1、ICS 67.040 X 10 道2中华人民=H工./、和国国家标准GB/T 25221-2010 粮油检验粮食中麦角笛醇的测定正相高效液相色谱法Inspection of grain and oils-Determination of ergosterol in grain Normal phase high performance liquid chromatography 2010-09-26发布2011-03-01实施数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T 25221-2010 本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家粮食局提出。前言本标准由
2、全国粮油标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位:国家粮食储备局成都粮食储藏科学研究所、辽宁省粮油检验监测所。本标准主要起草人z何学超、冯永建、姜涛、钟好、肖学彬、王德谦、熊升伟、乔丽娜。I 1 范围粮油检验粮食中麦角筒醇的测定正相高效液相色谱法G/T 25221-2010 本标准规定了正相高效液相色谱法测定粮食中麦角面醇的术语和定义、原理、试剂与材料、仪器和设备、杆样、试样制备、操作步骤、结果计算与表示、重复性的要求。本标准适用于稻谷、小麦、玉米等粮食中麦角笛醇的测定。本方法检出限为0.05mg/悔。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，
3、其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 5491粮食、油料检验抨样、分样法GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 麦角笛醇ergosterol 来源于侵染粮食真菌(抱子或菌丝体)产生的游离麦角笛醇和麦角笛醇磷酸醋物质，是真菌细胞的正常代谢产物，也是真菌细胞膜组成的成分之一。4 原理试样经皂化后，用正己皖萃取麦角面醇，萃取液经脱水、浓缩和硅胶柱分离后，用高效液相色谱仪紫外检测器在282nm处检
4、测，外标法定量。5 试剂与材料除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中三级水要求，色谱用水符合GB/T 6682中一级水规定的要求。5.1 正己皖:色谱纯。5.2 异丙醇:色谱纯。5.3 正己烧:分析纯，用于提取。5.4 氢氧化御。5.5 50%氢氧化饵溶液:称取10g氢氧化饵(5.4)，加10mL水溶解。5.6 甲醇。5.7 2，6-二叔丁基对甲酣(BHT)。5.8 维生素C(抗坏血酸)。5.9 焦性没食子酸。1 GB/T 25221-2010 5.10 氯化纳。5.11 饱和氧化铀溶液:称取316g氧化铀(5.10)，加881mL 7.(配制。5.12 元水硫酸铀
5、。5. 13 流动相:正己烧(5.1)和异丙醇(5.2)V(正己炕)+V(异丙醇)=99十1J。5. 14 麦角筒醇标准品:纯度注97%。5. 15 麦角笛醇标准储备液:准确称取50mg麦角筒醇标准品(5.14)，加0.1g抗氧化剂BHT(5.7), 用异丙醇(5.2)溶解并定容至50mL，于4.C冰箱保存，可保存6个月。5. 16 麦角面醇标准工作液:根据需要吸取一定量的麦角笛醇标准储备液(5.1日，用流动相(5.13)稀释定容，配制成适当浓度的标准工作液。5. 17 滤膜:0.45m。6 仪器和设备实验室常用仪器设备，以及下列仪器设备:6. 1 高效液相色谱仪p配有紫外检测器。6.2 粉碎
6、磨:机内配0，5mm筛片。6.3 旋转蒸发器:配150mL梨形瓶。6.4 恒温水浴:可控温80.C :f: 1 .C。6.5 回流装置:配150mL磨口三角瓶。6.6 氮吹仪。7 抨样样品的轩取和分样按GB5491执行。8 试样制备试样用粉碎磨(6.2)粉碎，收集全部粉碎物混匀，装于广r:l瓶中备用。9 操作步骤9.1 提取与净化称取粉碎试样(第8章)约5g(精确至0.002g)，置于回流装置的15(mL磨口三角瓶(6.5)中，加入0.2 g抗氧化剂BHT(5.7)、O.j g维生素C(5.的、2g焦性没食子酸(5.的和25mL甲醇(5.的，于80.C恒温水浴(6.4)回流5min。从冷凝回流
7、管顶部加5mL 50%氢氧化饵溶液(5.5)，继续回流30min。回流结束后，从水浴中取下回流装置，取下冷凝固流管，把已通有氯气流的玻璃管(6.的迅速插入三角瓶通气约30s，快速塞上瓶塞，于冰水中冷却。再加入55mL饱和氧化铀溶液(5.11)和30mL正己皖(5. 3) ，塞上瓶塞剧烈振摇2min.转移到150mL分液漏斗中，静置分层，下层转移至另一个分液漏斗中，用30mL正己炕(5.3)重复提取一次，弃去下层，合并正己炕层。每次用约50mL水洗涤正己皖层，直至洗涤水呈中性为止。将正己烧层经盛有约5g元水硫酸铀(5.12)的漏斗(漏斗中塞一小团脱脂棉)，滤于浓缩瓶中，再用10mL正己炕(5.3
8、)清洗分液漏斗和漏斗，一并滤入梨形浓缩瓶(6.3)中，用旋转蒸发器(6.3)浓缩至小体积后，在氮气流(6.6)下蒸发至干。残渣用10.0mL正己烧(5.1)溶解，用0.45m滤膜(5.17)过滤，供色谱测定。9.2 色谱参考条件2 色谱柱:Inertsil硅胶柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5m;或性能相当的色谱柱。流动相流速:2.0mL/m旧ln检测波长:282n旧m。GB/T 25221-2010 9.3 测定按高效液相色谱仪说明书调整仪器参数和灵敏度，使麦角笛醇峰位与杂质组分峰位完全分离。取20L试样溶液(9.1)和麦角笛醇标准工作液(5.16)(控制标液浓度与样液中麦角笛醇的浓
9、度尽量接近)进样分析，根据峰高或峰面积用单点校正外标法定量。在上述色谱条件下，麦角笛醇标准品和试样的色谱图参见图A.1和图A.2。10 结果计算与表示10.1 结果计算试样中麦角笛醇含量(X)以毫克每千克(mg/kg)表示，按式(1)计算:A-A V一-m cd c-X . ( 1 ) 式中:Cs一一麦角面醇标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V一一试样最终定容体积，单位为毫升(mL); As一一麦角面醇标准溶液对应的峰高或峰面积;A一一试样溶液对应的峰高或峰面积;m一一样品质量，单位为克(g)。10.2 结果表示将符合重复性要求的两个独立测定值的算术平均值作为测定结果(mg/kg
10、)，保留三位有效数字。11 重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同的设备，按相同的测试方法，在短时间内对样品进行两次独立测定。当测定结果大于3mg/kg时，两个独立测试值的绝对差值应不大于这两个测定值的算术平均值的10%;当测定结果小于或等于3mg/同时，获得的两个独立测试结果的绝对差值应不大于这两个测定值算术平均值的15%。3 GB/T 25221-2010 A.1 麦角筒醇(标准品)色谱图见图A.l。1 任-7 X6 3.19 2.0e-l 1. 8e-l 1. 6e-l 1. 4e-l 1. 2e-l 口1.Oe-l 8. 0e-2 6.0e-2 4.0e-2 2.0e-2 0.0 2
11、.0e-2 2.00 4.00 附录A(资料性附录)麦角笛醇色谱图6.00 8.00 t/min 11. 59 10.00 12.00 注2标液浓度1.046g/mL，出峰时间1口1.5凹9min;抗氧化剂BHT出峰时间3.1凹9口mm圄A.1麦角笛醇标准晶色谱图A.2 小麦、稻谷、玉米中麦角笛醇色谱图分别见图A.2、图A.3、图A.401 X280 3.20 巳-12.6 2.4 2.2 2.0 1. 8 |468 8.39 4.54 、1. 4 D 1.21. 0 8. Oe-l 2.92 6. 0.,-1 4.0e-l 2.0e-l 。2.0.,-1 2.00 4.00 6.00 8.0
12、0 10.00 12.00 14.00 t/min 图A.2小麦麦角笛醇色i营图4 14.00 16.00 16.00 18.00 GB/T 25221-2010 I r-2 X280 2.2 2.0 1. 8 1. 6 1. 4 二 1. 2 1. 0 13.57 8.0e-1 6.0e-1 4.0e-1 2.0e-1 0.0 -2.0e-1 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 tlme 图A.3稻谷麦角笛醇色谱固1 w-2 x420 3.20 4.52 2.4 2.2 2.0 1. 8 1. 6 1. 4 D 1. 2 1.
13、0 8.0e-1 6.0e-1 4:0e-1 2.0e-1 0.0 -2.0e-1 2.00 4.00 6.00 8. 00 10.00 12.00 14.00 16.00 18. 00 tlm巳图A.4玉米麦角笛醇色谱图5 GB/T 25221-2010 6 参考文献lJ Schwadorf K , Mller H M. Determination of ergosterol in cereals, mixed feed components, and mixed feeds by liquid chromatography. J. Assoc. of Anal. Chem. ,1989 ,
14、72 :457-462. 2J Sio F , Laratta B, Giovane A , et al. Analysis of free and esterrified ergosterol in tomato products. J. Agric. Food Chem. ,2000 ,48:780-784. 。-ON-FNNmNH阻。华人民共和国家标准粮油检验粮食中麦角笛醇的测定正相高效灌相色谱法GB/T 25221-2010 国中当&中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张o.75 字数12千字2010年11月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2010年11月第一版* 定价16.元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-40679 GB/T 25221-2010 打印H期:2010年12月9=-j F002A
