1、中华人民共和国国家标准船舶散装运输液体化学品危害性评价规范水生生物急性毒性试验方法发布实施国家技术监督局发布前言船舶散装液体危害性评价规范系根据附则的要求为船舶散装运输的液体化学品的污染分类而进行的污染危害性评价和污染分类的方法其危害评价和分类的原则和内容系根据附则中有害液体物质分类准则附则之附录以及海洋污染科学专家组关于船运有害物质危害性评价的原则确定评价内容包括水生生物积累试验水生生物沾染试验水生生物急性毒性试验即本标准哺乳动物毒性试验休息环境舒适性影响分类程序和方法鉴于导则中危害性经口急性毒性及皮肤接触和吸入毒性均为哺乳动物试验内容故合为一个分标准另外环境舒适性的评价系根据物质对人的毒性
2、刺激性以及由其理化特性决定的对环境影响的持久性等综合评价无具体试验方法所以不单列分标准而并入评价程序和分类中本标准由中华人民共和国交通部提出本标准起草单位交通部水运科学研究所负责起草本标准起草人赵前张秀芝中华人民共和国国家标准船舶散装运输液体化学品危害性评价规范水生生物急性毒性试验方法国家技术监督局批准实施范围本标准规定了水生生物急性毒性试验方法包括鱼类急性毒性试验大型蚤急性毒性试验和卤虫急性毒性试验本标准适用于船舶散装运输液体化学品的危害性评价和污染分类引用标准下列标准所包含的条文通过在本标准中引用而构成为本标准的条文本标准出版时所示版本均为有效所有标准都会被修订使用本标准的各方应探讨使用下
3、列标准最新版本的可能性水质物质对蚤类大型蚤急性毒性测定方法水质物质对淡水鱼斑马鱼急性毒性测定方法溢油分散剂技术条件附则控制散装有毒液体物质污染规则定义本标准采用下列定义液体化学品系指那些温度为时蒸汽压力不超过的物质原理通过鱼类急性毒性试验大型蚤急性毒性试验和卤虫急性毒性试验得到化学品对水环境不同类别不同层次生物的急性毒性试验数据为化学品的综合评价提供依据本标准中鱼类急性毒性试验方法推荐斑马鱼为试验鱼种但也可采用其他鱼种如青鱼草鱼鲢鱼鳙鱼鲤鱼虹鳟等试验条件试验溶液对水溶性物质可用蒸馏水或去离子水当天配制储备液若受试物为化学稳定性很好的物质可一次配制供两天以上使用的储备液按试验要求浓度稀释储备液配
4、制不同浓度的试验溶液对难溶于水的物质可借助于低毒助溶剂将其配制成一定浓度的储备液再根据需要稀释配制成系列浓度试验液在保证试验液混合均匀的前提下尽可能减少溶剂的使用量对于自乳化性物质或借助于乳化剂能分散于水中的物质采用中分散剂毒性试验装置通过定量加入连续搅拌的方法获得均匀稳定的试验溶液仅适用于鱼类毒性试验选择半静态供液方式并增加换液次数如一次鱼类急性毒性试验方法鱼类急性毒性试验方法按大型蚤急性毒性试验方法大型蚤急性毒性试验方法按卤虫急性毒性试验方法原理在规定的条件下将卤虫卵孵化一天后的无节幼虫置于一系列已知浓度的被测物溶液中后由不同浓度溶液中无节幼虫死亡的数量求出该时间内受试物使的卤虫无节幼虫死
5、亡的浓度即半致死浓度记作试验材料稀释水使用人工海水按配方加入试剂级化学药品用蒸馏水或去离子水配制人工海水配方化学品名称最终浓度试验生物试验生物为卤虫卵孵化后的无节幼虫卤虫卵可由市场购得在干燥环境中保存每批试验应使用相同来源的卤虫卵孵化在玻璃容器中放入适量人工海水按每升水的比例加入卤虫卵尔后置于恒温箱中下恒温培养后把孵化容器从恒温培养箱中取出置于光亮处用带吸头的吸管把幼虫吸出放入已装有少量人工海水的烧杯中备用仪器设备试验容器和其他有可能与生物接触的器皿均属非生物活性物质如玻璃容器聚乙烯塑料容器等烧杯结晶皿吸管聚光灯恒温光照培养箱或恒温间其他常规试验仪器设备试验设计试验均设空白对照组对照组只加稀释
6、水不加受试物质如果使用助溶剂则要加设含助溶剂的空白以试验系列中使用的最高助溶剂浓度为准每个浓度包括对照组至少有两个重复样试验结果只有在空白样死亡率低于时有效通过预试验得到半致死浓度存在的区间以确定正式试验的浓度范围通过正式试验求出半致死浓度试验步骤卤虫卵孵化后立即收集其无节幼虫用于试验按等对数间距设置五个试验浓度试验溶液配制见试验在结晶皿中进行先把只随机吸取的幼虫移至事先装有人工海水的烧杯中在结晶皿中加入人工海水按总体积配制设定浓度的试验液待所有试验液配好后依次把烧杯中的人工海水和只幼虫倒入结晶皿中把装有试验液和幼虫的结晶皿置于恒温光照培养箱中或其他恒温环境其间保持光照强度为左右温度后中止试验记录死亡数幼虫死亡的判别方法把结晶皿置于黑色底面上手持可移动聚光光源照向结晶皿先使光线与皿底平行观察皿底一般死亡幼体都沉至皿底尔后使光源平行上移逐层观察同时记录死亡数和皿中幼虫总数判断死亡时用针触及幼虫身体无论幼虫表现出任何形式的运动都视为存活结果处理值的估算由各浓度试验结果按内插法画图估算得到也可用概率单位法和寇氏修正法求出值和置信限试验报告内容试验物质来源名称物化性质及其他有关资料卤虫来源孵化方式评价试验有效性需考虑以下内容试验物质溶液稳定性及换水次数对照组死亡率稀释水储备液试验液的配制方法试验结果数据处理结论讨论方法依据及参考文献
