1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 20765-2006 猪肝脏、肾脏、肌肉组织中维吉尼霉素M，残留量的测定液相色谱-串联质谱法Method for determination of virginiamycin M, residue in porcine liver, kidney and muscle tissues一LC-MS回MSmethod 2006-12-31发布2007-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局唱舍中国国家标准化管理委员会战叩目lJI=t 本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本
2、标准由中华人民共和国质量监督检验检疫总局归口。GB/T 20765-2006 本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人:庞国芳、李一尘、宋文斌、董振霖、李军、隋凯、姜莉。本标准系首次发布的国家标准。I GB/T 20765-2006 猪肝脏、肾脏、肌肉组织中维吉尼霉素M，残留量的测定1 范围本标准规定了猪肝脏、肾脏和本标准适用于猪肝脏、肾本标准的方法检出2 规范性引用文件下列文件中的的修改单不包括GB/T 637 (GB/T 6379.1 GB/T 637 性与再现性的GB/T 6 3 原理释，于C18固相三氯甲皖至干，4 试剂
3、和材料除另有说明外，4. 1 乙酸。4.2 甲酸:色谱纯。4.3 甲回事:色谱纯。4.4 乙睛:色谱纯。4.5 三氯甲烧:色谱纯。4.6 磷酸二氢镣:优级纯。4. 7 甲酸锻:优级纯。液相色谱m串联质谱法量液相色谱-串联质谱测定方法。0.25g/kg。引用文件，其随后所有达成协议的各方研究准。分z总则与定义:1987) 氢锁缓冲踏破稀，去除水层。氮吹测定。4. 8 磷酸二氢镣梅被:0.1mol/L，称取11.50 g磷酸二氢镣(4.时，用水榕解定容至1000mLo 4.9 磷酸二氢镣榕液:0.01mol/L，称取0.1mol/L磷酸二氢镣榕液(4.8)100mL，用水稀释定容至1000 mL
4、4. 10 甲酸镣缓冲液:0.12mol/L.pH=3. 2，称取7.56 g甲酸镀(4.7) ，用水溶解，用甲酸(4.2)调节pH到3.2，定容至1000 mL。4. 11 甲酸镀缓冲液:0.003mol/L , pH=3. 2，称取25.0mL的甲酸镀缓冲液(4.10)，用水稀释定容至1 GB/T 20765-:-2006 1000 mL 4. 12 甲醇十乙腊榕掖(50+50)。4.13 7.k十乙腊榕被(80+20)。4. 14 水十甲醇洛掖(65十35)。4. 15 水+甲醇榕擅(45十55)。4. 16 流动相A:O.003mol/L甲酸钱缓冲液(4.11)用0.22m捕、膜过墟。
5、梳动相B.甲酶十乙腊(50+50)(4.12)用O.22m滤膜过捕。4. 17 标准物质:维吉尼霉素M1，纯度95%。4. 18 标准储备榕榷:0.1mg/mL。准确称取适量的维吉尼毒素M1标准物质，用甲醇配成0.1mg/mL 的标准储备陪蔽。该榕液在4C保存。注:称取标准物的质量是按纯度修正过的质量。4. 19 都准工作溶破:梗据维吉尼毒素Mj的灵敏度和仪器线性范围，用空白样品提取被配成不同被度的标准工作宿班。标准工作溶液在4C保存。5 仪器5. 1 掖相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子掘。5.2 离心机t最大转速为10000r/min。5.3 离心管:锥形底政璃离心管40mL、15m
6、L和10mL，具塞;锥形底聚丙烯离心管50mL，具螺旋盖。5.4 电子天平:感量0.1mg和0.1g, 5.5 过滤器:聚四氟乙烯膜过酶器:0.22mX13mm;尼龙膜过洁、器:0.22mX47mm , 5.6 移破器:量程为1mL10 mL和5mL50 mL. 5. 7 微量加液器:量程为10L100L，100Ll 000L. 5.8 高速分散匀质机。5.9 流动相过滤装置。5. 10 氯气被缩仪。5. 11 高速捐流据合器。5. 12 振荡器。5. 13 酸度汁:测量精确度为士0.02，5. 14 超声波仪。5. 15 食物调理机。5. 16 一次性注射器:1mL. 5. 17 固相萃取柱
7、:BondElutCs，500mg，柱长为6mL. 5. 18 鸡心瓶:150 mL. 5. 19 玻璃贮被器:100 mL 5.20 试样瓶:2mL, 5.21 一次性移被管。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备猪肝脏、肾脏要去除脂肪和其他的非肝脏、肾脏组织，猪肉要去皮和骨头。将其搅碎拌匀。分出0.5 kg作为试样，将制备好的试样密封，并做上标记。6.2 试样保存将试样置于一18.C条件下贮存。7 测定步骤7. 1 提取GB/T 20765-2006 称取试样5.00g(精确到O.01 g)放入50mL聚丙烯离心管中，加人10mL的甲醇十乙腊梅液(50+50)匀提1min.用2X1mL的
8、甲醇+乙腊梅、被(50十50)彻底清洗匀浆头。高速振荡10min.离心15 min(4 000 r/min).将上清被转移至40mL的洁净离心管中。再向残渣中加入2mL甲醇+乙腊梅液(50+50)匀浆30S，依上述条件清洗匀浆头。高速振荡5min.离心10min(4 000 r/min)。合并两次上清液于40mL离心管中。加入15mL的0.01mol/L磷酸二氢镀潜液(4.的，高速振荡5min.离心10 min(4 000 r/min).将上清被转移至150mL的鸡心瓶中，加入80mL磷酸二氢镀梅被(4.9)晦匀待净化。7.2 净化依次用5mL乙腊、5mL水和5mL的磷酸二氢镣恪掖(4.9)洗
9、襟活化固相萃取柱(5.17)。在柱上装上玻璃贮被器(5.19).将样液(7.1)过柱，移去玻璃贮存器(5.19)。依次用2mL水.10mL水十乙脯溶液(80十20).2 mL.1.110-20 土50试样中维吉尼毒素M1. 19)分别进行定量i普条件下标准工作曲线，的统性酒围内。7.3.3.2定量用标准工用标准工作曲在上述的色准总离子前i固见7.4 平行试验按照以上步8 结果计算. ( 1 ) 式中zx-一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克g/kg); c-一从标准曲线上得到被测组分踏破的故度，单位为纳克每毫奸(ng/mL); V一一样品榕被定容体积，单位为毫升(mL); m-一样品溶被所
10、代表试样的质量，单位为克(g)。注:计算结果应扣除空白值。9 精密度本梅准的精密度数据是撞照GB/T6379. 1和GB/T6379. 2的规定确定的，其重复性和再现性的4 GB/T 20765-2006 值以95%的可信度来计算。9. 1 重复性在重复性条件下，在得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，猪肾组织维吉尼霉素M，中的含量范围及重复性方程见表40表4猪肾组胡中维吉尼.素M1的含量范围及重复性和再现性方程含量范围f(flgfkg)重复性限r再现性限RO. 5003. 000 19 r= l. 201 71g m-1. 143 5 Ig R=1. 183 3 Ig m-O. 7
11、359 如果差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在线性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，猪肾组织中维吉尼霉素M，的含量范围及再现性方程见表405 GBjT 20765-2006 附录A(资料性附录)标准物质总离子流圈维吉尼霉素M1标准物质总离子流图，见图A.10 维吉尼霉素M14.4e5 -l 24. ,35 4.2e5 4.0e5 3.8e5 3.6e5 3.4e5 3.2e5 3.0e5 2.自己52.6日52.4e5 2.2e5 2.0e5 1. 8e5 1. 6e5 1. 4e5 1. 2e5 -1. Oe5 8.0e4
12、 6.0e4 4.0e4 2. Oe4 0.0 tlmin 22 24 26 28 30 图A.1 雄吉尼毒素M1标准物质总离子流图6 附录B(资料性附录)回收率维吉尼毒素Mj舔力日被度及其平均回收率的试验数据，见表B.10 GB/T .20765-2006 襄B.1 维吉尼霉素M1添加读度及其平均回收率的试验散据组织添加浓度!(问/kg)平均回收率/(%)0.500 95.3 肾脏1. 000 89.7 2.000 84.1 3.000 87.1 0.500 87.8 1. 000 日1. 5 肝脏2.000 76.4 3.000 92.1 0.500 93.4 1.000 92.2 肌肉2
13、.000 100.0 3.000 92.4 CON-mhONH筒。华人民共和国家标准猪肝脏、肾脏、肌肉组织中维吉尼霉素M1残留量的测定液相色i曹串联质谱法GB/T 20765-2006 国由t9夺中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销9峰印张0.75字数14千字2007年3月第一次印刷开本880X12301/16 2007年3月第一版定价14.00元提书号:155066 1-28973 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 20765-2006
