1、ICS 67.120.30 B 51 中华人民共和国国家标准GB/T 21441-2008 牙鱼平Olive flounder 2008-02-15发布2008-05-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局串+中国国家标准化管理委员会也叩GB/T 21441一2008前言本标准的附录A为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位g中国水产科学研究院黄海水产研究所、中国海洋大学。本标准主要起草人s于东祥、陈四清、张岩、孔晓瑜、喻子牛、柳学周、雷雾霖。I GB/T 21441-2008 牙鱼平1 范围本标准给出了牙
2、解(Paralichthysolivaceus Temminck & SchlegeD的主要形态构造特征、生长与繁殖特征、细胞遗传学和生化遗传学特性以及检测方法。本标准适用于牙解种质的监测和鉴定。2 名称与分类2. 1 学名牙解Paralichthys olivaceus Temminck & SchlegeL 2.2 分类位置鲸形目(Pleuronectiformes)，牙绊科(Paralichthyidae)，牙解肩(Paralichthys)。3 形态特征3. 1 形态身体呈长椭圆形，扁平，双眼位于头部左侧5有眼侧披小柿鳞，呈褐色、黄褐色或灰黄色，通常具三个暗黑色斑点，无lll!侧披圆鳞
3、，呈白色。左右侧线同样发达，元额上校。尾柄长而高。有眼侧的两个鼻孔约位于眼间隔正中的前方，前鼻孔后缘有一狭长瓣片5元眼侧两个鼻孔接近头部背缘，前鼻孔亦有-狭长瓣片。口大，前位，下颁稍突出;口裂斜，左右对称。背鳝约始于上眼前缘，左右腹鳝略对称，尾鳝后缘呈双截形s奇鳝均有暗色斑纹，胸鳝有暗点或横条纹。牙尖锐，呈锥状，上下各一行，均同样发达1前部牙齿较大，呈犬齿状。牙僻的外形见图1.3.2 可数性状3.2. 1 背鳝鳝式:D.6384， 3.2.2 腹鳝鳝式:V. 6, 3.2.3 臀鳝鳝式:A. 4865， 3.2.4 侧线鳞数，l08130。3.3 可量性状图1牙饵外形3.3. 1 体长为体高的
4、2.3倍2.7倍，为头长的3.4倍3.9倍。1 GB/T 21441-2008 3.3.2 上领骨长等于或大于头长的1/2，4 生长与繁殖4. 1 生长在自然海区不同年龄组牙卸的全长和体重情况见表1。年龄/龄全长/皿皿体重jg4.2 繁殖4.2. 1 性成熟年龄在自然海5.2 核型核型公式，48染色体组型见表1不同年龄组牙解全长和体重的实测值1 230-320 5 6 620-750 640-860 2 860-5 062 1 3 145-7 633 ，一个产卵期的 .，.，、肉价n份6 生化遗传学特征6. 1 同工酶的谱型图2染色体组型牙衅肌肉中苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶、6一磷酸葡萄糖异
5、构酶(GPD同工酶、磷酸葡萄糖变位酶2 (PGM)同工酶电泳图谱见图3囚7. 1 (甲蹲=冰乙酸=3体标本g空气干燥。7. 1. 2 核裂分析观察80个以上中期7. 1. 3 核型分析从中选取10个分散良好，MDH电泳图谱单态)GB/T 21441-2008 30 min);固定液)制成染色，并放大，测量曰按如下规定对染色体分类z臂比1.01.7为中部着丝粒染专济如耻斟阳岛战国电r.o为亚中部着丝粒染色体sm组，3.07.。为亚端部着丝粒染色体st组，7为端部着丝粒染色体t组。统计处理测量数据，分析染色体特征。7.2 生化遗传分析7.2. 1 样品制备活体解剖取肝脏和肌肉，密封放入超低温冰箱(
6、-76C)或液氮罐中贮存。将部分组织(约0.5g)取出放入玻璃匀浆器中，以质量分数50%加入0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.0)，冰水浴中匀浆后，倒入1. 5 mL离心管内，4C冰箱中抽提0.5hlh，然后在0C4C冷冻离心机中以14000 r/min离心20 min，离心后的上清液作为电泳样品。7.2.2 电泳分析采用水平淀粉凝胶电泳方法，凝胶浓度为12%，电泳缓冲系统为三竣甲基氨基甲烧(Tris)拧橡酸3 G/T 21441-2008 缓冲液pH7.0，恒流(电流大小为12mA)电泳12h，电泳过程在4.C冰箱中进行。凝胶厚度为6rom , 电泳后切成4片5片，分别进行各种酶的染色，染
7、色过程在37.C恒温箱中进行。各种同工酶染色液的配制见附录A，7.2.3 结果计算多态位点比例(P)、平均杂合度观察值(Ho)、平均杂合度期望值(H.)、平均有效等位基因数(N.)分别按式(1)、式(2)、式(3)、式(的计算.P = N,/N, X 100% ( 1 ) 式中2P 多态位点比伊tl;N, 多态位点数;N, 所测位点总数。Ho = (艺HOi)/( 2 ) 式中=H。一一平均杂合度观察值;HOi 多态位点杂合度观察值;n 观察位点总和。H , = (Hi)/ . ( 3 ) 式中zH, 平均杂合度期望值;Hei 多态位点杂舍度期望值;n 观察位点总和。N , = (N，)/n
8、( 4 ) .=1 式中zN.一平均有效等位基因数;Ne-l Ho; n 观察位点总和。8 1JIJ定规!i!检测结果不符合第3章、第5章中任一章要求的，则判定为不合格项;有不合格项的样品为不合格样品。4 附录A(规范性附录)同工酶染色渡的配方A.1 磷酸葡萄糖变位酶CPGM)染色液的配方TrisC三泾甲基氨基甲:境)-HCl0.2 mol/L , pH 8.0 辅酶IICNADP) 0.25% MgCl, 1. 0 mol/L 6磷酸葡萄糖脱氢酶CNAD)l磷酸葡萄糖喽嗖蓝CMTT)0.5% 吩嚓甲硫酸CPMS)0.5% 琼脂1. 0% A.2 6-磷酸葡萄糖异构酶CGPI)染色液的配方Tr
9、is-HCl 0.2 mol/L, pH 8.0 NADP 0.25% MgCJ, 1. 0 mol/L NAD 。磷酸果糖MTT 0.5% PMS 0.5% 琼脂1. 0% A.3 苹果酸脱氢酶(MDH)染色液的配方Tris-HCl 0.2 mol/L , pH 8.0 NAD 0.5% 0.5 mol/L 苹果酸(用1.0 mol/L NaOH调pH至7.0)MTT 0.5% PMS 0.5% 琼脂1. 0% 15 mL 0.5 mL 0.1 mL 6U 13 mg 0.5 mL 0.5 mL 10 mL 15 mL 0.5 mL 0.25 mL 12 U 5 mg 0.5 mL 0.5 mL 10 mL 13 mL 0.5 mL 2 mL 0.5 mL 0.5 mL 10 mL GB/T 21441-2008 5
