1、E.I 中华人民共和国核行业标准EJ/T 857-94 游离甲状腺素、游离三碗甲腺原氨酸放射免疫分析试剂盒1994-07-18发布1994-12-01实施中国核工业总公司发布中华人民共和国核行业标准游离甲状腺素、游离三琪甲腺原氨酸放射免疫分析试剂盒1 主题内容与适用范围EJ/T 857-94 本标准规定了以磁性一抗为分离剂采用二步法测定游离甲状腺素（以下简称FT4）、游离三碗甲腺原氨酸（以下简称FT3）放射免疫分析试剂盒的技术条件。本标准适用于以磁性一抗为分离剂的FT4、FT3放射免疫分析试剂盒。2 引用标准GB 11806 放射性物质安全运输规定EJ/T 804 放射性同位素产品代号3 术语
2、3. 1 游离甲状腺素（FT4）、游离三碗甲腺原氨酸（FT3)体液中不与载体蛋白相结合的微量的甲状腺素（T4）、三碗甲腺原氨酸（T3）即为FT4、FT3，它们具有生物活性，并与结合态处于动态平衡。3.2二步法（皮滴定法第一步利用过量抗体与抗原充分反应F第二步用过量的标记抗原滴定抗体上剩余的结合部位的一种放射免疫分析法。3.3 磁性一抗分离剂偶联第一抗体的磁性颗粒作抗原与抗体反应后，结合相与游离相的分离剂。4 产品代号及试剂盒的组成4. 1 产品代号应按EJ/T804规定，FT4、FT3放射免疫分析试剂盒的代号为zRIA I 125 x x x x Lfi：型中国核工业总公司1994-07-18
3、批准1994-12-01实施1 EJ/T 857-94 4. 2 试剂盒组成及主要试剂特性4.2.1 试剂盒组成试剂盒组成见表1。表1试剂盒组成试剂名称FT 标记抗原1125-T, 标准FT，血清标准磁抗分离剂T，磁性一抗洗涤液洗涤液4.2.2 主要试剂特性主要试剂特性见表24.表2标记抗原特性11-T, 放射性比活度二三310MBq.nmol 1 放化纯度二注95% 表3磁性一抗分离剂特性磁性一抗T,抗体滴度1,10,000 1:20,000 亲合常数二三1.1 1010 L.mol 1 交叉反应与Ta交叉反应率小于1.0 10- 磁性位子粒度l 10 m 2 FT, 1125 T3 FT，
4、血清标准T，磁性一抗洗涤液1125 T3 二三1.7 10 二三95磁性一抗T,1: 150.000 1:200,000 二：5.5 1010 与飞交叉反应率小于2.9 10 1 10 EJ/T 857-94 表4标准血清基质特性FT4 FT, 人去激素血清澳抗阴性澳抗阴性蛋白浓度4 6 4 6 g/lOOmL 状态透明液态透明液态5技术指标技术指标见表5。表5FT4、FTa放射免疫分析试剂盒技术指标技术指标FT4 FT, 灵敏度（最小检出值0.5 运1.0 pmol. L 1 非特异结合率4二3 3NSB% 最大结合事30 45 30 45 Bo% 精密度J)批内主豆12主三12批间运16运
5、16Cv% 准确度2)三个质控血清金部在允许范围内三个质控血清全部在允许范围内相关系数的二三0.99二主o.99 1 r I 有效剂量值U三个ED值全部三个ED值全部在允许范围内ED 在允许范圈内有效期5)运二35d运35d注，1)用样品测定值的变异系数（Cv%）表示（n注10).2）用质量控制血清的测定结果表示在一次测定中低、中、高三个不同剂量的质量控制血清的测定结果，全部在允许范围（X土2SD）内。3）剂量反应曲线的相关系数几。在一次放免分析实验中，剂量反应曲线的三个有效值ED町、ED70、ED50，全部在允许范围（X土2SD)内5）在28条件下贮存从出厂日期计算有效期不少于35d。6测定
6、方法6.1 灵敏度的测定按附录AC补充件实验程序操作。以（B/T）%值为纵坐标，以FT，或FT3浓度为横坐EJ/T 857-94 标，在直角坐标纸上作剂量反应曲线。求出零管结合率（B./T) %的标准差SD(n注10），以侣。T）%的均值减去2SD所得结合率的相应剂量值，即为试剂盒的灵敏度。6.2 非特异结合率（NSB%）的测定取两支放免试管，分别加入与测定样品相同体积的FT，或FT3零标准血清、p2s_T，或p2s_ T3和正常羊血清偶联的磁性粒子悬浮液。按附录A（补充件实验程序操作。（NSB）%按公式(1）计算zNSB饵(Cn-Cb)/(C,-Cb)100 . (1) 式中：Cn一一非特异
7、管计数率，计数min;Cb仪器本底计数率，计数min;c，总放射性管计数率，计数min.6.3 最大结合率侣。%的测定按附录A（补充件实验程序操作，B。按公式（2）计算：Ba%=C。一Cn)/(C,-Cb）100. (2) 式中：C。一一零标准管计数率，计数min。6.4 精密度测定用样品测定值的Cv%表示。按附录A（补充件实验程序操作。Cv%按公式（3)i十算：Cv%=(SD/X)100 . . . . (3) 式中：SD一n次测定FT，或FT3值的标准差，nmol.L-1; X一n次测定FT，或FT3的均值（n注10),nmol.L10 6.5 剂量反应曲线6.5. 1 曲线的绘制6. s
8、. 1. 1 按附录A（补充件实验程序操作。各标准剂量点的放射性结合物(B）的结合率BIB。%按公式（4）计算(B/Bo)%=(C，一C.)/(C。C）100.(4) 式中：C，一一各标准剂量点放射性结合物也计数率，计数min。以（B/Bo)%为纵坐标，以FT，或FT3标准剂量点的浓度为横坐标，在半对数坐标纸上绘制剂量反应曲线。6. s.1. 2 按附录A（补充件实验程序操作。用带有多种放射免疫分析数据处理程序的计算机进行曲线拟合，以选择最优的数学模型绘制剂量反应曲线。6.5.2 相关系数、有效剂量值的计算由计算机数据处理，曲线拟合得Y、ED值。7 检验规则产品的质量检验，包括型式检验和出厂检
9、验二项。7. 1 型式检验产品投产前及投产后工艺流程改变、原料变更，均须按本标准第5章技术指标中规定的内容检验。7. 2 出厂检验4 EJ/T 857-94 7. 2.1全检项目试剂盒组分、包装及标志等。7.2.2 抽检7. 2. 2.1 抽检项目NSB%、Bo%、剂量反应曲线及质量控制血清测定值等。7. 2. 2. 2 抽检方式抽检采取随机取样方式。100盒以下抽取1盒，100300盒抽取2盒，300500盒抽取3盒，5001000盒抽取4盒。如果检验结果有一项不符合本标准的要求时，应重新以两倍的数量随机取样进行复检。复栓的结果，有一项指标不符合本标准的要求，本批试剂盒判为不合格。7.2.3
10、 检验证书产品应有检验合格证书，见附录BC补充件。8 标志、包装、贮存和运输8. 1 标志包括试剂盒封面标志、放射性试剂标志、试剂标志。8. 1. 1 试剂盒封面标志a. 生产厂家；b. 产品名称：c. 注册商标pd. 产品代号Fe. 产品批号pf. 批准文号；g. 注意事项；h. 有效期。8. 1. 2 放射性试剂标志a. 名称Fb. 批号Fc. 放射性活度Fd. 测量日期Fe. 放射性标志。8. 1. 3 试剂标志a. 名称Fb. 批号Fc. 浓度zd. 贮存条件Fe. 有效期。8. 2包装和运输8. 2. 1 包装5 EJ/T 857-94 定规装包输垣踊制如tm内口书B明G说合符书应明
11、说全EM安那护的品防61产及阴山有输U，可附spp，FSFF；3FF。运B去须家称号号号围理制序算标项；献证必厂名代文批范原配程计指事期文保合贮内产品晶准品用法剂作果量意效考页符应脸生产产批产适方试操结质注有参必蛐应万憧装输：包ah肌heLSKiLKL皿nL包2运贯试句孔画30800 6 Al 方法提要EJ/T 857-94 附景A游离甲状腺素、游离三碗甲醺原氨酸放射免疫分析试剂盒技术条件碰性二步法（补充件人血清中甲状腺素（T4）和三碗甲腺原氨酸（T3），绝大部分与载体蛋白CTBG.TBPA. ALb）结合。仅只有0.03%的1与0.3%的T3处于游离状态CFT4,FT3），也只有这些极微量的
12、FT4和FT3具有生物活性，并与BT4和BT3保持动态平衡，以控制人体生理代谢。本测定是采用二步法（或称反滴定法。第一步反应，取T4或T3磁性一抗与FT4或FT,血清标准或血样一起温育，FT4或FT3与T4或T3抗体充分反应，然后除去残留血清。第二步反应，加入112s_T4或112s_T3与上述T4或T3抗体的剩余结合部位反应，然后除去多余I2-T，或p2s_T3。测量结合在T4或T3磁性一抗上的放射性计数率。A2 仪器及设备一般生物化学实验室仪器设备及T计数器、放免试管、微量加样器、恒温水浴锅和磁板分离架等。A3 实验程序A3.1 按说明书要求配制有关试剂。A3. 2 试管编号。1,2为T管
13、；3,4为NSB管；56管为标准管F标准管后为待测血样管。A3. 3 操作顺序。按表Al实验顺序逐步加入相应试剂。溶液量以pL表示。7 EJ/T 857-94 表AlFT4FT3测定操作顺序表单位：L试管编号操作顺序T(l,2) NSB(3,4) 标准（516)血样(17(l)FT，、FT3血清标准(2) 血样(3)T，、T，磁性一抗(4）血清磁悬液(5) FT, 370.5h分离洗涤FT, 37lh分离洗涤( 6)11-T, ,12-T 3 1000 (7) FT，室温0.5h分离洗涤FT, 37lh分离洗涤反应完后，测T管和各管放射性计数率。100 100 100 1000 1000 10
14、00 1000 1000 1000 A3. 4 结果计算各管的计数率减去NSB管的计数率，计算出标准管和样品管的B/Bo%。见下式：B!Bo% = C.(Cp)-Cn/(C。一Cn）100. AD 式中：C.一一各标准剂量点计数率，计数min;c一一待测样品计数率，计数min。以各标准管的B/Bo%为纵坐标，FT，或FT3标准剂量点的浓度为横坐标，在半对数坐标纸上，绘制剂量反应曲线。根据待测样品的B/Bo%，在剂量反应曲线上查得样品FT，或FT3含量，见图Al和图A2。8 EJ/T 857-94 .13/Bo% 10 于80 60 40 : 20 0 ) u、，6. 1 7 l. 1 prno
15、l. L l 0. l 39. 5 FT，浓度图AlFT4剂量反应曲线9 EJ/T 857-94 B/BoY: 100 80 40 20 1. 6 3. 0 6. () 13. 4 41. 3 prnol. L-1 FT，浓度图A2FT3剂量反应曲线10 EJ/T 857-94 附录B放射免疲分析试剂鑫检验合格证书（补充件放射免疫分析试剂盒检验合格证书产品名称.批号.生产人员.放化纯比活度每瓶放射性活度标记物% MBq.nmol 1 MBq 标准晶批号抗血清批号NSB% Bo% Y ED50 ED75 ED80 质量控制血清检批号验低白指范围标实测结论室主任.组长.检验员.年月日附加说明s本标准由全国核能标准化技术委员会放射性同位素分技术委员会提出。本标准由中国原子能科学研究院同位素所负责起草。本标准主要起草人z成慧娟。中高11 军踪”咬吕
