1、安 徽 省 地 方 标 准 牛人工授精操作规程 DB34/T 089-1993 1 主题与适用范围 本规程规定了使用牛冷冻精液进行人工授精的方法和操作程序 本规程适于全省各地牛人工输精站（点）应用 2 引用标准：GB4143-84 3 授精前的准备 3.1 人工授精室（或精液处理室）应配齐显微镜、干燥箱、高压灭菌锅、天平、输精器械、冷冻精液贮存罐、液氮运输罐、消毒药品、抗菌素、二水柠檬酸钠等必需的药品和器械。 3.2 人工授精室应保持无尘、无烟、无蚊蝇和无味、无直射阳光。橱柜保持清洁。 3.3 器械使用前必须进行消毒。消毒方法：先用洗衣粉水或温肥皂水刷除污物，再用清水洗净，用过滤的温开水冲洗，
2、然后放入纱布袋中蒸气灭菌 30 分钟，亦可用 70%酒精棉球擦拭或用酒精火焰消毒。输精器使用前还必须再用 1%灭菌盐水或解冻液冲洗。 3.4 输精员指甲剪短、磨光、手臂必须用肥皂水洗净，再用来苏儿消毒。 3.5 输精母牛要排除宿粪，尾根、肛门及外阴部先用水清洗后再用来苏儿或高锰酸钾溶液消毒。 3.6 授精母牛输精前要进行保定。 4 冷冻精液的解冻 4.1 颗粒冻精解冻的配方按照 GB4143 标准执行，推荐使用一毫升维生素 B12 注射液（含量0.25-0.5mg）。 4.2 颗粒冷冻精液解冻：用刻度吸管取解冻液一毫升注入灭菌并用解冻液冲洗的试管内，放入38-40温水中，待解冻液温度升至 38
3、-40时，用在液氮中浸过的竹镊子迅速取出颗粒精液一粒，立即投入试管中轻轻摇动，当颗粒基本融化时，把试管从温水杯中提出。不论授精母牛头数多少，均应逐颗解冻。 4.3 细管冻精解冻 4.3.1 手握法：将细管从容器中取出放入手心中用双手搓热，直至精液溶解。 4.3.2 水浴法：将细管冻精取出后，立即 38-40温水中浸泡、直至精液完全溶解取出。 5 解冻后的精液品质检查 5.1 显微镜活力检查：取解冻后精液滴于载玻片上，盖上盖玻片，在 37的温度下进行镜检，显微镜以放大到 160-400 倍为宜。每个滴片观察 2-3 个视野，并注意观察不同层次的精子运动，确定直线前进运动精子占总数的百分比即为精子
4、活力。 5.2 精子活率计算：在血球计数板上数出死精子数，然后用高温杀死全部精子，数出精子总数。 活率= 100% 总精子数 - 死精子数 总精子数 5.3 精子活率低于 30%的精液不得使用。 安徽省技术监督局 1993-12-30 批准 1994-03-01 实施 DB34/T089-1993 6 输精 6.1 输精时机 输精时要采取综合判定，符合下述情况即可输精。 6.1.1 母牛接受爬跨（稳栏）后 8-12 小时进行第一次输精，间隔 8-12 小时再进行第二次输精。 6.1.2 外阴部充血肿胀稍退，下角出现皱纹。 6.1.3 母牛性欲稍退，不大愿意接受公牛爬跨，阴道流出粘液量减少，呈透
5、明，稍杂一些白色丝状物，粘性较差，牵之成丝。 6.1.4 子宫劲外口略收缩变硬，内口尚软。 6.1.5 直肠触摸卵巢时，卵泡直径 1-1.50cm，呈小球形，波动明显，弹性较强，有一触即破之感。 6.2 输精方法 6.2.1 输精员手臂必须先涂一薄层润滑剂，或套专用长臂手套。 6.2.2 采用直肠把握子宫颈法输精。输精员手伸入直肠内，摸找并握子宫颈外端，用肘压开阴裂；另一只手将输精器插入阴道，向上倾斜避开尿道口，再转平直向子宫颈口，借助入直肠内的一另手固定和协同动作，将输精器轻稳缓慢地插入子宫颈螺旋皱裂，徐徐把精液输入子宫内或子宫颈 5-6cm 深处。颗粒冻精输精器抽出子宫颈前不得松开胶球，以
6、免吸回精液。 6.2.3 细管输精器的使用。将解冻的精液细管棉塞端插入输精器推杆 0.5cm 深处，剪掉细管封口部，拧紧螺丝，外面套上塑料保护套，拧紧固定圈，使护套固定在输精器上；套管中间用于固定细管的游子，应用细管轻轻推至塑料管的顶端。缓推输精推杆至管内流出少许精液，即可输精。 6.2.4 一支输精器只限于一头母牛输精使用。 6.2.5 每次输精剂量：颗粒冻精一粒或细管冻精一支。 6.2.6 授精结束后按附录 A 逐头登记，整理归档。 DB34/T089-1993 附 录 A 牛繁殖情况登记表 县 乡 站（点） 年 月 日 发情鉴定 输精时间 妊娠检查 犊牛 畜主姓名 母牛月龄 营养状况 发
7、情时间 外观 卵巢 第一次 第二次 冻精来源 品种种公牛号冻精批次输精量解冻后活力日期结果 （）预产期实产期 胎次 性别 初生重 特征附录 B：几项记录的统计方法 A1 授精率（受配率）= 100%（1） A2 第一情期受胎率= 100%（2） 年度配种母牛数 年度终能繁牛数 第一情期受胎母牛数 第一情期配种母牛数 A3 受胎率= 100% （3） 年度受胎母牛数 年度授配母牛数 A4 繁殖率= 100%（4） A5 繁殖成活率= 100%（5） 本年度内出生犊牛数 上年度末适繁母牛数 本年度内成活犊牛数 上年度末适繁母牛数 附加说明 本标准由安徽省农业厅提出 本标准由安徽省农业厅畜牧局负责起草、省畜禽品种改站协助 本标准主要起草人：李赛明、宣依群、胡仁富、吴宓 本标准经安徽省农业标准化技术委员会审查通过
