1、ICS 07060；1303020；13060Z 17中华人民 共禾口HY国海洋行业标准HYT 1332010海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数测量 分光光度法Determination of spectral absorption coefficient of particles and dissolvedmaterial for seawater-Spectrophotometry2010-02-10发布 2010-03-01实施国家海洋局 发布刖 菁本标准的附录A、附录B为规范性附录，附录c为资料性附录。本标准由国家海洋技术中心提出。本标准由全国海洋标准化技术委员会(SACTC 283)
2、归口。本标准起草单位：国家海洋技术中心遥感技术研究室。本标准主要起草人：周虹丽、陈清莲、李铜基、朱建华。frUIT 1332010引 言随着海洋光学调查技术的不断发展，海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数已经成为海洋光学调查中广泛测量的参数之一。深入了解海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收特性不仅是海洋光学遥感定量化应用的基础，也有助于我们更深入地了解生物光学模型、离水辐射特性和辐射在水中的传输规律。目前，国内有多家单位采用分光光度法测量海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数，也已获得了大量宝贵的海上试验数据，但由于囝内没有该方法的测量标准，不同荦_位没有统一的测量方法，大量数据无法共享，造成了资源的浪费
3、。制定海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数测量方法的行业标准，以明确测量范围和对象，规范测量程序和方法，提高测量水平和质量，共享测量数据。1范围海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数测量分光光度法HYT 1332010本标准规定了海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数测量时的试剂与材料、仪器、分析步骤、数据处理和试验报告内容。本标准适用于采用分光光度法进行海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数的测量。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件
4、的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 173783海洋监测规范第3部分：样品采集、贮存与运输HYT 040 1996系列采水器GBT 5458 1997液氮生物容器3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。31颗粒物particles海水中以悬浮颗粒形式存在的浮游植物、细菌、浮游微生物、有机物碎屑和无机颗粒物(沙子、尘埃等)的总称。32非色素颗粒物de-pigmented particles，nonalgal particles颗粒物去除浮游植物色素后的产物。33黄色物质yellow substance，colored dissolved organic matter
5、(CDOM)，chromophoric dissolved organic matter，gelbstoff海水溶解有色有机物质中的一类结构未知的复杂高分子量化合物的混合物，如腐殖酸等。34光学密度optical density在给定波长上入射到单位体积的辐射功率与该体积发出的散射和直射透过辐射功率总和之比的以10为底的对数。35光谱吸收系数spectral absorption coefficient吸收的与入射的辐射能通量或光通量的光谱密集度之比。36光程放大校正因子pathlength amplification correction滤纸上多次散射引起的光程增大校正的系数。1HYT 13
6、320104原理分光光度法测量溶液光谱吸收系数的原理基于朗伯比尔(Lambert Beer)定律。在海洋水色研究中，它的具体形式为：a。一n。+aph+ad+ag (1)式中：n。 总吸收系数，单位为每米(m 1)；。水吸收系数，单位为每米(m_1)；aph 浮游植物色素吸收系数，单位为每米(m 1)；ad非色素颗粒物吸收系数，单位为每米(m“)；n。黄色物质吸收系数，单位为每米(m“)。分光光度法测量海水中各成分的光谱吸收系数，涉及到对两种物质形态要素的测量：一种是对固态形式的颗粒物与非色素颗粒物吸收光学密度的测量；另一种是对液态形式的黄色物质吸收光学密度的测量。后者可直接应用分光光度法测量
7、原理；而前者则采用定量滤纸技术(Quantitative Filter Technique，QFT)，即将海水中的颗粒物过滤富集在滤纸上，在数据处理过程中对滤纸媒质高散射引起的光程放大效应(D进行定量校正，获得颗粒物的光谱吸收系数。5试剂和材料试剂和材料如下所示，除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和去离子水或相当纯度的水：51玻璃纤维滤纸：直径25 mm或47 mm，孔径07 pm；52聚碳酸酯滤纸：直径25 mm或47 into，孔径020 pm或022 pm；53甲醇(CH，OIt)，浓度100；54盐酸(HCl)，浓度10。6仪器61紫外可见分光光度计：测光方式：双光束；波长
8、范围包含400 nm700 rim(在仪器允许条件下包含790 nm800 nm)；基线噪声小于0000 5；波长准确度：o5 nm；62采水器：击开式采水器，见HYT 040 1996；63液氮生物容器：见GBT 5458 1997；64玻璃样品瓶；65聚乙烯样品瓶；66抽滤装置：包括滤器、支架、抽滤瓶和真空泵；67常规实验室分析工具：通用；68无菌样品盒，直径25 mm或47 mm。7分析步骤71操作流程海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数的操作流程如图1所示。HYT 1332010图巾：ODb颗粒物滤纸光学密度；OD“ 非色素颗粒物滤纸光学密度；OD。 黄色物质光学密度； 黄色物质光谱吸收
9、系数，单位为每米(in_1)；。 颗粒物吸收系数，单位为每米(m一)：ad 非色素颗粒物光谱吸收系数，单位为每米(m叫)。图1 海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数操作流程72试验前准备试验前准备步骤如下：a)准备采水器(62)；b) 准备存放颗粒物样品的无菌样品盒(68)；c)将玻璃样品瓶(64)浸泡在盐酸(54)中12 h之后，先用50 mL水分别冲洗玻璃瓶三次，再用15 mL水分别冲洗玻璃样品瓶三次，用铝箔封住瓶口，将瓶子在450烘烤(46)h；将瓶盖在70F干燥(46)h。将处理好的玻璃样品瓶置于干燥、避光处存放，待用；d) 将聚乙烯样品瓶(65)浸泡在盐酸(54)中12 h之后，先用5
10、0 mL水分别冲洗聚乙烯样品瓶三次，再用15 mL水分别冲洗聚乙烯样品瓶三次，用铝箔封住瓶口，将瓶子和瓶盖在50烘烤(6-8)h。将处理好的聚乙烯样品瓶置于干燥、避光处存放，待用；e)准备水样采集信息的记录表格。73现场操作731海水样品采集海水样品的采集步骤如下：a)按照试验要求，用采水器采集水样，采样深度根据具体的测量要求而定，按照GB 173783的有关规定执行；b)将水样从采水器中立即转移到按72c)处理的玻璃瓶中，保存在环境温度接近现场水温的避光处；c) 记录水样采集的相关信息，记录表格见附录A。3HYT 1332010732颗粒物样品过滤与保存颗粒物样品过滤与保存的操作步骤如下：a
11、) 用盐酸浸泡聚碳酸酯滤纸15 min，再用水冲洗浸泡好的滤纸三次；b)将浸泡好的聚碳酸酯滤纸固定在抽滤装置上，过滤足够的海水，作为备用海水；c)将所有玻璃纤维滤纸在过滤好的备用海水中浸泡1 h；d)将浸泡好的玻璃纤维滤纸固定在抽滤装置上，在近似等于16625 hPa的真空度下，将25 mL732b)得到的备用海水过滤到两片玻璃纤维滤纸上，作为参比滤纸；e)在近似等于16625 hPa的真空度下，将采集到的海水过滤到玻璃纤维滤纸上，得到颗粒物样品滤纸。应根据现场海水中颗粒物的浓度，确定过滤海水的体积存50 mL2 000 mI，过滤海水的体积应满足颗粒物样品滤纸的光学密度OD r。(675)大
12、于005小于等于025、ODfp(440)小于等于04的要求；f)将732d)得到的参比滤纸和732e)得到的颗粒物样品滤纸分别平整的转移到贴有标签的无菌样品盒(68)中，标签上应写明站位号和采水深度，无菌样品盒中事先应滴一滴备用海水，用锡纸包裹无菌样品盒，将无菌样品盒放人液氮生物容器(63)中保存；g)记录732e)得到的颗粒物样品滤纸部分的面积Ar和过滤海水的体积Vr，记录表格见附录A。733黄色物质样品过滤与保存7331 黄色物质样品过滤与保存的操作步骤如下：a)将02 pm的聚碳酸酯滤纸浸泡在盐酸中15 rain，再用水冲洗浸泡好的滤纸三次，待用；b)将7331a)准备好的聚碳酸酯滤纸
13、固定在抽滤装置上，在近似等于1596 hPa的真空度下，过滤约100 mI。水冲洗按72c)准备的玻璃样品瓶后倒出，再次过滤约75 mL水到玻璃样品瓶，作为参比水待用；c)在近似等于1596 hPa的真空度下，过滤约100 mL的海水样品冲洗按72c)准备的玻璃样品瓶后倒出，然后过滤75 mL海水样品到玻璃样品瓶中，得到黄色物质样品溶液；d)将7331c)得到的黄色物质样品溶液放在阴暗处保存待测，并记录相关信息，记录表格见附录B。7332现场无条件将黄色物质样品过滤与保存，应将175 mL海水样晶转移到72d)准备的聚乙烯样品瓶，保存在液氮生物容器中，并记录相关信息，记录表格见附录B。74实验
14、室样品前处理与样品的光学密度测量741 颗粒物光学密度测量光透射测量法颗粒物光学密度测量采用光透射测量方法，测量步骤如下：a)接通实验室电源，启动分光光度计，预热30 rain；b)启动分光光度计操作软件，设置测量参数；c)从液氮生物容器中取出经732f)处理的无菌样品盒，在避光处将参比滤纸和颗粒物样品滤纸解冻至室温，待测；d)测量空气对空气的光学密度光谱，谱线应平直，噪声应低于0000 5；e)将解冻好的两片参比滤纸分别放在分光光度计的样品光路和参比光路上，校正分光光度计，得到的光学密度光谱谱线应平直，在整个测量波长范围内应低于0005，测量得到参比滤纸的光学密度ODv(A)；f)从样品光路
15、上移开参比滤纸，替换成解冻好的颗粒物样品滤纸，样品附着面向入射光，测量颗粒物样品的光学密度OD。(A)。4HYT 1332010742非色素颗粒物样品制作与光学密度测量7421 非色素颗粒物样品制作甲醇提取法非色素颗粒物样品的制作步骤如下：a) 用盐酸浸泡聚碳酸酯滤纸15 min，再用水清洗提泡好的滤纸三次；b)将浸泡好的聚碳酸酯滤纸固定在抽滤装置上，过滤足够的海水作为备用海水；c)将按741步骤测量过光学密度的颗粒物样品滤纸和参比滤纸分别放回到抽滤装置上；d) 靠近过滤器边缘向滤纸上缓慢倒人5 mL10 mL甲醇(53)，静置1 min；e)过滤掉甲醇。靠近过滤器边缘再次向滤纸上缓慢倒入10
16、 mL15 mL甲醇，静置1 h；f)过滤掉甲醇。用少量甲醇沿着过滤器边缘冲洗滤纸两次，用20 mI。7421b)得到的备用海水冲洗滤纸三次，得到非色素颗粒物样品滤纸。7422非色素颗粒物的光学密度测量非色素颗粒物光学密度的测量步骤与颗粒物光学密度的测量步骤相同，将741中的颗粒物样品滤纸换成非色素颗粒物样品滤纸即可。743黄色物质光学密度测量7431 黄色物质样品光学密度测量的操作步骤如下：a)接通实验室电源，启动分光光度计，预热30 rain；b) 启动分光光度计操作软件，设置测量参数；c)测量空气对空气的光学密度光谱，谱线应平直，噪声应低于0000 5；d)将10 cm的比色皿盛满水，放
17、入分光光度计的参比光路和样品光路，校正分光光度计，得到的光学密度光谱谱线应平直，在整个测量波长范围内应低于土0000 5；e)将样品光路中比色皿里的水倒掉，用7331b)得到的参比水冲洗比色皿三次，装满参比水，测量参比水相对于水的光学密度ODt。()；f)将样品光路中比色皿里的参比水倒掉，用7331得到的黄色物质样品溶液冲洗比色皿三次，在比色皿中装满黄色物质样品溶液，测量样品的光学密度OD，()。7432现场只将海水样品保存，应从液氮生物容器中取出样品，放人恒温水浴箱中，恢复至室温。按照7331 a)c)步骤处理海水样品，得到黄色物质样品溶液。按照7431a)f)测量黄色物质样品溶液的光谱吸收
18、系数。744注意事项分光光度法测量海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数的注意事项如下：a)操作前将手清洗干净，不应用手直接触摸样品，以免污染样品；b)在测量颗粒物和非色素颗粒物光谱吸收系数时，滤纸在分光光度计中的位置应保持纹理方向一致；c)在颗粒物测量的过程中，随着时间推移，参比滤纸会变干，应定期在滤纸背面滴入备用海水，以保持参比滤纸适当的水合性；d) 甲醇提取色素时应避免直接用甲醇冲洗样品，防止颗粒分布不均；e) 比色皿事先应在盐酸中浸泡，并用水彻底清洗，使用前应擦干光学透光面，确定其已干净，且没有气泡；f)用于测量的样品应至少是比色皿体积的四分之三以上；g)黄色物质样品溶液与参比水应保持相同
19、的温度；h)测量过程中，每隔1 h2 h应检查一次仪器的基线；i) 如因特殊情况需要重新启动或设置分光光度计时，应重新扫描基线。5HYT 13320108数据处理81 光谱吸收系数计算811颗粒物光谱吸收系数计算颗粒物光谱吸收系数计算公式如下：ap(A)一驾笋ODfp(A)一oDbf(A)卜OD nul)(2)P Ttp一C。+C：ODq(A)一OD。m，)_1 (3)式中：n。() 颗粒物光谱吸收系数，单位为每米(m。1)；Af 滤纸上富集有颗粒物的滤纸面积，单位为平方厘米(cm2)；口光程放大校正因子；yr 过滤的水样体积，单位为毫升(mL)；OD。()样品滤纸的光学密度；OD。，(A)参
20、比滤纸的光学密度；OD“。 在近红外波段颗粒物吸收系数的残余校正，一般取790 nm800 nm范围内()Dfp()的平均值；C。、C。光程放大因子的经验系数，其值可根据实际情况参考相关值，参见附录C。812非色素颗粒物光谱吸收系数计算非色素颗粒物光谱吸收系数n。()的计算公式与颗粒物光谱吸收系数计算公式相同，将式中的ODfp(A)和OD置换成7422中得到的ODfa()和019。“，d。813黄色物质光谱吸收系数计算黄色物质光谱吸收系数计算公式如下：n。(A)一j粤坚(EOD，(A)一oD。(A)OD。“。)(4)式中：n。(A)黄色物质光谱吸收系数，单位为每米(m“)；z 比色皿的长度(通
21、常为01 m)，单位为米(m)；OD。()黄色物质相对于水的光学密度；OD。(A) 参比水相对于水的光学密度；ODnull,g 在长波段可见光或近红外波段黄色物质吸收系数的残余校正，清洁水体取590 nm600 nm范围内019，()和ODh()差值的平均值，浑浊水体取690 nm700 13111范围内OD。()和OD。()差值的平均值。82测量不确定度评定每个站位采集一个或多个平行样，每航次至少应有30的站位采集平行样，计算光谱吸收系数测量的相对标准差RSD。计算公式如下：式中：n平行样个数；RSDHYT 1332010z 吸收系数测量值，单位为每米(m 1)；z吸收系数测量平均值，单位为
22、每米(m 1)。用RSD，、RSD a和RSD。分别表示颗粒物光谱吸收系数、非色素颗粒物光谱吸收系数和黄色物质光谱吸收系数的相对标准差。9试验报告海水中颗粒物和黄色物质光谱吸收系数测量的试验报告应包括以下内容：a)使用的标准，应包括发布或出版年号；b)试验结果，包括各单次试验结果和它们的平均值，按第7章的规定计算；c) 与规定的分析步骤的差异；d)在试验中观察到的异常现象；e)试验日期。HYT 1332010附录A(规范性附录)海水中颗粒物样品采集表海水中颗粒物样品采集表见表A1。表A1 海水中颗粒物样品采集表航次 海区 实验船第页共页水层深度 过滤体积u富集有颗粒物的站位 日期 时间 经度
23、纬度 滤纸面积。 标签号 操作者 备注mL记录者 校对者 复校者附录B(规范性附录)海水中黄色物质样品采集表海水中黄色物质样品采集表见表B1。表B 海水中黄色物质样品采集表航次一 海区 实验船HYT 1332010第页共页水层深度站位日期 时间 经度 纬度 标签号 操作者 备注记录者 校对者 复校者HYT 1332010附录c(资料性附录)光程放大校正因子计算经验系数光程放大校正因子计算经验系数见表c1。表C1 光程放大效应校正因子计算经验系数正交函数 颗粒类型Cl c2(Quadratic Functions) (Particle Type)Mitcehll(1990) 混合培养物(Mixe
24、d Cultures) 0392 0 655Cleveland和Weidemann(1993) 混合培养物(Mixed Cultures) 0378 0 523Moore等(1995) Prochlorococcus marinus 0291 0051Moore等(1995) Thalassiosira weissflogii O299 0746Moore等(1995) Synechococcus WH8103 0 304 0450TflSSfln和Ferrari(1995) Scenedesmus obliqus 0 406 O5】9Ndson等(1998) Dunaiielia terti
25、oecta 0 437 0022Netson等(1998) Phaeodaetylum tricornutum 0294 0587Nelson等(1998) Svnechococcus WH7803 0277 O009幂函数(Power Functions)Mitchell和Kiefer(1 988a) Dunaliella tertiolecta 0540 0467Field samples；Bricaud和Stramski(1990) Dtertiolecta 1630 0 220Cuhures of Mitchell 8L Kiefer(1988a)Kahru和Mitehell(1998
26、) Mitehell(1990)data 1220 0 254lO参考文献HYT 1332010r1GBT 127631 2007海洋调查规范第1部分：总则E2GBT 127632 2007海洋调查规范第2部分：海洋水文观测E3GBT 127637 2007海洋调查规范第7部分：海洋调查资料交换E4JJF 1135 2005化学分析测量不确定度评定E5GB 31026 1993光及有关电磁辐射的量和单位r6 Mitchell B Get a1Determination of spectral absorption coefficients of particles，dissolvedmatcrial and Dhytoplankton f。r discrete water samplesIn：Ocean Optics Protocols for Satellite OceanC010r Sens。r Validati。nNASATM一2000 209966，Greenbelt，Maryland，GoddardSpace Flight Centre，1251537崔清晨海洋化学词典M北京：海洋出版社，1993
