1、ICS 65120B 46中华人民共和国国家标准农业部1068号公告一72008饲料中士的宁的测定气相色谱一质谱法Determination of strychnine in feedsGas chromatography-mass spectrometry method20080725发布 20080725实施中华人民共和国农业部发布刖 昂农业部1068号公告一72008本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料T业标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位：农业部饲料质量及畜产品安全监督检验测试中心(沈阳)、农业部饲料质量监督检验测试中心(济南)、河北省饲料监察所。本标准起草
2、人：杨希国、张建勋、王丽娜、李永才、刘全、刘笑、陈玉艳、李会荣、刘怡菲、李金超。饲料中士的宁的测定气相色谱一质谱法农业部1 068号公告一720081范围本标准规定了以气相色谱一质谱法(GC-MS)N9定配合饲料中士的宁的方法。本标准适用于配合饲料中士的宁的测定。本方法检测限为0025 mgkg，定量限为005 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT
3、 6682分析实验室用水规则和试验方法GBT 146991饲料采样GBT 20195动物饲料试样的制备3原理试样经正戊烷除脂后，在碱性条件下用乙醚提取其中的士的宁，提取液经固相萃取柱净化，吹干，用气相色谱质谱仪测定。4试剂和溶液除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。水应符合GBT 6682一级水的规定。41盐酸：优级纯。4 2正戊烷。4 3氢氧化钾。4 4乙醚。4 5冰乙酸：优级纯。4 6甲醇：色谱纯。4 7乙酸乙酯：优级纯。48氨水。4 9 1乙酸溶液：取1mL冰乙酸(45)于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。410 1乙酸甲醇溶液：取100 mL 1乙酸溶液(49)与400 mL
4、甲醇混匀。4 11 5moL氢氧化钾溶液：称取2805 g氢氧化钾(43)溶解于水，并定容至1 000mL。4 12 1molL盐酸溶液：称取90mL盐酸(41)加水至1 000mL，摇匀。4 13 5氨化甲醇：取5mI。氨水(48)于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。4 14 3 mL60 mg MCX固相萃取柱或同等效果净化柱。4 15士的宁标准溶液4 15 1士的宁标准贮备液：称取50 mg(精确到0000 01 g)士的宁标准品(纯度99o)，溶于甲醇1农业部1168号公告一72008并定容至50 mL。该贮备液每毫升含士的宁1 mg。置20保存，有效期6个月。4152士的宁
5、标准中间液：取贮备液(4131)2mL于100mI容量瓶中，用甲醇定容至刻度。该中间液每毫升含士的宁20”g。置一20。C冰箱保存，有效期3个月。4 15 3士的宁标准工作液：移取适量标准中间液(4132)于100mL容量瓶中，用甲醇稀释成浓度为01 pgmL、025 pgmL、05 pgmL、1 pgmL、4 pgmL、10 pgmI士的宁标准T作液。置4。C冰箱保存，有效期1周。5仪器和设备5 1气相色谱质谱仪。5 2分析天平：感量0000 01 g。53分析天平：感量0001 g。5 4离心村【。5 5固相萃取装置。5 6氮气吹干仪。5 7涡旋混合器。6试样制备6 1按GBT 14699
6、1采样。6 2选取有代表性的饲料样品至少500 g，按GBT 20195制备样品。7分析步骤7 1提取称取饲料2 g(精确至0001 g)，置于50mL离心管中，加入10mLltoolL盐酸溶液(412)润湿试样，加入10mL正戊烷(42)并于涡旋混合器(56)上涡旋2min，10 000 rmin离心5min，弃去上层溶液。加入8mL 5molL氢氧化钾溶液(411)及10mL乙醚(44)，涡旋提取1min，10 000 rmin离心5min，将上层有机相转人25mL离心管中。水相再加入5mL乙醚(44)重复提取一次，合并有机相，氮气吹干，用4 mL 1乙酸甲醇溶液(410)溶解残余物，备用
7、。72净化固相萃取柱先用3 mL甲醇、3 mI，水活化。备用液过柱，过柱速度不超过2 mLmin，用3 mL水和3mL甲醇淋洗固相萃取柱，抽干。用4 mL 5氨化甲醇(412)洗脱。洗脱液在50。C水浴中氮气吹干。用200“L乙酸乙酯(47)溶解，经022 pm滤膜过滤后进行测定。7 3测定731 ccMS测定参数色谱柱：HP一5MS，长30m，内径025mm，膜厚025 pm。载气：氦气(纯度99999)，流速：10mLmin。进样口温度：280。进样方式：不分流。进样量：20 nL。柱温程序：初始温度为120C，然后以25。Cmin升温速度升温至280。C，保持11 min，再以25。Cm
8、in升温至300保持4 min。EI源电子轰击能量：70 eV。，农业部1068号公告一72008离子源温度：230。四极杆温度：160。GCMS传输线温度：280。EM电压：高于调谐电压200 V。溶剂延迟：8 min。质量扫描范围(mz)：40450。选择离子监测(mz)：120、319、334、335，其中334为定量离子。7 3 2定性定量方法73 2 1定性方法样品峰与标准品峰保留时间的相对偏差不大于05，且选择离子相对强度(以mz 334为基峰)与标准品相差不大于-520。732 2定量方法选择离子监测(SIM)法计算峰面积进行单点或多点校准定量。当单点校准定量时根据样品液中士的宁含量情况，选择峰面积相近的标准工作溶液进行定量，同时标准工作溶液和样品液中士的宁响应值均应在仪器检测线性范围内。8结果计算与表述8 1试样中士的宁的含量按式(1)计算：X一等甓熹铲州，式中：x试样中士的宁的含量，单位为毫克每千克(mgkg)；C。标准溶液中士的宁含量，单位为微克每毫升(“gmL)；V试样最终定容体积，单位为毫升(mL)；P试液峰面积积分值；P。标准溶液峰面积积分值；m试样重量，单位为克(g)。82测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。9允许差2个平行测定结果的相对偏差不大于20。
