1、ICS 65020B 04中华人民 共禾口 国国家标准农业部953号公告一842007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第4部分：生物多样性影响Evaluation of environmental impact of genetically modifiedplants and its derived productsInsect-resistant ricePart 4：Impacts on biodiversity20071218发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 罱农业部953号公告一842007本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由
2、全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院植物保护研究所、农业部科技发展中心。本标准主要起草人：彭于发、刘信、张永军、谢家建、厉建萌、傅强、叶恭银。农业部953号公告一8 42007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第4部分：生物多样性影响1范围本标准规定了转基因抗虫水稻对生物多样性影响的检测方法。本标准适用于转基因抗虫水稻对家蚕、柞蚕及稻田主要害虫、优势天敌、节肢动物群落结构及主要水稻病害影响的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。
3、然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 4404,1粮食作物种子禾谷类农业部953号公告一81 2007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第1部分：抗虫性GBT 157944稻飞虱测报调查规范3要求3 1试验材料转基因抗虫水稻品种(系)和对应的非转基因水稻品种(系)。3 2其他要求按照农业部953号公告一812007中“4要求”执行。4试验方法4 1试验设计小区采用随机区组设计，小区面积不小于150m2，4次重复，小区问设有10m宽隔离带，处理包括：转基因抗虫水稻品种(系)适时喷施化学农药防治非靶标害虫；转基
4、因抗虫水稻品种(系)不喷施任何化学农药；对应的非转基因水稻品种(系)统一喷施化学农药；对应的非转基因水稻品种(系)不喷施化学农药。4 2播种水稻材料按当地单季水稻播种(或按水稻品种特性确定)，2530 d秧龄(或按水稻品种推荐秧龄)时单本移栽，按当地常规栽插密度或供试品种推荐密度进行栽插。4 3调查和记录4 3 1对稻田节肢动物群落结构的影响43 1 1调查方法1农业部953号公告一8 42007直接观察法：田间调查采用盆拍法平行跳跃式取20个30个样点，每个样点取2穴，瓷盘规格为30 cmX40 cm，从水稻移栽以后，每隔7 d调查1次，记载整株水稻上各种昆虫和蜘蛛的数量、种类和发育阶段。开
5、始调查时，首先要快速观察活泼易动的昆虫和(或)蜘蛛的数量。对田问不易识别的种类进行编号，带回室内鉴定。吸虫器调查法：在水稻苗期、分蘖期、扬花期和乳熟期各调查1次，每小区采用对角线5点取样。每点用吸虫器抽取05 mX05 m面积的水稻(全株)及其地面上的所有节肢动物。将抽取的样品带回室内清理和初步分类后，放人75乙醇溶液中保存，供进一步鉴定。4312结果记录记录所有直接调查观察到的和吸虫器抽取到的节肢动物的名称、发育阶段和数量。4313结果表述采用节肢动物群落的多样性指数、均匀性指数和优势集中性指数3个指标，分析比较转基因抗虫水稻田靶标害虫、非靶标害虫和天敌亚群落，以及捕食性天敌和寄生性天敌功能
6、团的稳定性。节肢动物群落的多样性指数按公式(1)计算。NH一一芝：P：lnP，(1)i-1式中：H_多样性指数；P：一N。N；N：第i个物种的个体数；N总个体数；节肢动物群落的均匀性指数按公式(2)计算。JHInS-(2)式中：J均匀性指数；H多样性指数；s物种数。节肢动物群落的优势集中性指数按公式(3)计算。C一(N：N)2(3)i一1式中：c优势集中性指数；N。第i个物种的个体数；N总个体数。4 3 2对稻田主要鳞翅且害虫的影响4 3 2 1调查方法采用平行跳跃法取样，每点连续调查相邻2穴4穴水稻，每小区查25点，分别在移栽后25 d30d(分蘖中期)、分蘖末期、齐穗期和乳熟期各调查1次。
7、调查指标包括每穴水稻的分蘖数、叶片数，稻螟虫(-化螟、三化螟、大螟)造成的枯鞘、枯心或白穗数，稻纵卷叶螟造成的卷叶数及卷叶程度，其他鳞翅目害虫如稻弄蝶、稻眼蝶、稻螟蛉的数量。4 3 2 2结果表述依公式(4)计算控制效果。确定转基因抗虫水稻对主要鳞翅目害虫的田问影响效果。E一旦善100(4) “2农业部953号公告一842007式中：E控制效果，用百分率表示；卜对照小区受害植株数或虫数；T供试小区受害植株数或虫数。433对稻田主要刺吸性害虫的影响4 3 3 1调查方法调查每个小区飞虱(褐飞虱、灰飞虱、白背飞虱等)和叶蝉(黑尾叶蝉等)的种类和数量，下述两种方法任选1种。方法l：参照GBT 157
8、944中本田飞虱的调查方法，即采用平行双行跳跃式法取样。每小区用盆拍法调查15点30点(Sk多选点少，虫少选点多)，每点查2穴水稻，记录稻飞虱及叶蝉的种类、虫态和数量。分别在苗期、分蘖期、孕穗期和黄熟期各调查1次。记录稻飞虱及叶蝉的种类、虫态和数量。方法2：采用机动吸虫器取样法，用对角线5点取样法，分别在苗期、分蘖期、齐穗期和黄熟期各调查1次。每个样点用吸虫器吸取025IIl2(6穴)范围内水稻全株及其地面的所有害虫。将抽取的样品带回室内清理并记录稻飞虱和叶蝉的种类、虫态和数量。4 3 32结果表述按公式(4)计算转基因抗虫水稻对主要刺吸性害虫的田间影响效果。4 4对家蚕和柞蚕的影响44，1水
9、稻花粉的采集在水稻扬花盛期，采用拍打法将转基因抗虫水稻花粉收集到磁盘中。分别将转基因抗虫水稻和非转基因对照水稻花粉取回到实验室中。采集的花粉用200目的分样筛过筛，除去花药等杂质，放人50mI，离心管，迅速用液氮冷冻后放人一20冰箱中保存备用。4 42不同浓度水稻花粉叶片的制备将转基因抗虫水稻和非转基因水稻花粉按每毫升蒸馏水1 mg、5 mg和10 mg的花粉量分别制成不同花粉浓度的悬浮液，将新鲜桑叶或柞树叶片分别放人不同浓度的花粉悬浮液中，并充分摇动，使花粉均匀分布在叶片上，然后取出晾干，制备成0粒cm2、100粒cm2、500粒cln2和1 000粒cm2花粉浓度桑叶或柞树叶片，以对应的非
10、转基因水稻花粉作对照。44 3检测方法取直径20 cm的培养皿，底部铺一湿润的滤纸，放人沾有水稻花粉的新鲜桑树或柞树叶片，然后接人20头家蚕或柞蚕的初孵幼虫(蚁蚕)，每2 d更换一次新鲜叶片。检测在25，I，：D一16：8光照条件下进行，到第7 d结束。4 44调查记录每2 d检查取食沾有水稻花粉叶片的家蚕或柞蚕初孵幼虫的存活率，检查时用毛笔尖轻触虫体无反应为死亡判断标准，第7 d对存活的幼虫称重。4 4 5结果表述根据取食沾有不同浓度转基因抗虫水稻花粉和对应的非转基因水稻花粉桑叶或柞树叶家蚕或柞蚕初孵幼虫第7 d的死亡数和幼虫体重是否存在显著差异，评价转基因抗虫水稻花粉对家蚕和柞蚕的影响。4
11、 5对水稻主要病害的影响4 51对水稻白叶枯病害的影响在灌浆期调查1次，每小区采用5点取样，每点取10穴20穴水稻，对水稻白叶枯病发生情况进行调查，分级标准按附录A中表A1执行。水稻白叶枯病的发病情况用病情指数表示，按公式(5)计算。3农业部953号公告一8 42007 I一靶100MT 7、 (5)式中：I病情指数；芝：相应病级及其株数乘积的总和；N某一病级的植株数，单位为株；R病级；M一最高病级；了调查总株数，单位为株。452对水稻稻瘟病的影响苗瘟在4叶期调查1次，采用5点取样法，每点10穴20穴，病害的分级标准按附录A中表A2执行。叶瘟在分蘖末期调查，采用5点取样法，每点10穴20穴，病
12、害的分级标准按附录A中表A2执行。穗瘟在灌浆期调查，采用平行双行跳跃式或棋盘式取样，每小区调查50穴100穴，病害的分级标准按附录A中表A3执行。水稻稻瘟病的发病情况用病情指数表示，病情指数按公式(5)计算。453对水稻纹枯病的影响分别在孕穗期、灌浆期各调查1次，每小区采用平行10点取样，每点10穴20穴。水稻纹枯病发病分级标准按附录A中表A4执行。水稻纹枯病的发病情况用病情指数表示，病情指数按公式(5)计算。4 5 4对水稻条纹叶枯病的影响在水稻分蘖盛期和孕穗期各调查1次，每小区采用5点取样，每点调查10穴20穴，调查总株数、病株数，计算病穴率及病情指数。调查结果记录按附录A中表A5执行。4
13、 55对稻曲病的影响在水稻灌浆期调查1次，每小区采用5点取样，每点调查10穴20穴水稻，调查总株数、病株数，计算病穴率。调查结果记录按附录A中表A6执行。46结果分析采用方差分析方法比较转基因抗虫水稻与对应的非转基因水稻对主要鳞翅目害虫、主要刺吸性害虫、节肢动物群落结构、主要经济昆虫以及主要病害的影响。附录A(资料性附录)病情田间调查及病情分级标准表A 1水稻白叶枯病的病情分级标准农业部953号公告一8 42007病级 抗性反应 抗性评价O 病斑长度小于接种叶片剩余长度5o；或病斑面积小于5o。 高抗(HR)l 病斑长度占接种叶片剩余长度51lzo；或病斑面积占叶面积51120N。 抗(R)3
14、 病斑长度占接种叶片剩余长度1219-Z50；或病斑面积占叶面积12125o。 中抗(MR)5 病斑长度占接种叶片剩余长度25150 o；或病斑面积占叶面积25150o。 中感Ms)7 病斑长度占接种叶片剩余长度50175oN；或病斑面积占叶面积50175o。 感(S)9 病斑长度大于接种叶片剩余长度75，1；或病斑面积大于叶面积751。 高感(Hs)表A 2水稻苗瘟、叶瘟的病情分级标准病级 抗性反应 抗性评价0 叶片上无病斑，叶片受害面积为o。 高抗(HR)1 病斑为针头状大小或稍大褐点，叶片受害面积01109。 抗(R)3 圆形至椭圆形灰色病斑，边缘褐色，病斑直径约1 r珈m2 mm，叶片
15、受害面积1110。 中抗(MR)5 典型纺锤形病斑，叶片受害面积10125。 中感(Ms)7 典型纺锤形病斑，叶片受害面积25175。 感(S)9 叶片受害面积75】或全部枯死。 高感(Hs)表A 3水稻穗瘟的病情分级标准病级 穗颈瘟受害情况 单穗受害情况 抗性评价O 病穗率低于1。 穗上无病。 高抗(HR)1 病穗率为15。 每穗损失率5(个别小枝梗发病)。 抗(R)3 病穗率为5110。 每穗损失率5115(11015左右枝梗发病)。 中抗(t)5 病穗率为10125。 每穗损失率15 l30(1513左右枝梗发病)。 中感(Ms)7 病穗率为25150。 每穗损失率30150(穗颈或主轴
16、发病，谷粒半瘪)。 感(S)9 病穗率501。 每穗损失率501(穗颈发病，大部分瘪谷或造成白穗)。 高感(HS)表A 4水稻纹枯病调查和分级标准病害评级 症 状 病情指数0级(免疫，1) 植株叶鞘和叶片未见症状。 O1级(抗病，R) 稻株基部有少数零星病斑。 01203级(中抗，MR) 病斑延伸到倒3叶(剑叶为倒0叶)。 201405级(中感，Ms) 病斑延伸到倒2叶。 401607级感病，S) 病斑延伸到倒l叶。 fi0，1809级(高感，HS) 病斑延伸到剑叶或全株枯死。 801100农业部953号公告一842007表A 5水稻条纹叶枯病病情分级和调查记载标准病害评级 病害症状 相对病指。级(高抗，HR) 无症状。 小于01级(抗病R) 有轻微黄绿色斑驳，病叶不卷曲，植株生长正常。 0-102级(巾抗，MR) 病叶上褪绿扩展相连成不规则黄白色或黄绿色条斑，病叶不卷曲或略有卷曲，生 10130长基本正常。3级(中感，MS) 病叶严重褪绿，病叶卷曲呈捻转状，少数病叶出现黄化枯萎症状。 301504级(感病，S) 大部分病叶卷曲呈捻转状，叶片黄化枯死，植株呈假枯心状或整株枯死。 大于501表A 6稻曲病田间调查表l调查日期 水稻品种 小区号 调查穴数 病穴丛数 病穴率 调查总穗数 病穗数 病穗率 总谷粒数 病粒数 病粒率6
