1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 20756-2006 可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯毒素、甲舰毒素和氟苯尼考残留量的测定液相色i普m串联质谱法Method for the determination of chloramphenicol , thiamphenicol, and florfenicol residues in edible animal muscles , liver and aquatic products LC-MS-MS method 2006-12-31发布2007-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检班总局也士中国国家标准化管
2、理委员会战叩目。自本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口DGB/T 20756-20日6本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人自己共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人:庞国芳、林海丹、林峰、焦红、陈捷。本标准系首次发布的国家标准。I 1 范围可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲舰霉素和氟苯尼考残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T 20756-2006 本标准规定了时动物肌肉伊胞和虾中理奎甲舰毒素和哥尼考肆留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于可食动物响才
3、法阳限范曾51!士甲枫町苯尼考2 规范性引用文件下列文件中修改单(不包括勘误否可使用这些文件蜡最GB/T 6379. 1 (GB/T 6379. 1 GB/T 6379. 性与再现性的GB/T 6682 3 原理4试剂除另有说明外，所用4. 1 甲晖z色谱纯。4.2 乙酸乙醋。4.3 正己烧。4.4 氢氧化锥:25%-28%。纯，水为GB/T6682规定的飞咄瞌磕磕睡着4.5 元水硫酸铀:经650.C灼烧4h，置于干燥器中备II.J0 4.6 氯毒素、甲舰霉素和氟苯尼考标准物质:纯度二三99.5%。4. 7 j武代氯霉素内标标准榕破:100g/mL ，其随后所有的的各方研究是z总则与定义11量
4、方法重复4. 8 标准储备榕破:100g/mL.分别准确称取适量的氯霉素、甲舰霉素和氟苯尼考标准物质，用甲醇配成100g/mL的标准储备榕液，该溶液于一lS.C保存，可使用1年。4.9 i昆合标准储备榕准.1g/mL。分别准确腹取1mL氯霉素、甲枫霉素和氟苯尼考标准储备榕幢(4.由于100mL容量瓶中，用甲酶稀释至刻度。该榕掖于一18C保存，可使用6个月。4. 10 中间被度棍合标准榕被:20ng/mL.准确吸取1mL混合标准储备榕掖(4.9)子50mL容量瓶中，用水稀释至刻度。该梅液于4.C保存，可使用3个月。1 G/T 20756-2006 4. 11 内标标准储备溶破:1问/mLo准确1
5、1&取100L氧代氯霉素(d;-氯霉素)标准榕液(4.7)于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该搞液予一180C保存，可使用6个月。4.12 中间被度内括播被:20ng/mLo准确服取1mL内棉标准储备陪液(4.11)于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度。i京恪琅于40C保存，可使用3个月。4.13 基质1昆合标准工作溶破:根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，吸取一定量的中阐被度棍合标准陪掖(4.10)和中间陆度内标恪掖(4.12)，用空白样品提取配成系列地度的基质泪合标准工作榕液，内标地度均为0.3ng/mLo当天配制口4.14 滤膜:O. 2mo 5 仪器5. 1 破相色谱-串联质谱仪:
6、配有电喷雾离子掘。5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01go 5.3 离心机:4000r/mino 5.4 高速台式离心机:13000 r/mino 5.5 组织捣碎机。5.6 匀质器。5. 7 旋转蒸发器。5.8 超声波。5.9 被体?昆匀器。5.10 聚丙烯离心管:50 mL,l. 5 mL，具塞。5. 11 鸡心瓶:25mLo 5.12 比色管:50 mL，具塞。6 试样制备与保存6. 1 试样的制备取样品约500g用肉类组织捕碎机绞碎，装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记。6.2 试样的保存将试样于一180C昨箱中保存。7 测定步骤7. 1 提取称取5g试样，精确至O.01 g。
7、置于50mL聚丙烯离心管中，加入中间被度内标梅被(4.12) 75.0L， :iJn入15mL乙酸乙醋，0.45mL氢氧化镜(4.4) , 5 g无水硫酸铀，匀质提取30日，以4000 r/min 离心5min，上清液转移至50mL比色管中。另取一个50mL离心管，加入15mL乙酸乙醋，0.45mL 氧氧化锚，世搔匀质刀头10s，搅涤液移人第一支离心管中，用玻棒攒动残搓，于液体?昆匀器(5.9)上涡旋摄取1mi且，超声披提取5min，以4000r/min离心5min，上清破合并至50mL比色管中。残渣再加入15mL乙酸乙醋，重复上述操作，合并全部上清攘至50mL比色管中，用乙酸乙醋定容至50m
8、L摇匀后移取10mL乙酸乙醋提取液于一25mL鸡心瓶中，在450C旋转故缩至干。7.2 净化鸡心瓶中的残障用3mL水槽解，超声5min，加入3mL正己:民涡旋?昆合30S，静置分层，弃掉上层的正己埠，再加3mL正己皖润旋握合30S，静量分层，移取1mL水相于1.5 mL的聚丙烯离心营中，以1 3000 r/min离心5min，过O.2m滤膜后，供液相色i普-串联质i普测定cGB/T 20756-2006 7.3 色i普测定7. 3. 1 液榈色谱条件a) 色谱柱:Discovery C18色谱柱，5m，150mmX 2.1 mm(内径)或相当者;b) 柱温:40.C ; c) 流动相:甲醇十水
9、(40十60); d) 流速:0.30mL/min; e) 进样量.20L。7.3.2 质谱条件a) 离子源:电喷雾离子源;b) 扫描方式:负离子扫描;c) 检测方式:多反应监测(MRM); d) 电喷雾电压:1750 V; 的雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求;f) 辅助气温度:500.C ; g) 定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量见表1.表1氯霉素、甲舰霉素、氟苯尼考和先代氯霉素(d5-氯霉素)的质i曾参数被测物名称及内标名称定性离子对(m/z) 氯霉素320.9/257.。320. 9/152
10、.。甲枫霉素354. 0/290.。354.0/185.。氟苯尼考356. 0/336.。356.0/185.。?在代氯霉素(ds町氯霉素)326.0/157.。7.3.3 液中目色谱串联质谱测定7. 3. 3. 1 定性测定定量离子对采集时间去簇电压(m/z) /ms /V 320. 9/152.。200 -55 354.0/185.。200 一55356.0/336.。200 一55326.0/157.。200 一55碰撞能量/V 一16-26 -18 一27一14一27-26 每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物和内标物的保留时间之比，也就是相对保留
11、时间，与标准潜液中对应的相对保留时间偏差在土2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与被度接近的标准榕被中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。相对离子丰度允许的最大偏差7.3.3.2 定量测定表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差% 50 土2020-50 土2510-20 士30.s; 10 士50在仪器最佳工作条件下，对基质棍合标准工作梅被(4.13)进样，以标准瘤液中被测组分峰面积和m:代氯霉素(ds-氯霹素)峰面积的比值为纵坐标，标准搭液中被测组分被度与筑代氯毒素(ds-氯霉素)放度的比值为横坐标绘制标准工作曲线，用标
12、准工作曲线对样品进行定量，样品溶被中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。内标法定量。氯霉素、甲枫霉素、氟苯尼考和先代氧毒素(ds-氯霉素)的标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见图A.1。氯霉素、甲舰霉素和氟苯尼考的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见表B.1.3 G/T 20756-2006 7.4 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5 回收率试验阴性样品中路加标准溶攘，按7.17. 2操作，测定后计算样品添加的回收率。8 结果计算结果按式(1)计算:A . . c; . Ai , v . . 1 000 x = Cs X一斗x. ; x一一一A a d阳照叫帕随即
13、m1 000 . ( 1 ) 式中zX一一试样中被测物残留量，C，一一基质标准工作潜被A一一一试样摇液中被测A, -基质标准工作(，j一一试样搭被中Csi一一基质标准Ai一一基质标Ai -试样榕液V一一样被最9 精曹度本标准的精密以95%的可信度9. 1 重复性在重复性条件复性方程见表3和表表3氯霉素、化合物名称氯霉素甲枫霉素氟苯尼考注:m为两次测定结果的算术平表4氯霉素、甲舰霉素和氟苯尼化合物名称氯霉素甲枫霉素氟苯厄考含量范围/(g/kg)O. 050 O 1. 00 O. 5004. 00 0.500-4.00 注:m为两次测定结果的算术平均值。r=0.143m十0.0034 r=0.22
14、8m十O.187 r=0.164m十0.0519 再现性的值O. 9161gm-0. 617 现性方程(基质为动物肝脏)再现性限RR =0. 196m+0. 004 9 R =0. 292m+0. 062 2 R=0.205m十0.036如果盖值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的含量范围及再现性方程见表3和表404 GBjT 20756-2006 附录A(资料性附录)氯霉素、甲舰.素和氟苯尼考标准物质和内标物m代氯雹素的多反应监测(MRM)色i普图氯霉素、甲枫霉素和氟苯尼考标准物质和
15、内标物筑代氯草草素的多反应监测CMRM)色谱图，见图A.1, 2.18 言6 000 甲飘霉素4 000 2 000 。1. 5e4 dtnu au nunu nu 4E4HUFhu aqbzEE固A.1 0.0 3.5 4.0 4.5 t/min 3.5 4.0 4.5 t/min 3.91 CMRM)色谱图5 GB/T 20756一20066 附景B(资料性附录)回收率氯霉素、甲酬霉素和氟苯尼考的添加放度及其平均回收率的试验数据，见表B.l。最B.1靠在霉素、甲碗里毒素和氟苯尼考的添加语度及其平均回收率的试验数据(n= 10) 样品基质化合物名称添加浓度/(问/kg)平均因收率/(%)O.
16、 10 97. 8 氯霉素O. 50 97.9 1. 00 113.0 1. 00 101. 0 肌肉甲枫霉素2.00 104.0 4. 00 99. 8 1. 00 99.0 氟苯尼考2.00 100.0 4.00 108.0 0.10 100.0 氯霉素0.50 98.0 1. 00 105.0 1. 00 104. 0 flf脏甲枫霉素2.00 97. 1 4.00 77. 3 1. 00 103.0 氟苯尼考2.00 106. 0 4.00 99. 1 O. 10 118.0 氯霉素0.50 112.0 l. 00 108.0 l. 00 97.0 鱼甲E凤霉素2.00 97.3 4.
17、00 91. 7 l. 00 90.0 氟苯尼考2.00 92.9 4.00 86.2 一一一-GB/T 20756-2006 表B.1c续)样品基质化合物名称添加浓度/(g/kg)平均回收率/C%)O. 10 113.0 氯霉素O. 50 107.0 1. 00 109.0 1. 00 96. 4 虾甲矶霉素2.00 98. 9 4.00 96.1 1. 00 93.0 氟苯尼考2.00 83. 9 4.00 86.4 CON-mhDNH筒。华人民共和国家标准可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲舰.索和氟苯尼考残留量的测定液榈色i蕾帽串联质谱法GB/T 20756-2006 国白号令中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街刊号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张o.75 字数14千字2007年3月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2007年3月第一版定价14.00元* 书号:155066 1-28936 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T
