1、ICS 65020B 04中华人民 共禾口 国国家标准农业部953号公告一812007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第1部分：抗虫性Evaluation of environmental impact of genetically modified plants andits derived products Insect-resistant ricePart 1：Evaluation of insect pests resistance200712一侣发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 旨农业部953号公告一8 12007本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共
2、和国农业部科技教育司提出。本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院植物保护研究所、农业部科技发展中心。本标准主要起草人：彭于发、张永军、刘信、谢家建、厉建萌、傅强、叶恭银。农业部953号公告一812007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第1部分：抗虫性1范围本标准规定了转基因抗虫水稻对靶标害虫的抗虫性的室内检测方法。本标准适用于转基因抗虫水稻对主要鳞翅目靶标害虫的室内抗虫性检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根
3、据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 44041粮食作物种子禾谷类3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。转基因抗虫水稻transgenic insect-resistant rice通过基因工程技术将外源抗虫基因导入水稻基因组而培育出的抗虫水稻品种(系)。4要求41试验材料转基因抗虫水稻品种(系)、对应的非转基因水稻品种(系)和感虫对照水稻品种。上述材料的质量应达到GB 44041中不低于二级水稻种子的要求。42资料记录4 2 1试验地名称与位置记录试验地的名称、地址、经纬度或全球地理定位系统(GPS)地标。绘制小区示意
4、图。422土壤资料记录土壤类型、土壤肥力、排灌情况和土壤覆盖物等内容。描述试验地近3年种植情况。423试验地周围生态类型4231自然生态类型记录与农业生态类型地区的距离及周边植被情况。42 3 2农田生态类型记录试验地周围的主要栽培作物及其他植被情况，以及当地稻田常见病、虫、草害的名称及危害情况。424气象资料记录试验期间试验地降雨(降雨类型、日降雨量，以mm表示)和温度(日平均温度、最高和最低温度，以表示)的资料。记录影响整个试验期间试验结果的恶劣气候因素，例如严重或长期的干旱、暴雨、台风、冰雹等。1农业部953号公告一8 120074 3试验安全控制措施4 3 1试验地选择方圆10 km不
5、应有普通野生稻分布。4 3 2隔离措施143，21和4 3 22选一)4 321空间隔离试验地四周有100 m以上非水稻为隔离带。若试验区周边有水稻制种田，隔离距离为200 m以上。4 3 2 2时间隔离100 m范围内与其他水稻花期间隔30 d以上。433试验过程的安全管理试验地设专人管理。试验过程中如发生试验材料被盗、被毁等意外事故，应立即报告行政主管部门和当地公安部门，依法处理。4，34试验后的材料处理转基因抗虫水稻材料应单收、单贮，由专人运输和保管。试验结束后，除需要保留的材料外，剩余的试验材料一律焚毁。4 3 5试验结束后试验地的监管保留试验地的边界标记。当年和第二年不再种植水稻，由
6、专人负责监管，及时拔除并销毁转基因抗虫水稻自生苗和再生苗。5试验方法5 1供试材料准备水稻材料按当地单季水稻播种(或按水稻品种特性确定)，25 d30 d秧龄(或按水稻品种推荐秧龄)时单本移栽于田间，每份材料栽种500株，按当地常规栽插密度或供试品种推荐密度进行栽插。常规耕作管理，全生育期不喷施针对靶标害虫的杀虫剂。5 2对靶标害虫的抗虫性室内检测5 2 1对二化螟、三化螟的抗虫性5 2 1 1检测方法分别在分蘖期、拔节期、孕穗期、灌浆期，每份水稻材料随机抽取30株，每株重复测定4次。每株选取倒1叶3片4片，剪取中间约6 cm的一段，两端用浸过1苯并咪唑保鲜液的滤纸保湿，放于小试管中(长lO
7、cm，直径12 cm)，每管接1日龄幼虫12头后用棉球塞紧管口，平放，试管两端约2 C1TI用黑布遮光，置于环境温度27。C 4-1。C的养虫室内。第3 d添加同一株的新鲜叶片2片3片，6 d后检查试虫的存活与发育情况，称量存活幼虫的体重。5 2 12结果表述分别按公式(1)和(2)计算各处理的幼虫平均校正死亡率和平均体重抑制百分率。采用方差分析法比较转基因抗虫水稻品种(系)、对应的非转基因水稻品种(系)的幼虫平均校正死亡率和平均体重抑制百分率的差异。供试水稻品种(系)的总体抗二化螟或三化螟抗性级别按照附录A中表A1抗虫性级别评价标准进行表述。平均校正死亡率按公式(1)计算：MM，,-。M，,
8、100一(1)l IVlf式中：M平均校正死亡率，单位为百分数()；M供试水稻材料试虫平均死亡率，单位为百分数()；2农业部953号公告一812007M，感虫对照试虫平均死亡率，单位为百分数()。平均体重抑制百分率按公式(2)计算：P一1-虿T100(2)式中：P平均体重抑制百分率，单位为百分数()；T处理存活幼虫平均体重，单位为毫克(mg)；C对照存活幼虫平均体重，单位为毫克(mg)。5 2 2对稻纵卷叶螟的抗虫性5 2 21检测方法在分蘖期，每份水稻材料随机抽取30株，每株重复测定4次。取水稻倒1叶，在水中剪成6 cm长的叶段，取出，晾去多余水分；然后将叶段疏松地放在玻璃培养皿(直径10
9、cm)中，共放2层，每层3片4片叶段，叶片平行放置，下层叶面向上，而上层叶面向下，上层覆盖下层，叶段两端剪口紧靠脱脂棉条或滤纸条并加适量水保湿。在上、下两层叶片之间每培养皿接人1日龄稻纵卷叶螟幼虫12头，置于环境温度271。C的养虫室内。第4 d调查，记录幼虫存活与发育情况，称量存活幼虫的体重。522 2结果表述分别按公式(1)和(2)计算各处理的幼虫平均校正死亡率和平均体重抑制百分率。采用方差分析法比较转基因抗虫水稻品种(系)、对应的非转基因水稻品种(系)的幼虫平均校正死亡率和平均体重抑制百分率的差异。供试水稻品种(系)的总体抗稻纵卷叶螟抗性级别按照附录A中表A1抗虫性级别评价标准进行表述。
10、52 3对大螟的抗虫性5 2 3 1检测方法分别在分蘖期、孕穗期，每份水稻材料随机抽取30株，每株重复测定4次。水稻材料植株去外层黄叶后，选取新鲜叶鞘2片3片，剪取中间约6 cm的一段，两端用浸过1苯并眯唑保鲜液的滤纸保湿，放于中号试管中(长15 cm，直径15 cm)，每管接1日龄幼虫12头后用棉球塞紧管口，平放，试管两端约2 cm用黑布遮光，置于环境温度27。C1。C的养虫室内。第3d添加同一株的新鲜叶鞘2段3段，6d后检查试虫的存活与发育情况，称量存活幼虫的体重。523 2结果表述分别按公式(1)和(2)计算各处理的幼虫平均校正死亡率和平均体重抑制百分率。采用方差分析法比较转基因抗虫水稻品种(系)、对应的非转基因水稻品种(系)的幼虫平均校正死亡率和平均体重抑制百分率的差异。供试水稻品种(系)的总体抗大螟抗性级别按照附录A中表A1抗虫性级别评价标准进行表述。农业部953号公告一812007附录A资料性附录)抗性级别评价标准表A 1 转基因抗虫水稻对二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟和大螟的抗性级别评价标准级别 校正死亡率()，发育情况HR(高抗) 851100，存活试虫几乎不发育R(抗虫) 60185，或存活试虫的发育明显延缓MR(中抗) 40160，或存恬试虫虽发育但有所延缓MS(中感) 20 140，且存活试虫发育基本正常s(感虫) 20，且存活试虫发育正常
