1、遇BICS 11. 080 C 59 和国国家标准=工-、中华人民GB 15982一2012代替GB15982-1995 医院消毒卫生标准2012-11-01实施Hygienic standard for disinfection in hospitals 2012-06-29发布发布中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会今AA万陆明路附回咀酌pwuauJ 矿的fg百GB 15982-2012 目次前言.皿1 范围-2 规范性引用文件3 术语和定义4 医院消毒卫生要求.2 5 医院消毒管理要求.4 附录A(规范性附录)采样及检查方法附录B(规范性附录)试剂和培养基I G
2、B 15982-2012 目。昌本标准的全部技术内容为强制性。本标准代替GB15982-1995(医院消毒卫生标准儿本标准与GB15982-1995比较，主要变化如下:-一修改了标准的适用范围(见第1章，1995年版的第1章); -一修改了规范性引用文件(见第2章，1995年版的第2章); -一一修改了术语，增加了消毒产品，医疗器材和高度、中度、低度危险性器材，灭菌和高水平、中水平、低水平消毒，多重耐药菌的定义(见第3章，1995年版的第3章); -修改了各类环境空气、物体表面、医护人员于卫生标准(见4.1和4.2，1995年版的4.1); 一一修改了医疗用品卫生标准(见4.3，1995年版的
3、4.2); 一一修改了使用中消毒液卫生标准(见4.6，1995年版的4.3); 一一删除了元菌器械保存液卫生标准(见1995年版的4.3.2); 增加了治疗用水、防护用品、消毒剂和消毒器械、疫点(区)消毒的卫生要求(见4.4、4.5, 4. 6、4.7和4.9); 修改了污物处理卫生标准和污水排放标准(见4.8，1995年版的4.4和4.5);增加了医院消毒管理要求(见第5章); 修改了原附录A采样及检查方法(见附录A，1995年版的附录A);修改了空气采样及检查方法(见A.2，1995年版的A.1); 修改了医疗用品采样及检查方法(见A.5，1995年版的A.5);增加了治疗用水、紫外线灯、
4、消毒器械、医院污水检查方法、疫点(区)消毒效果检测方法和大肠菌群检查方法(见A.7、A.8、A.9、A.10、A.11、A.12);删除了原附录B本标准用词说明(见1995年版的附录B); 增加了新附录B试剂和培养基(见附录B)。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:浙江省疾病预防控制中心、北京市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心、北京大学第一医院、北京长江脉医药科技有限公司、杭州朗索医用消毒剂有限公司、上海利康消毒高科技有限公司、强生(上海)医疗器材有限公司、上海九誉生物科技有限公司、北京创新世纪生化科技发展有限公司、卫生部卫生监督中心、上海市疾病预防控制中心、江苏省疾
5、病预防控制中心、武汉市疾病预防控制中心、福建省疾病预防控制中心、浙江兴昌风机有限公司。本标准主要起草人:胡国庆、邓小虹、张流波、李六亿、乔宏、戴彦臻、孙建生、下雪莲、谷京宇、沈伟、徐燕、梁建生、林立旺、陈楚晖、任银萍、王志、张一鸣。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一一-GB15982-1995 Q E GB 15982-2012 医院消毒卫生标准1 范围本标准规定了医院消毒卫生标准、医院消毒管理要求以及检查方法。本标准适用于各级各类医疗机构。各级疾病预防控制机构和采供血机构按照执行。2 规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
6、凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 4789. 3食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.4食品微生物学检验沙门氏菌检验GBjT 4789. 11 食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验GB 5749 生活饮用水卫生标准GB 7918.4化妆品微生物标准检验方法绿服杆菌GB 7918. 5 化妆品微生物标准检验方法金黄色葡萄球菌GB 18466 医疗机构水污染物排放标准GB 19082 医用一次性防护服技术要求GB 19083 医用防护口罩技术要求GB 19193 疫源地消毒总则GB 19258 紫外线杀菌灯GB 50333 医院洁净手术部建筑技术规范W
7、S 310. 1 医院消毒供应中心第1部分:管理规范WS 310. 2 医院消毒供应中心第2部分:清洗消毒及灭菌技术操作规范WS 310.3 医院消毒供应中心第3部分:清洗消毒及灭菌效果监测标准WSjT 311 医院隔离技术规范WSjT 313 医务人员手卫生规范YY 0469 医用外科口罩技术要求YY 0572 血液透析和相关治疗用水消毒技术规范卫生部医院污水处理技术指南国家环境保护总局中华人民共和国药典卫生部医疗卫生机构医疗废物管理办法卫生部3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1 消毒产品disinfection product 纳入卫生部消毒产品分类目录机用于医院消毒的消毒剂
8、、消毒器械和卫生用品。1 GB 15982-2012 3.2 医疗器材medical device/beaItb care product 用于诊断、治疗、护理、支持、替代的器械、器具和物品的总称。根据使用中造成感染的危险程度，分高度危险性医疗器材、中度危险性医疗器材和低度危险性医疗器材。3.2.1 高度危险性医疗器材critical device/items 进入正常元菌组织、脉管系统或有无菌体液(如血液)流过，一旦被微生物污染将导致极高感染危险的器材。3.2.2 中度危险性医疗器材semi-critical device/items 直接或间接接触蒙古膜的器材。3.2.3 3.3 3.4
9、3.5 3.6 3. 7 低度危险性医疗器材D()-cr划caldevice/ items 仅与完整皮肤接触而不与茹膜接触的器材。灭菌sterilization 杀灭或清除医疗器材上一切微生物的处理。灭菌的元菌保证水平应达到10-60高水平消毒bigb-level disinfection 杀灭各种细菌繁殖体、病毒、真菌及其抱子和绝大多数细菌芽抱的消毒处理。中水平消毒intermediate-Ievel disinfection 杀灭除细菌芽抱以外的各种病原微生物的消毒处理。低水平消毒low-level disinf，民tion仅能杀灭细菌繁殖体分枝杆菌除外)和亲脂性病毒的消毒处理。多重耐药菌
10、muItidrug-resistant organism; MDRO 对临床使用的三类或三类以上抗菌药物同时呈现耐药的细菌。常见多重耐药菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌CMRSA)、耐万古霉素肠球菌CVRE)、产超广谱萨内酷胶酶CESBLs)细菌、耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌CCRE)C如产I型新德里金属萨内酷肢酶NDM-l或产碳青霉烯酶KPC的肠杆菌科细菌)、耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌CCR-AB)、多重耐药/泛耐药铜绿假单胞菌CMDR/PDR-PA)和多重耐药结核分枝杆菌等。4 医院消毒卫生要求4. 1 各类环境空气、物体表面4. 1. 1 菌落总数应符合表1要求。I类环境为采用空
11、气洁净技术的诊疗场所，分洁净手术部和其他洁净场所。E类环境为非洁净手术部(室h产房;导管室;血液病病区、烧伤病区等保护性隔离病区;重症监护病区F新生儿室等。皿类环境为母婴同室;i肖毒供应中心的检查包装灭菌区和元菌物品存放区;血液透析中心(室);其他普通住院病区等。凹类环境为普通门(急诊及其检查、治疗室;感染性疾病科门诊和病区。GB 15982-2012 表1各类环境空气、物体表面菌落总数卫生标准空气平均菌落数a物体表面平均菌落数环境类别CFU/cm2 CFU/皿CFU/m3 洁净手术部符合GB50333要求I类环境(150 主三5.0其他洁净场所主4.0(30min)b E类环境主主4.0(1
12、5min) 主主5.0E类环境主二4.0(5min) (10.0 lV类环境主三4.0(5min) 骂王10.0a CFU/皿为平板暴露法，CFU/m3为空气采样器法。b平板暴露法检测时的平板暴露时间。4. 1. 2 怀疑医院感染暴发或疑似暴发与医院环境有关时，应进行目标微生物检测。4.2 医务人员手4.2. 1 卫生手消毒后医务人员手表面的菌落总数应10CFU/cm2o 4.2.2 外科手消毒后医务人员手表面的菌落总数应5CFU/cm2o 4.3 医疗器材4.3. 1 高度危险性医疗器材应元菌。4.3.2 中度危险性医疗器材的菌落总数应20CFU/件(CFU/g或CFU/100cm勺，不得检
13、出致病性微生物。4.3.3 低度危险性医疗器材的菌落总数应200CFU/件(CFU/g或CFU/100cm勺，不得检出致病性微生物。4.4 治疗用水血液透析相关治疗用水应符合YY0572要求;其他治疗用水应符合相应卫生标准。4.5 防护用晶医用防护口罩、外科口罩和一次性防护服等防护用品应符合GB19083、YY0469和GB19082 要求。4.6 消毒剂4.6.1 灭菌剂、皮肤蒙古膜消毒剂应使用符合中华人民共和国药典的纯化水或无菌水配制，其他消毒剂的配制用水应符合GB5749要求。4.6.2 使用中消毒液的有效浓度应符合使用要求;连续使用的消毒液每天使用前应进行有效浓度的监测。4.6.3 灭
14、菌用消毒液的菌落总数应为oCFU/mL;皮肤蒙古膜消毒液的菌落总数应符合相应标准要求;其他使用中消毒液的菌落总数应运100CFU/mL，不得检出致病性微生物。4. 7 消毒器械4.7.1 使用中消毒器械的杀菌因子强度应符合使用要求。紫外线灯应符合GB19258要求，使用中紫GB 15982-2012 外线灯(30W)的辐射照度值应注70W/cm2。4.7.2 工作环境中消毒器械产生的有害物浓度(强度)应符合相关规定。产生臭氧的消毒器械的工作环境的臭氧浓度应10mL)血液或体液的溅污，应先用吸湿材料去除可见的污染，然后再清洁和消毒。5.5.4 人员流动频繁、拥挤的诊疗场所应每天在工作结束后进行清
15、洁、消毒。感染性疾病科、重症监护病区、保护性隔离病区(如血液病病区、烧伤病区)、耐药菌及多重耐药菌污染的诊疗场所应做好随时消毒和终末消毒。5.5.5 拖布(头)和抹布宜清洗、消毒，干燥后备用。推荐使用脱卸式拖头。5.6 通风换气和空气消毒5.6. 1 应采用自然通风和(或)机械通风保证诊疗场所的空气流通和换气次数;采用机械通风时，重症监护病房等重点部门宜采用顶送风、下侧回风，建立合理的气流组织。5.6.2 呼吸道发热门诊及其隔离留观病室(区)、呼吸道传染病收治病区如采用集中空调通风系统的，应在通风系统安装空气消毒装置。未采用空气洁净技术的手术室、重症监护病区、保护性隔离病区(如血液病病区、烧伤
16、病区)等场所宜在通风系统安装空气消毒装置。5.6.3 空气消毒方法应遵循消毒技术规范规定。不宜常规采用化学喷雾进行空气消毒。5. 7 消毒供应中心(室)的管理消毒供应中心(室)的建筑布局以及清洗、消毒灭菌和效果监测应执行WS310要求。5.8 污水污物处理5.8.1 医院污水处理设施的设计、建设和管理应符合GB18466和医院污水处理技术指南要求。5.8.2 医疗废物的管理应符合医疗废物管理条例、医疗卫生机构医疗废物管理办法的要求。5.9 擅点(区)消毒应符合GB19193要求。5 GB 15982-2012 A.1 采样和检查原则附录A(规范性附录)采样及检查方法A. 1. 1 采样后应尽快
17、对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过4h;若样品保存于0.C4.C时，送检时间不得超过24h。A. 1.2 不推荐医院常规开展灭菌物品的无菌检查，当流行病学调查怀疑医院感染事件与灭菌物品有关时，进行相应物品的元菌检查。常规监督检查可不进行致病性微生物检测，涉及疑似医院感染暴发、医院感染暴发调查或工作中怀疑微生物污染时，应进行目标微生物的检测。A. 1.3 可使用经验证的现场快速检测仪器进行环境、物体表面等微生物污染情况和医疗器材清洁度的监督筛查;也可用于医院清洗效果检查和清洗程序的评价和验证。A.2 空气微生物污染检查方法A. 2.1 采样时间I类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样
18、;lI、E、目类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。A.2.2 检测方法A. 2. 2.1 1类环境可选择平板暴露法和空气采样器法，参照GB50333(医院洁净手术部建筑技术规范要求进行检测。空气采样器法可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器。检测时将采样器置于室内中央0.8m1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30 min.房间大于10m2者，每增加10m2增设一个采样点。A. 2. 2. 2 II、田、凹类环境采用平板暴露法。室内面积30m2，设内、中、外对角线3点，内、外点应距墙壁1m处F室内面积30m2，设4角及中央5点，4角的布点部位应
19、距墙壁1m处。将普通营养琼脂平皿(抖omm)放置各采样点，采样高度为距地面O.8 m1. 5 m;采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间(ll类环境暴露15min，田、N类环境暴露5min)后盖上平皿盖及时送检。A. 2. 2. 3 将送检平皿置36.C:!:1 .C恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。A.2.3 结果计算A. 2. 3.1 平板暴露法按平均每皿的菌落数报告:CFU/(皿暴露时间)。A.2.3.2 式(1)为空气采样器法计算公式:3 采样器各平皿菌落数之和(CFU)空气中菌落总数(CFU/m3)一X 1000 ( A.1 ) 一采样速率(L/min)X
20、采样时间(min)A.3 物体表面微生物污染检查方法A. 3.1 采样时间潜在污染区、污染区消毒后采样。清洁区根据现场情况确定。6 GB 15982-2012 A.3.2 采样面积被采表面100cm2，取全部表面;被采表面注100cm2，取100cm2。A.3.3 采样方法用5cmX5 cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有元菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子l支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样14个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放人装有10mL采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。若采样物体表面有消毒剂残留时，
21、采样液应含相应中和剂。A.3.4 检测方法把采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0 mL接种平皿，将冷至40.C45 .C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20 mL, 36 .C士1.C恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。A.3.5 结果计算如式(A.2) J 2 平均每皿菌落数采样液稀释倍数物体表面菌落总数CCFU/cm2)= C A. 2 ) 采样面积Ccm2)A.4 医务人员手卫生检查方法A. 4.1 采样时间采取手卫生后，在接触病人或从事医疗活动前采样。A.4.2 采样方法将浸有元菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子一支在双手指曲面从指
22、跟到指端来回涂擦各两次(一只手涂擦面积约30cm勺，并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10mL采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米Ccm2)计算。若采样时手上有消毒剂残留，采样液应含相应中和剂。A.4.3 检测方法把采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40.C 45 .C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20 mL ,36 .C士1.C恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。A.4.4 结果计算如式CA.3)J2 平均每皿菌落数采样液稀释倍数医务人员手菌落总数CCFU/m2)二 C A.3 ) A.5 医疗器材检查方法、A.
23、5.1 采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。7 GB 15982-2012 A.5.2 灭菌医疗器材的检查方法A. 5. 2.1 可用破坏性方法取样的，如一次性输液(血)器、注射器和注射针等按照中华人民共和国药典中无菌检查法进行。对不能用破坏性方法取样的医疗器材，应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹，采样取全部表面或不少于100cm2;然后将除去手接触部分的棉拭子进行无菌检查。A.5.2.2 牙科手机z应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，将每支手机
24、分别置于含20mL25 mL采样液的元菌大试管(内径25mm)中，液面高度应大于4.0 cm，于旋涡混合器上洗涤震荡30s以上，取洗脱液进行元菌检查。A.5.3 消毒医疗器材的检查方法A. 5. 3.1 可整件放入无菌试管的，用洗脱液浸没后震荡30s以上，取洗脱液1.0 mL接种平皿，将冷至40.C45 .C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20 mL ,36 .C土1.C恒温箱培养48h，计数菌落数(CFU/件)，必要时分离致病性微生物。A.5.3.2 可用破坏性方法取样的，在100级超净工作台称取1g10 g样品，放入装有10mL采样液的试管内进行洗脱，取洗脱液1.0 mL接种平皿，计数
25、菌落数(CFU/g)，必要时分离致病性微生物。对不能用破坏性方法取样的医疗器材，在100级超净工作台，用漫有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面100cm2，取全部表面，被采表面注100cm2，取100cm2，然后将除去手接触部分的棉拭子进行洗脱，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40.C45 .C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20 mL, 36 .C土1.C恒温箱培养48h，计数菌落数(CFU/cm勺，必要时分离致病性微生物。A. 5. 3. 3 消毒后内镜:取清洗消毒后内镜，采用元菌注射器抽取50mL含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集(可
26、使用蠕动泵)送检。将洗脱液充分混匀，取洗脱液1.0 mL接种平皿，将冷至40.C45 .C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20 mL，36.C土1.C恒温箱培养48 h，计数菌落数(CFU/件)。将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜(0.45m)过滤浓缩，将滤膜接种于凝固的营养琼脂平板上(注意不要产生气泡)，置36c土1.C温箱培养48h，计数菌落数。当滤膜法不可计数时:菌落总数(CFU/件)=m(CFU/平板)x 50 .( A.4 ) 式中zm一一两平行平板的平均菌落数。当滤膜法可计数时:菌落总数(CFU/件)=m(CFU/平板)十mf(CFU/滤膜)Fhu A 式中zm一一两平行平板的平
27、均菌落数;mf一一一滤膜上菌落数。A.6 消毒剂检查方法A. 6.1 消毒剂采样采样分库存消毒剂和使用中消毒液。A.6.2 消毒剂有效成分含量检查方法库存消毒剂的有效成分含量应依照消毒技术规范或产品企业标准进行检测;使用中消毒液的有8 GB 15982-2012 效浓度测定可用前述方法，也可使用经国家卫生行政部门批准的消毒剂浓度试纸(卡)进行监测。A.6.3 使用中消毒渡染菌量检查方法A. 6. 3.1 用无菌吸管按元菌操作方法吸取1.0mL被检消毒液，加入9mL中和剂中混匀。醇类与酣类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、含腆消毒剂和过氧化物消毒剂用含0.1%硫代硫酸锅中和剂，洗必泰、季镀盐
28、类消毒剂用含0.3%吐温80和0.3%卵磷脂中和剂，醒类消毒剂用含0.3%甘氨酸中和剂，含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加入吐温80至3%;也可使用该消毒剂消毒效果检测的中和剂鉴定试验确定的中和剂。A. 6. 3. 2 用无菌吸管吸取一定稀释比例的中和后混合液1.0 mL接种平皿，将冷至40.C45 .C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20 mL, 36 .C土1.C恒温箱培养72h，计数菌落数;必要时分离致病性微生物。消毒液染菌量(CFU/mL)=平均每皿菌落数X10 X稀释倍数.( A.6 ) A.7 治疗用水检查方法血液透析相关治疗用水按YY0572进行检测。其他治疗用水按
29、照相关标准执行。A.8 紫外线灯检查方法A. 8.1 紫外线灯采样采样分库存紫外线灯和使用中紫外线灯。A.8.2 库存(新启用)紫外钱灯辐射照度值检查方法按照GB19258进行。A.8.3 使用中紫外线灯辐射照度值栓查方法A. 8. 3.1 仪器法。开启紫外线灯5min后，将测定波长为253.7nm的紫外线辐照计探头置于被检紫外线灯下垂直距离1m的中央处，待仪表稳定后，所示数据即为该紫外线灯的辐射照度值。A. 8. 3. 2 指示卡法。开启紫外线灯5min后，将指示卡置紫外灯下垂直距离1m处，有图案一面朝上，照射1min，观察指示卡色块的颜色，将其与标准色块比较。A.8.4 注意事项紫外线辐照
30、计应在计量部门检定的有效期内使用;紫外线监测指示卡应取得国家卫生行政部门的许可批件，并在产品有效期内使用。A.9 消毒器械检查方法A.9.1 杀菌因子强度测定:按消毒技术规范或企业标准规定的方法进行检测。A. 9. 2 工作环境有害物浓度(强度)测定:按消毒技术规范或相关标准规定的方法进行检测。A. 10 医院污水检查方法按GB18466规定进行检测。9 GB 15982-2012 A.11 疫点(区)消毒效果检测方法按GB19193规定进行检测。A.12 大肠菌群检查方法按照GB4789. 3进行检测。A.13 沙门菌检查方法按照GB4789. 4进行检测。A.14 Z型溶血性链球菌检查方法
31、按照GB/T4789. 11进行检测。A.15 铜绿假单胞菌检查方法按照GB7918.4进行检测。A.16 金黄色葡萄球菌检查方法按照GB7918.5进行检测。A.17 其他目标微生物检查方法按照相关检测方法进行。10 附录B(规范性附录)试剂和培养基B. 1 O. 03 mol/L磷酸盐缓冲液(0.03mol/L PBS) GB 15982-2012 称取磷酸氢二纳2.84g，磷酸二氢押1.36 g，加入到1000 mL蒸馆水中，待完全溶解后，调pH至7. 27. 4，于121oC压力蒸汽灭菌20mino B.2 洗脱液称取蛋白陈10.00g，氯化铀8.50g，吐温-801. 0 mL，加入
32、到1000 mL O. 03 mol/L磷酸盐缓冲液中，加热溶解后调pH至7.27. 4，于121oC压力蒸汽灭菌20min。B.3 生理盐水称取氯化铀8.50g，溶解于1000 mL蒸馆水中，于121oC压力蒸汽灭菌20mino B.4 革兰染色液及染色方法B. 4.1 结晶紫染色液:称取结晶紫1.00 g，溶解于20mL 95%酒精中，然后与80mL 1%草酸镀水溶液混合。B.4.2 革兰腆液:称取腆1.00 g，腆化饵2.00g，混合后加入蒸悟水少许，充分振摇，待完全榕解后，再加蒸懦水至300mL，混匀。B.4.3 沙黄复染液:称取沙黄0.25g，榕解于10mL 95%酒精溶液中，然后加
33、入90mL蒸锢水，混匀。B. 4. 4 染色方法如下:a) 将涂片在火焰上固定。b) 滴加结晶紫染色液，作用1min，水洗。c) 滴加革兰腆液，作用1min，水洗。d) 酒精脱色30S;或将酒精滴满整个涂片，立即倾去，再用酒精滴满整个涂片，脱色10So e) 水洗，滴沙黄复染液，作用1min，水洗。f) 待干镜检。B.5 人(兔)血浆取灭菌3.8%拧棱酸铀1份，加人(兔)全血4份，r昆匀静置，3000 r/min离心5min，取上清，弃血球。B.6 普通营养琼脂培养基B. 6.1 成分z蛋白陈10g、牛肉膏5g、氧化铀5g、琼脂15g、蒸馆水1000mL。11 GB 15982-2012 B.
34、6.2 制作方法:除琼脂外其他成分溶解于蒸锢水中，调pH至7.27. 4，加入琼脂，加热溶解，分装于121.C压力蒸汽灭菌20min. B.7 血琼脂培养基B. 7.1 成分:营养琼脂100mL、脱纤维羊血(或兔血)10 mL。B. 7. 2 制作方法:将营养琼脂加热熔化待冷至50.C左右，以无菌操作将10mL脱纤维血加入后摇匀，倾注平皿，置冰箱备用。B.8 需-厌氧菌培养基B. 8.1 成分:酶陈(膜酶水解)15g、牛肉膏3g、葡萄糖5g、氧化纳2.5g、L-肮氨酸o.5 g、硫乙醇酸铀0.5 g、酵母浸出粉5g、新鲜配制的0.1%刃天青溶液1.0 mL或新配制的0.2%亚甲蓝溶液0.5mL
35、、琼脂o.5 gO. 7g、蒸锢水1000 mL。B. 8. 2 制作方法:除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入蒸锢水中，微温溶解后，调pH至弱碱性，煮沸、滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调pH至6.97.3，分装后115.C压力蒸汽灭菌30min. B.9 SCDLP液体培养基B. 9.1 成分:醋蛋白陈17g、大豆蛋白陈3g、葡萄糖2.5g、氧化铀5g、磷酸氢二饵2.5g、卵磷脂1g、吐温-807 g、蒸馆水1000 mL。B. 9. 2 制作方法z将各种成分混合(如无酷蛋白陈和大豆蛋白豚可用日本多陈代替)，加热溶解后，调pH至7.27. 3，分装于121.C压力蒸汽灭菌20min，
36、摇匀，冷至25.C使用。B. 10 伊红美蓝培养基B. 10. 1 成分:蛋白陈10g、乳糖10g、磷酸二氢饵2g、2%伊红溶液2mL、0.65%美蓝溶液1mL、琼脂17g、蒸锢水1000 mL。B. 10.2 制作方法z将蛋白陈、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馆水中，调pH至7.1，分装后121.C压力蒸汽灭菌20min.临用时，以元菌操作加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50.C时，加入伊红和美蓝溶液摇匀，倾注平皿，置4.C冰箱备用。B.11 0.5%葡萄糖肉汤培养基B. 11. 1 成分:腊、10g、氯化铀5g、葡萄糖5g、肉浸液1000mL。B. 11.2 制作方法:取陈与氯化铀加入肉浸液内，微温溶解
37、后，调pH至弱碱性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调pH至7.07. 4，分装，于115.C压力蒸汽灭菌30min B.12 甘露醇培养基B. 12. 1 成分:蛋白陈10g、牛肉膏5g、氧化铀5g、甘露醇10g、0.2%澳靡香草酣蓝溶液12mL、蒸锢水1000 mL。B.12.2 将蛋白陈、氯化铀、牛肉膏加入蒸锢水中，加热溶解，调pH至7.4，加入甘露醇和澳靡香草酣GB 15982-2012 蓝混匀后，分装，于115.C压力蒸汽灭菌20min. B.13 乳糖胆盐发酵管B. 13. 1 成分:蛋白陈20g、猪胆盐(或牛，羊胆盐)5g、乳糖10g、0.04%澳甲酣紫水溶液25mL、蒸锢水
38、1000mLoB. 13.2 制作方法:将蛋白陈、胆盐及乳糖溶解于蒸情水中，调pH至7.4，加入0.04%漠甲酣紫水溶液，分装(每管10mL)，并放入一个发酵管，于115.C压力蒸汽灭菌15mino B.14 乳糖发酵管B. 14. 1 成分:蛋白陈20g、乳糖10g、0.04%澳甲酣紫水溶液25mL、蒸锢水1000 mL。B. 14.2 制作方法:将蛋白陈及乳糖溶解于蒸锢水中，调pH至7.4，加入0.04%澳甲酣紫水溶液，分装(每管10mL)，并放入一个发酵管，于115.C压力蒸汽灭菌15mino B. 15 滇甲酣紫葡萄糖蛋白脏水培养基B. 15. 1 成分:蛋白脏、10g、葡萄糖5g、2
39、%澳甲酣紫酒精溶液0.6mL、蒸锢水1000 mL。B. 15.2 制作方法:将蛋白陈、葡萄糖溶解于蒸馆水中，调pH至7.07. 2，加入2%澳甲酣紫酒精溶液，摇匀后，分装(每管5mL)，并放入一个发酵管，于115.C压力蒸汽灭菌30min.置4.C冰箱备用。B.16 绿服菌素测定用培养基B. 16. 1 陈20g、氧化娱(元水)l.4 g、硫酸饵10g、甘油10mL、琼脂18g20 g、蒸锢水1000 mL。B. 16.2 制作方法:取脏、氯化镜、硫酸饵加入水中，微温使溶解，调节pH使灭菌后为7.27. 4，分装于小试管，灭菌。B. 17 明股培养基B. 17. 1 陈5g、明肢120g、牛
40、肉浸出粉3g、蒸馆水1000 mL。B. 17.2 取上述各成分加入水中，浸泡约20min，随时搅拌，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2 7.4，分装于小试管，灭菌。B.18 注意事项B. 18. 1 双料乳糖胆盐发酵管除蒸馆水外，其他成分为乳糖胆盐发酵管的2倍;3倍浓缩乳糖胆盐发酵管除蒸锢水外，其他成分为乳糖胆盐发酵管的3倍。B. 18.2 培养基用的试管口和三角烧瓶口应用棉塞或硅胶制成的塞子，再用牛皮纸包好。B.18.3 试剂与培养基配制好后应置清洁处保存，常温下不超过1个月。培养基推荐4.C冷藏保存。NFON|N巳阁。国华人民共和国家标准医院消毒卫生标准GB 15982-2012 中* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张1.25 字数29千字2012年8月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2012年8月第一版* 21. 00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107定价书号:155066. 1-45:36月G8 15982-2012 打印日期:2012年9月7日F002
