1、ICS 67120B 45中华人民共和国国家标准农业部958号公告一42007动物组织及动物尿液中菜克多巴胺残留检测方法气相色谱一质谱法The determination of ractopamine in edible animal tissues andanimal urine by GC-MS method20071229发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 吾农业部958号公告一42007本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准起草单位：农业部畜禽产品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：单吉浩、姜艳彬、刘勇军、蔡英华、王海、吴银良、刘兴国、
2、李艳华。1范围农业部958号公告42007动物组织及动物尿液中莱克多巴胺残留检测方法气相色谱一质谱法本标准规定了用气相色谱一质谱法测定动物组织及动物尿液中莱克多巴胺残留量的方法。本标准适用于猪肌肉、猪肝、猪尿和牛尿中莱克多巴胺残留量的测定。本标准方法的线性范围为002 ragL20 mgI，。本标准方法在猪肌肉和猪肝中的检出限为0005 mgkg，在猪尿和牛尿中的检出限为0002 mgL。2原理样品用高氯酸溶液匀浆，进行超声加热提取。在碱化的条件下用乙酸乙酯(尿液用乙酸乙酯和异丙醇)萃取，固相萃取小柱净化，用合适的溶剂洗脱，洗脱液浓缩，经N，0一双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后于气相
3、色谱一质谱联用仪上测定。外标法定量。3试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。3 1莱克多巴胺，纯度98。32氯化钠。33碳酸钠。34高氯酸。35盐酸。3 6浓氨水。3 7乙酸乙酯。3 8异丙醇。3 9甲醇：色谱级。310甲苯。3 11 衍生剂：N，0一双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)。3 12高氯酸溶液(o10 moIL)。313碳酸钠溶液(10)：取10 g碳酸钠溶解于100mL水中。314盐酸溶液1(o10tooLI，)。315盐酸溶液2(003 moLI)。316乙酸乙酯+异丙醇(70+30)。317甲醇+浓氨水(96十4)。3 18莱克多
4、巴胺标准溶液：准确称取莱克多巴胺标准品用甲醇溶解配成浓度为5 000 mgI。的标准储备液，贮于2。C8冰箱中，使用时用甲醇稀释成适宜浓度的莱克多巴胺标准使用液。319阳离子固相萃取小柱(3 mL500 m-g)。320针筒式微7L过滤膜(o45“m)。农业部958号公告一420074仪器4 1气相色谱质谱联用仪(GCMS)。4，2分析天平：感量0000 1 g。43天平：感量4-001 g。44 50 mL磨口玻璃离心管，具塞。45 5 mL磨口玻璃离心管，具塞。46超声波清洗器。47酸度计。48离心机。49振荡器。410旋转蒸发器。4+11涡旋式混合器。412恒温加热器。413 N。蒸发器
5、。414组织匀浆机。5采样(取样)51试样的制备猪肝、猪肉：取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎并使均匀。猪尿、牛尿：取适量新鲜或冷冻的空白尿液，离心后取上层并使均匀。试样放人聚乙烯瓶中于一16一20条件下保存。52试料的制备取绞碎后的供试样品，作为供试材料。取绞碎后的空白样品，作为空白材料。取绞碎后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。6分析步骤61提取611猪肌肉、猪肝试样称取猪肌肉、肝脏试样5 g(精确到001 g)，用10mI，01too。I，高氯酸溶液匀浆，置于磨口玻璃离心管中，于超声波清洗器中超声20 rain，取出置于80恒温箱中加热30 min。冷却后离心(5
6、000 rrain以上)5 rain，取上层清液。用10 mI。01 moI，L的高氯酸溶液清洗匀浆刀头后转人下层沉淀，旋涡振荡混合30 s后离，6(5 000 rrain以上)5 min，将两次上清液合并。用碳酸钠溶液(10)调pH至10o01，加入4 g氯化钠，混匀，加入10mL乙酸乙酯，振荡混合10rain后，离心或静止，吸取上层溶液于另一试管中；在下层溶液中再加入10mL乙酸乙酯，振荡混合5min，离心或静止，合并上层溶液于上述同一试管中。加入4mL 010moI。I。的盐酸溶液，旋涡混合30 S，离心(5 000 rmin以上)5rain，吸取下层溶液；在上层溶液中加入4 mL 01
7、0 moLL的盐酸溶液，旋涡混合30 s，离心(5 000 rmin以上)5 rain，合并两次下层溶液，调pH至20，作为备用液。612猪尿、牛尿试样用移液管量取50 mL尿液，加入10 mL 01 moLL的高氯酸溶液，超声20 rain。取出置于80。C恒2农业部958号公告42007温箱中加热30 min。冷却后用碳酸钠(10)溶液调pH至10。oo1。加入4 g氯化钠，混匀后，加入15mL乙酸乙酯+异丙醇(70+30)，振荡混合10min后，离一it,或静止，吸取上层溶液于旋转蒸发瓶中。在下层溶液中再加入15 mI。乙酸乙酯+异丙醇(70+30)，旋涡混合1 min，离心或静止，合并
8、上层溶液于同一旋转蒸发瓶中，50。C水浴中旋转蒸发至干。加入8 mL 003 moI，L的盐酸溶液充分溶解残留物，作为备用液。6 2净化依次用5 mL甲醇、5 mL水、5 mI，003 moLL的盐酸溶液润洗阳离子固相萃取小柱，取611和612备用液过柱，弃去流出液，依次用5 mL水、5 mL甲醇淋洗柱子，弃去流出液，用5 mL甲醇+浓氨水(96+4)洗脱，收集洗脱液，在50。C下Nz一蒸发器浓缩至干。6 3衍生化于净化、吹干的试样残渣中加入100 pL甲苯，涡旋振荡20 S。迅速加人100 pL衍生剂(BSTFA)，塞紧盖子，涡旋振荡1 min，置于80。C恒温加热器中衍生60 min。完成
9、后取出冷却至室温，待气相色谱质谱联用仪进样。64标准益线的制备准确量取适量莱克多巴胺标准储备液，用甲醇稀释成浓度分别为002rngL、005 rnuL、010mgL、050mgI，、100mgL、200ragL系列莱克多巴胺标准工作液，各取200“L在50 9C下N2一蒸发器浓缩至干，按上述63衍生化步骤进行。以莱克多巴胺浓度为横坐标，相应的定量离子峰面积积分值为纵坐标，计算标准曲线或求线性回归方程。6 5仪器参考条件6 51色谱参考条件色谱柱：5苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 mX025 mmX025 pm)，或相当者。进样口温度：300。柱温程序：初温70。C，保持06 min，然
10、后以25Cmin升至260。C，保持2 rain，再以25 4Cmin升至280保持6 min。载气：高纯氦气(99999)。流速：1o mLmin，不分流进样。进样量：10,uL。6 5 2质谱参考条件EI源：源温200。四级杆温度：160。电子能量：70 eV。接口温度：280。电子倍增器电压：1 506 V。质量扫描范围：30 u550 u。选择离子监测方式(SIM)。监测离子(Mz)：163、192、234、250。定量离子：250。6 6测定取适量试样溶液和相应的标准工作溶液进样，以试样基峰的峰面积为纵坐标，以莱克多巴胺浓度为横坐标作单点或多点校准；以试样峰与标准溶液峰相对保鹭时间定
11、性，要求试样峰中的选择离子相对强度与基峰的比例)不超过标准溶液相应选择离子相对强度平均值的-F20或3倍标准差。定量离子(基峰)为250。标准溶液和试样溶液的总离子色谱图(TIC)、选择离子色谱图(SIM)和选择离子质谱图见附录A。3农业部958号公告4200767空白实验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。7结果计算试料中莱克多巴胺的残留量以质量分数w计，单位以微克每千克(或微克每升)Evtgkg(或rzgI。)表示，按公式(1)计算：w：尘告型(1) s|式中：A试样溶液中莱克多巴胺的峰面积；A。标准溶液中莱克多巴胺的峰面积冉标准工作液中莱克多巴胺的质量浓度，肛gL；V试样溶
12、液定容体积，mL；m试料的量，g或mL。计算结果表示到小数点后两位。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的20，以大于这两个测定值的算术平均值的20的情况不超过5X为前提。附录A(资料性附录)农业部958号公告一420071Dn 16300(162 70 to 163 70)：1211005 D 九topminelon 193 00(192 70to 193 70)：1211005 D lon 234 00(233 70to 234 70)：1211005D Ilon 25000(249 70 10 250 70)：121 1005 D I 1?
13、磊F；#军；彳萧#212；22#一图A 1莱克多巴胺标准溶液(200IgL)衍生化产物的总离子色谱图(TIC)、4个选择离子质谱图(SlM)和4个选择离子色谱图图A 2空白猪肝、空白猪肝中添加莱克多巴胺标准溶液(2 Ilgkg)的TIC囤和4个选择离子色谱图一舢A农业部958号公告一42007仙”刻邋一，：一；图A3空白猪肉、空白猪肉中添加莱克多巴胺标准溶液(2鹏kg】的TIC图和4个选择离子色谱图Abundance6000图A4空白猪尿、空白猪尿中添加的莱克多巴胺标准溶液(2 pL】的TIC图和4个选择离子色谱图曲舢舢。一农业部958号公告一42007图A5空白牛尿、空白牛尿中添加莱克多巴胺标准溶液12 FgL)的TIC图、SIM图和4个选择离子色谱图B j)7 2 0，【l ii，311，；，2I I 山钠椭0i3|1 234z，Il100 300图A 6莱克多巴胺标准溶液衍生化产物的全扫描(scan)离子图
