1、ICS 65120B 46 园目中华人民共和国国家标准GBT 2 1 037-2007饲料中三甲氧苄胺嘧啶的测定2007-0621发布_l- Cj同 效液相色谱法Determination of trimethoprim in feedsHigh performance liquid chromatography2007-09-0 1实施宰瞀擞紫瓣警糌瞥霎发布中国国家标准化管理委员会促19刖 声GBT 2 1 037-2007本标准是在查阅了国内外大量文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了高效液相色谱法检测饲料中三甲氧苄胺嘧啶。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准
2、化技术委员会归口。本标准负责起草单位；中国农业大学、农业部兽药安全监督检验测试中心(北京)。本标准主要起草人：张素霞、沈建忠、丁双阳、程林丽、李建成。饲料中三甲氧苄胺嘧啶的测定高效液相色谱法GBT 21037-20071范围本标准规定了测定饲料中三甲氧苄胺嘧啶含量的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中三甲氧苄胺嘧啶含量的测定。本方法的最低检测限为10 mgkg，最低定量限为20 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的
3、各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法GBT 146991饲料采样3方法原理用二氯甲烷一乙酸钠溶液提取饲料中的三甲氧苄胺嘧啶，经离心除去固体物及部分杂质后，取下层有机相适量，氮气吹干后用1冰乙酸溶液复溶，用正己烷除脂，下层水相经滤膜过滤后用高效液相色谱紫外检测器检测。4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GBT 6682二级用水规定。41甲醇：色谱纯。42二氯甲烷。43正己烷。44乙酸钠溶液(82 gL)：取82 g乙酸钠于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。45
4、乙酸溶液(1)：取1 mL冰乙酸于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。46乙酸溶液(05)：取05 mL冰乙酸于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。47三甲氧苄胺嘧啶标准贮备液：准确称取三甲氧苄胺嘧啶标准品(含量大于98)0100 g于100 mL的容量瓶中，用乙酸溶液(45)溶解并定容，配制成浓度为1 mgmL的三甲氧苄胺嘧啶贮备液。4条件下贮藏，有效期三个月。48三甲氧苄胺嘧啶标准中间液：移取10 mL标准贮备液(47)置于100 mL的容量瓶中，用乙酸溶液(45)稀释并定容，配制成浓度为100-gmL的三甲氧苄胺嘧啶标准中间液。4条件下贮藏，有效期一个月。49三甲氧苄胺嘧
5、啶标准工作液：分别移取三甲氧苄胺嘧啶标准中间液(48)0025 mL、0125 mL、0250 mL、125 mL、250 mL、12S mL于25 mL容量瓶中，用乙酸溶液(45)稀释定容配制成浓度为01tgmL、05LgmL、1019mL、S0gmL、100LgmL和50019mL标准工作液。5仪器和设备51实验室常用仪器、设备。52高效液相色谱仪(配有紫外检测器)。1GBT 2 1 037-200753分析天平：感量为0000 1 g。54旋涡混合器。55离心机。56超声波清洗器。6试样制备按GBT 146991规定，取有代表性的样品1 kg，四分法缩减取约200 g，经粉碎，全部过孔径
6、045 mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7分析步骤71试样提取称取一定量的试样(配合饲料约2 g，浓缩饲料约1 g，预混合饲料约1 g，准确至0001 g)，置于50 mL离心管中，加人10 mL乙酸钠溶液(44)和20 mL二氯甲烷，水浴超声15 min，每隔5 rain涡动一次，每次涡动1 rain，3 800 rrain离心10 rain。72净化用10 mL注射器吸取10 mL的下层二氯甲烷于10 mL离心管中，3 800 rrain离心10 min。小心吸取再次离心过的二氯甲烷提取液2 mL于另一个10 mL离心管中，40下氮气吹干。加入1 mL乙酸溶液(45)，涡动10 S，再加入
7、2 mL正己烷，涡动20 S，3 800 rrain离心10 rain。下层水相用2 mL正己烷重复洗涤一次。经孔径为045 pm滤膜过滤后用高效液相色谱分析。73测定731液相色谱条件色谱柱：c，。柱，长250 mm，内径46 mm，粒径5 pm，或相当者；柱温：35；流动相：05乙酸溶液(46)+甲醇，75十25(V1十V2)；流速：05 mLmin；检测波长：270 nm；进样体积：50 pL。732液相色谱测定分别取适量的标准工作液和试样溶液，按731列出的条件进行液相色谱分析测定。以标准工作液作单点或多点校准，并用色谱峰面积积分值定量。测定中应注意调整试样溶液的浓度，使三甲氧苄胺嘧啶的积分值落在标准曲线的相应范围内，并在试样溶液分析问适当穿插标准工作液，以确保定量的准确性。所得三甲氧苄胺嘧啶的色谱图见图1。min)8结果计算与表述GBT 21037-2007饲料中三甲氧苄胺嘧啶的含量x，以质量分数(mgkg)表示，按式(1)计算：X一生!尘 (1)m式中：c试样液中对应的三甲氧苄胺嘧啶的浓度，单位为微克每毫升(ttgmL)；y试样液总体积，单位为毫升(mL)；n稀释倍数；m饲料样品质量，单位为克(g)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9精密度同一实验室由同一操作人员使用同一台仪器完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于15。
