1、C.J 中华人民共和国城镇建设行业标准CJ/T 141 150-2001 城市供水水质检验方法标准及编制说明和研究报告2001-07-17发布200112-01实施中华人民共和国建设部发布目录一、城市供水水质检验方法标准前言.3 CJ/T 141一2001城市供水二氧化硅的测定硅铝蓝分光光度法CJ/T 142-2001城市供水锦的测定.8 1.石墨炉原子吸收分光光度法.9 2.原子荧光法.10 CJ/T 143-2001城市供水铀、镜、钙的测定离子色谱法CJ/T 144-2001城市供水有机磷农药的测定气相色谱法”山CJ/T 145-2001 城市供水挥发性有机物的测定.，.川1.气液平衡气相
2、色谱法.,. . 2.吹扫捕集与色谱质谱联用怯中，CJ/T 146-2001城市供水酣类化合物的测定液相色谱禧.11 .“. 32 CJ/T 147-2001城市供水多环芳怪的测定被相色谱法.38 CJ/T 148一2001城市供水粪性链球菌的测定.451.发酵法.46 2.滤膜法.48 CJ/T 149-2001 城市供水亚硫酸盐还原厌氧菌（梭状芽胞杆菌）抱子的测定.51 1.液体培养基增菌法2.滤膜法.CJ/T 150-2001 城市供水致突变物的测定鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验58二、城市供水水质检验方法标准编制说明和研究报告前言.城市供水二氧化硅的测定硅铝蓝分光光度法编制说明和研
3、究报告城市供水锦的测定编制说明和研究报告.78 城市供水纳、镜、钙的测定离子色谱法编制说明和研究报告.88 城市供水有机磷农药的测定气相色谱法编制说明和研究报告.94 城市供水挥发性有机物的测定编制说明和研究报告.105 城市供水酣类化合物的测定液相色谱法编制说明和研究报告.124 城市供水多环芳煌的测定被相色谱法编制说明和研究报告.137 城市供水粪性链球菌的测定编制说明和研究报告.153 城市供水亚硫酸盐还原庆氧菌抱子的测定编制说明和研究报告.157 城市供水致突变物的测定鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验编制说明和研究报告.160 参考文献.168 一、城市供水水质检验方法标准Stand
4、ard methods for the examination of water of urban water supply CJ/T 141 150-2001 前去一口为使城市供水行业适应我国国民经济可持续发展的要求，改善我国城市的投资环境，建设部于1993年编写并出版了“城市供水行业2000年技术进步发展规划”（以下简称“规划勺。根据“规划”中水质目标的要求，一类水司（日供水能力在100万m3以上的供水企业）检测能力应达到89项，比现行国家生活饮用水标准（GB5749 1985）增加了54项。经核查，增加项目中的23项可参照现有国家其他相关标准方法进行检测，但尚有31个项目需要补充制定新的
5、检验方法标准。为此，于1997年4月17日经建设部建标【199781号文批准建标，制定本标准。本标准共含10个标准，14个检验方法，31个项目。元机类5项：二氧化硅、锦、铀、钙、楼。有机类23项z5种挥发性有机物：1.1二氯乙烯、l,1,1三氯乙烧、1,1, 2三氯乙皖、三澳甲烧、1,1, 2 .2四氯乙烧；7种多环芳怪：荼、荧惠、苯并（b）荧惠、苯并（k）荧葱、苯并（a）苗、苯并（ghi)i架、苟并(1,2, 3-c ,cl）蓝；6种酣类：苯酣、4硝基酣、3甲基酣、2,4二氯酣、2,4,6三氯酣、五氯酣；5种有机磷农药z敌百虫、敌敌畏、乐果、对硫磷、甲基对硫磷。微生物类2项：粪性链球菌、亚硫
6、酸盐还原厌氧菌。毒理试验1项：鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶致突变试验（Ames试验）。本标准是对“规划”中新增水质项目中国内现有相关标准尚未涵盖的项目或方法的补充。本标准在考虑到近年来我国一类水司和部分二类水司（日供水能力在50万m3以上的供水企业）在检测装备和人员素质上的长足发展，他们有实力和能力在检测工作上逐步与国际接轨的现实情况，采用了国际上一些较前卫的检验方法和先进的检测设备，比如z用离子色谱法检测水中铀、钙、楼；采用了吹扫捕集气相色谱质谱联机等大型精密设备检测水中挥发性有机物；还将毒理学Ames试验做为对水质的评价方法。本标准在采用国际上通用检验方法的同时，在某些方面还有一些创新z
7、比如在有机磷农药和多环芳娃前处理程序中，采用了固相富集提取法，用原子荧光法测定水中锦，这些在国际上也是先进的。因此本标准有较多的科技含量，能与国际水平接轨。本标准在编制中也考虑到各供水企业在检测装备和人员水平上的差异，尽可能为同一项目提供多种方法，有繁有简，供使用者选择。比如挥发性有机物的测定，既可以采用经典的气液平衡哼气相色谱法，也可采用具有国际水平的吹扫捕集气相色谱质谱法。对水中钙、镜离子的测定，现有国家标准中已有了常规的EDTA滴定法和原子吸收分光光度法，本标准提供了具有国际水平的离子色谱法。本标准主办单位：建设部标准定额司、建设部城建司。承办单位：中国城镇供水协会。主编：刘志琪、宁瑞珠
8、、岳舜琳、许树礼、吴玲玲、陈国光、樊康平。主审：肖绍雍、宋仁元、沈大年。起草单位有国家城市供水水质监测网北京、天津、上海、武汉、广州、济南、昆明、成都、深圳等9个监测站，其中上海监测站为组长单位，北京、天津监测站为副组长单位。参加标准验证单位有z国家城市供水水质监测网重庆、南京、南昌、福州、合肥、厦门等监测站及珠海、顺德省级监测站。参加本标准起草及复验人员：3 CJ/T 141 150-2001 冯复来、董瑞圣、张立尖、向华、陆峰、钱静汝、祝敏捷、童俊、刘娟喜、喊道德、冯菊丽、洪华成、王近、蒋增辉、王秀丽、孟莉莉、张旭东、吕宝和、王义芬、李捕、孙海龄、李桂香、秦晶、姚刚、马越、吴玲、徐广志、林
9、爱武、徐素梅、裴琴英、张建华、崔建华、王丹、杜兵、刘静、黄春、罗亮、徐欣、委聪妹、金红、王锦城、陈宛华、吴贤芬、黄媚、李丽萍、梁志坚、林朝晖、潘健芬、杨雪清、卢益新、宣卫、林细萍、宗祖胜、张德明、阮远彪、陶涛、贾瑞宝、刘传明、刘德珍、吴华双、李劲松、刘辆、张红雨、陶晓武、黄秀华、孙郁莉、张杰、辜强、陈桂珍、鲍洁、冯健、谷颖江、吴立群、吴菊慧、胡鸿雁、黄照兰、邬家样、商文新、李朝辉、叶劲、祝大立、黄静、余定学、周皖云、高云霞、肖萌、贺晓芮、王欣、沈震、李频、田明、朱熔钢、李华伟、张珊、李洪波、张霞、夏冰阳、周艳、沈奕、王玉敏、胡建伟、周晓珍、赵卓君、柯天将、林群、高和气、丁成兰、杨所龚、李康、林
10、玉琴、叶振福、陆洋、杨琳、章春星、杨芬芳、陈灵、王纪阳、赖长生、陈日祥、向红、吴文辉、赖玲扬、赵献玲、胡克武、冯兆敏。4 本标准自2001年12月1日起实施。本标准适用于城市供水及其水源水的测定。本标准委托中国城镇供水协会负责解释。CJ /T 150-2001 前当一口本标准由建设部标准定额研究所提出。本标准由建设部给水排水产品标准化技术委员会归口。本标准由国家城市供水水质监测网天津监测站负责起草。本标准起草人：张旭东、李捕。本标准参加验证单位z北京监测站、上海监测站、深圳监测站、武汉监测站、昆明监测站。58 中华人民共和国城镇建设行业标准城市供水致突变物的测定鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试
11、验CJ/T 150-2001 Urban water supply-Determination of mutagenesis一Salmonella typhimurium/Mammals microsomal enzyme test 1 范围本标准规定了用鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验测定城市供水的致突变性。本标准适用于城市供水及其源水水质致突变性的测定。本标准规定以2L为接种的最高检测水样体积。2 方法人工诱变鼠伤寒沙门氏菌突变株（即组氨酸营养缺陆型），在无组氨酸的培养基上不能生长，如受到致突变物的作用，使其基因发生变化而回复突变为原来的野生型，即使在缺乏组氨酸的条件下也能生长（如下图所
12、示）。其中一些致突变物为直接致突变物。另外一些为间接致突变物，即需代谢活化后具有致突变性。3 试剂和材料3. 1 营养肉汤牛肉浸膏5 g 蛋白陈10 g 氯化铀5 g 蒸锢水1 000 mL 正向突变回复突变野生型一一一一组氨酸蕾养缺陷型一一一一野生型将上述成分温合后，加热榕解，用饱和NaOH溶液调节pH值至7.2，分装于试管中，每管10mL。经121C高压温热灭菌20min。4冰箱保存，供增菌使用。（保存期7天）3.2 V-B液拧撵酸（CsHs01 H20) 磷酸氢二饵（K2HP04 3H20) 磷酸氢镀铀（NaNH4HP04 4H20) 硫酸模（MgS04 7H20) 蒸锢水10 g 65
13、. 5 g 17. 5 g 1. 0 g 500 mL 将上述试剂在少量蒸锢水中溶解后，稀释至500mL。硫酸镜水溶液在最后缓慢加入以防止产生沉淀，经滤纸过滤后，于4冰箱保存。3.3 底层培养基中华人民共和国建设部2001-07-17批准2001-12-01实施59 CJ/T 150-2001 葡萄糖20 g V-B液100mL 琼脂17 g 蒸锢水900 mL 将V-B液用饱和NaOH溶液调节pH值至7.0。另将葡萄糖溶于100mL蒸馆水中（溶液变黄者弃去重配），两者于115灭菌10min。琼腊于800mL蒸锢水中煮沸溶化，121灭菌20min，待其凉至80左右，将前两者倒入混匀。挠制平板，
14、每皿25mLo于4C冰箱中可保存14天。3. 4 Q. 5 m mol/L组氨酸Q.5 m mol/L生物素溶液成分菌灭压高产lvqeu 4 巧t9 至值TLH Ep g节MU川调液溶H o au N 和饱用沸臼煮MU在盯在瑞EqR6展如同市液市内邮箱榕归箱面L削冰曦FLH冰呐FhUE$hvawnphu，飞【】1盐们如1盐机配问帕于L阿山惯于1忡飞露J飞量mh回国酸缸素解d酸如解制汤倒氨L物水溶m氨水榕问问肉脂L养组i生锢匀组锢匀事脂养琼L战hv蒸混OL情蒸棍营琼营将F叫“WFhuq鸣叫呵鸣U7. 8 mg 10. 5 mg 12. 4 mg 100 mL 1. 56 g 2. 10 g 10
15、0 mL 20 min。于4冰箱中可保存14天。3. 7 H顶层培养基琼脂氯化铀o. 6 g o. 5 g 蒸锢水100 mL 将琼脂和氯化铀溶于蒸馆水中加热煮沸，以每支试管2.5 mL分装，加塞，121高压灭菌20min。于4冰箱中可保存14天。3. 8 H顶层培养基H顶层培养基100 mL O. 1 mol/L L组氨酸溶液10 mL 将加热榕化了的H顶层培养基加人O.1 mol/L L组氨酸榕液10mL混匀，趁热以每支试管2. 5 mL分装，加塞，121高压灭菌20min。于4冰箱中可保存14天。3- 9 顶层培养基H顶层培养基100 rnL O. 5 rnmol/L L组氨酸0.5 r
16、nrnol/L D生物素榕液10 mL 将加热榕化了的H一顶层培养基加入O.5 rnol/L L组氨酸0.5 rnmol/L D生物素榕液后棍句，趁热以每支试管2.5 rnL分装，加塞，121高压灭菌20min.于4冰箱中可保存14天。3. 10 o. 2 rnol/L磷酸锅缓冲液（pH7.4) 每100rnL含o. 2 rnol/L磷酸氢二铀（Na2HP04 12Hz0) 81 rnL 60 CJ/T 150-2001 O. 2 mol/L磷酸二氢铀CNaH2P04 2H20) 19 mL 若pH值小于7,4，用O.2 mol/L磷酸氢二铀调节至7.4.115高压灭菌10min ，于4冰箱中
17、保存。3. 11 氨书青霉素碱性溶液氨书青霉素氢氧化铀榕液（0.02 mol/L) 临用时无菌操作配制。3. 12 氨苇青霉素平板80 mg 10 mL 在1000 mL底层培养基中加入O.5% L组氨酸盐酸盐溶液10mL，或o.5% L组氨酸榕液8.17 mL,o. 5 mmol/L D生物素溶液6mL,121高压灭菌20min后，加入1.9 mL氨书青霉素碱性溶液，混匀浇制平板，供挑选菌种用。3.13 结晶紫水榕液o. 1 g/100 mL 避光保存。3. 14 苦酣酸水榕液4. 0 mg/mL T A98( -S9或S9）作阳性对照用（或敌克松水溶液o. 5 mg/mL) 3. 15 环
18、磷酷胶水溶液20mg/mL TA100(-S9或S9）作阳性对照用3. 16 S-9温合液每毫升含量S-9 MgCl2CO. 4 mol/L) KCl(l. 65 mol/L) 辅酶ll(NADPH)6磷酸葡萄糖(1mol/L) o. 32 mL 20 L 20 L 2. 7 mg 5 L 磷酸铀缓冲液（O. 2 mol/L) O. 6 mL 灭菌蒸锢水35 L 除S-9外，各组分灭菌后保存于冰箱，无菌操作，临用时配制，置于冰箱中，其活性可保持4h 5 h。3. 17 S-9的制备使用体重200g左右的健康雄性大鼠，用玉米油稀释的国产多氯联苯（或aroclor-1254，浓度为200 mg/m
19、L，剂量为100mg/kg）腹腔注射一次。诱导五天后，断头处死大鼠，无菌取出肝脏，放入烧杯中称重。按每克肝脏加入o.15 mol/L KCl溶液3mL，连同烧杯移入冰水中，用消毒剪刀剪碎肝脏，在玻璃匀浆器内制成肝匀浆，在高速冷冻离心机上以9000 g（速度12000 rpm)lO min。吸出上清液即为S-9,分装小试管，每管2mL，放80C或一20冰箱保存。应无菌操作，制备后，应用接种环挑出少许在营养琼脂板上涂布，37、24.h培养检验应为无菌。用间接致癌物（黄曲霉素B或2氨基药）鉴定其生物活性，方可使用。3. 18 2氨基药溶液2 mg/L DMSO溶液4 仪器设备4. 1 高压蒸气灭菌器
20、4.2 干热灭菌箱4.3 恒温箱4.4 普通冰箱4.5 高速冷冻离心机(12000 r /min) 4.s 低温冰箱（80）或液氮罐4. 7 超净工作台61 4.a 恒温水浴锅4.9真空泵4.10 比色器4. 11 自动菌落计数器CJ/T 150-2001 4. 12 微量加液器或微量注射器(100L 500 L) 4. 13 试管、平皿（90）、分度吸管置于干热灭菌箱160，灭菌8h。4. 14 振荡培养箱5 试验菌种的选用、鉴定与保存5. 1 菌种的选用鉴于TA98,TA100菌种特性变异小，不易丢失、且能分别测试移码型突变和碱基置换型突变，因此本试验采用TA98,TA100作为测试菌种。
21、5.2 菌种鉴定5.2. 1 增菌液的制备将菌种接种于10mL巳灭菌的营养肉溺中，3TC振荡培养14h 16 h至每毫升活菌数不少于11092109个。5.2.2 组氨酸缺陷型鉴定将各装有2.5 mL H顶层培养基的3支试管中分别加入0.1mL增菌液，分别倒入底层培养基平板。37培养48h。将各装有2.5 mL H顶层培养基的3支试管中分别加入0.1mL增菌液，分别倒入底层培养基平板。37培养48h。结果判定：在有组氨酸的培养基上应成菌膜状而在无组氨酸的培养基上应只有个别菌落生长。5.2.3 深度粗糙突变（rfa）一一结晶紫抑菌试验用接种环或无菌椿纸将0.1mL增菌液涂布于营养琼脂平板上，将6
22、mm直径无菌滤纸漫湿结晶紫水榕液后放置其上，3TC培养24h。一式两份。结果判定：具有深度粗糙变异的菌株在滤纸片处出现抑菌环（直径Imm)o 5.2.4 R因子鉴定一抗氨韦青霉素试验用接种环将增菌液在营养琼脂平板上划线，再用接种环蘸上氨韦青霉素碱性榕液与其交叉划线，37培养18h 24 h。结果判定：无R因子的菌株在交叉处有抑菌带，有R因子者则无。5. 2 5 D.uvrB突变一紫外线损伤修复试验用接种环将增菌液在营养琼脂平板上划线，平板的一半用黑纸遮盖，置紫外灯下(15w，距离33 cm）照射8S0 37培养24h0 结果判定：切除修复系统缺损（D.uvrB）的菌株受辐射后不生长，野生型则生
23、长。s.2.s 自发回复突变在无菌的2.5 mL顶层培养基加入0.1mL增菌液倒入底层培养基平板上，37培养48h。一式三份。结果判定：观察每皿自发回变数。TA98应在1550个皿，TAlOO应在75200个皿范围内。5. 2. 7 回变特性阳性对照在无菌的2.5 mL顶层培养基中加入0.1mL增菌液并加入O.l mL阳性物后倒入底层培养基平板上，37培养48h0一式三份。结果判定：出现密集菌落（大于2倍以上自发回变数）者为突变试验阳性。5.3 菌种的保存62 CJ /T 150 - 2001 10 mL增菌液中加入1mL二甲基亚风CDMSO）在6080可保存六个月至一年。营养琼脂斜面增菌保存
24、，在4可保存三个月。6 测定步骤6. 1 水样浓缩液的制备6.1.1 XAD-2树脂的处理6. 1. ,. 1 市售XAD-2树脂需用重蒸馆水洗去所含氧化物，弃去浮于上层的树脂。用色谱纯级甲醇将水洗去。6. 1.,. 2 依次用丙酣、乙醋、甲醇各蒸馆回流8h。保存在甲醇中。（溶剂均需三次重蒸馆或用色谱纯级）6. 1.2 安装XAD-2树脂柱将处理好的树脂倒入一支高45cm、直径2.5 cm的玻璃柱内，树脂体积20mL，在玻璃柱底部及树脂柱上部放入经丙酣、乙醋、甲醇蒸锢回流过的玻璃棉以支撑树脂并截留杂质。用1000 mL蒸情水冲洗树脂柱。6. 1. 3 水样的采集、吸附及滤水量清洁的容器采集水样
25、后，静置高处数小时使水中悬浮物沉淀并使溶解氧稳定，经加氯消毒的水要先用Na2S20i脱氯。用虹吸法将60L水样以流速为40mL/min通过树脂柱。6. 1.4 有机物的洗脱、浓缩、保存水祥过柱吸附后用氯气吹干树脂柱，分三次，每次以10mL加入色谱纯丙酣（视情况亦可用丙酣2甲醇3:n.昆合溶剂）榕液浸泡后，以3mL/min流速收集洗脱液于三角烧瓶。用5g元水硫酸铀过滤脱水后，倒入K-D浓缩器浓缩至2mL左右。放入真空干燥器抽负压将溶剂蒸干并保存在真空干燥器内。浓缩物应尽快使用。用时加DMSO定容至3.0 mL，为原液，并稀释至原液的1/2、1/4浓度，则原液、1/2原液浓度、溶液、1/4原液浓度
26、溶液各o.10 mL分别相当于水样2.0L、1.0 L、O.5 L。6.2 试验方法和步骤6. 2. 1 试验方法：平板掺入法。6.2.2 试验步骤6. 2. 2. 1 增菌培养方法同菌种鉴定6. 2.2. 2 培养基制备：提前一天制备底层培养基平板若干个，放入37c温箱内验证无菌。试验当天融化顶层培养基，45水浴保存。6.2.2.3 接种培养：在每管顶层培养基中加入0.1mL增菌液、0.1mL相当于一定水样体积的浓缩液(6. 1. 4），需活化时再加入o.4 mL S-9混合液，棍匀后倒入底层培养基上铺匀。37c士1培养48h，接种3个水样体积（6.1. 4），每个接种水样体积进行三个平行测
27、定。6.2.2.4 对照：自发回变和阳性对照做三个平行测定。自发回变每皿加0.1mL DMSO，阳性对照每皿加0.1mL阳性对照物。7 结果分析及评价7. 1 对待测物的每个剂量及阳性对照应列出每皿的实际回变菌落数及平均数，其中三个平行样回变菌落数相对标准偏差应小于30%。7.2 在12个接种水样体积下，其回变菌落数是自发回变数的两倍及两倍以上，且有剂量反映关系者，定为阳性；否则即为致突变阴性。8 质量控制s. 1 每次试验前后都应用20%的新洁尔灭清洁无菌室，避免细菌及每菌滋生。63 CJ/T 150-2001 a.2 每批培养基都要做灭菌完全试验。a.3 应避免琼脂与葡萄糖一同高压，防止产生弱致突变性，影响试验结果。a.4 若考虑水怦中悬浮物吸附的致突变物，应连同悬浮物一同通过XAD树脂过滤。a.5 试验有效性每次试验应当测定待测物和S-9混合液的无菌性并确定对阳性对照物的反应性，保证测试菌株自发回变数在确定的范围内且变化较小。9 安全g, 1 做完试验后一切带菌的器皿、培养基应及时经121高压灭菌20min。9.2 应严格保管、使用及销毁阳性物。64
