳气NOJ)式中:W(NO;-)-样品中亚硝酸根的含量.mg/kg，W(NaNO,) 样晶中以亚硝酸纳表示的亚硝酸盐的含量.mg/kg.报告测定结果准确至O.1
19、mg/kg. 6.2 硝酸盐含量( 2 ) 棚中硝酸根含量(mg/k户1.35 X (号等芒-W(NO叫. . . . ( 3 ) 式中zCZ)一根据洗提液(5.6.3)的吸光度(5.7.4).从标准曲线上读取的亚硝酸根离子浓度，g/100mL. m一-样品的质量，g;V，一一所取洗提液(5.6.3)的体积(5.7.1).mL，W (NO;-)一一根据式。)计算出的亚硝酸根含量。若考虑柱的还原能力，样品的硝酸根含量(mg/kg)= 1. 35 X (鸣等许!- W (NO;-) 式中;r一一测定一系列样品后柱的还原能力。样品中以硝酸锅计的硝酸盐的含量W(NaNO,) = 1. 371 X研，(
20、NO;-) 式中;W (NO;-)一二样品中硝酸根的含量.mg/kg，W (NaNO，)一一样品中以硝酸销计的硝酸盐的含量.mg/kg。报告检测结果准确至0.1mg/kg.360 X 100 -r . ( 4 ) ( 5 ) GB/T 5413. 32-1997 7 允许差7. 1 重复性7. 1. 1 由同一分析人员在短时间间隔内测定的两个亚硝酸盐结果之间的差值，不应超过1mg/kg。7. 1. 2 由同一分析人员在短时间间隔内测定的两个硝酸盐结果之间的差值，在硝酸盐含量小于30mg/同时，不应超过3mg/kg;在硝酸盐含量大于30mg/同时，不应超过结果平均值的10%。7.2 重现性由不同实验室的两个分析人员对同一样品测得的两个硝酸盐结果之差，在硝酸盐含量小于30mg/同时，差值不应超过8mg/吨，在硝酸盐含量大于或等于30mg/同时，该差值不应超过结果平均值的25%。361 、
