1、ICS 11. 100 C 30 中华人民共和国医药行业标准YY/T 0638-2008/150 18153:2003 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质中酶催化浓度赋值的计量学溯源性In vitro diagnostic medical devices-Measurement of quantities in biological samples-Metrological traceability of assigned values for catalytic concentration of enzymes in calibrators and control mater
2、ials crso 18153:2003 ,IDT) 2008-04-25发布2009-06-01实施晤，(丁丽，I宙飞.鹤防伪国家食品药品监督管理局发布YY /T 0638-2008/ISO 18153: 2003 目IJ1=1 本标准等同采用ISO18153 :2003(体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质中酶催化浓度赋值的计量学溯源性。为便于便用，本标准做了下列编辑性修改:一一本国际标准一词改为本标准气一一用小数点代替作为小数点的逗号，;一一删除国际标准的前言。本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会CSAC/TC1
3、36)提出。本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会CSAC/TC136)归口。本标准起草单位:北京市医疗器械检验所、罗氏诊断产品(上海有限公司。本标准主要起草人:胡冬梅、冯仁丰、黄柏兴、张新梅、王瑞霞、贺学英。I YY /T 0638-2008/ISO 18153: 2003 51 体外诊断医疗器械指令98/79/EC要求，校准品与控制物质的赋值，需通过可获得的较高等盟的参考测量物质和参考测量程序保证其计量学溯源性。按照这一模念，关于溯源性的标准GB/T21415 对测量程序和校准物质的溯源等级进行了具体描述。该标准中的总则同样适用于催化活性的量。宜尽可能在计量上可溯源至
4、SI单位，即校准等级中的最高级。本标准对酶催化活性浓度(以下称为催化被度)测量中校准品和测量程序的等级进行了描述。酶学测量中，一贯导出SI单位定义为摩尔每秒立方米mol/Cs.m3)J，国际计量大会将其命名为凯塔尔每立方米Ckatal/m3)，是溯源等级的最高级，然后是一级参考测量程序，其他较低级测量程序、校准品以及控制物质宜尽可能溯源至该程序。测量血液或其他生物体液中酶的催化浓度有助于疾病的诊断。酶学分析原理为测量底物转化的催化速率，具有速度快、检测限低、分析特异性高和戚本低等优点。只有在同一条件下测量得到的催化雄度值才具有可比性。因此，对一个酶被涮量进行说明时，不应仅有量的类型(例如催化浓
5、度上酷和系萃的名称，而且还需包括特定的测量程序.特别是测量反应中的指示成分。在校准等级的顶点.测量主11宜是国际公认的，例如肌酸激酶CCK)的IFCC参考测量程序，以NADH转化速率测量CK.因此.一级参考测量程序是被测量的定义不可或缺的部分，必须严格遵循所有细节.民主五.艺茫气一内容:一一底物的种类(由酶的特异性决定，可以不同)及其浓度;一一激活剂及其浓度s一二催化反应的方向;-一指示成分;一一缓冲系统及其pH;一一温度5一一-预温时间z一一反应启动物质;一一延迟时间p一一反应时间。酶的被测量的定义以及由此引起的测量结果对程序曲锥重.这一缺陷众所周知:在室间质量评价CEQA)以及方法可转移性
6、评估中会出现问题:存在生告参考区同的多样性，由此可引起酶结果临床误用的风险。常规酶测量的标准化对撞量医孝芜常重要.可通过消除现有生物参考区间的差异，改善监床应用和结果的可比性。可以考虑两种方法:a) 常规只应用每个酶的推荐或标准化测量程序;b) 使用经选定参考测量程序赋值的可互换的酶校准物质，对一个或多个常规割校准=方法(a)推荐程序已被持续追求了20多年。在提高酶测量质量水平和可比性I;.(li上不满意的程序等方面取得了巨大成效。然而，推荐程序方法进行标准化的途径已经这至不足之处在于:在众多推荐程序选择时缺乏一致意见，在常规使用时对推荐程序有意幸主程序对分析和技术上的进步缺乏响应，推荐程序对
7、自动化存在一定程度的不适合e改变，不管是否为推荐程序，一定会改变生物参考值，I恼床医生必然不易接受。、，YY /T 0638-2008/ISO 18153: 2003 改进酶测量设计和分析性能，将会、也必会永无止境。然而，这一过程应遵循科学进步的发展与普及规律。进一步尝试发展和鼓励使用统一的标准化程序，既不实际也不符合需要。与之对应，方法Cb)参考测量程序和校准物质未得到足够重视。提出的异议包括:1.缺乏具有合适基质的稳定酶参考物质作为校准品。2.候选酶校准品与人体样品中的分析物酶存在差异，包括同工酶的差异。3.酶校准品和含有分析物酶的患者样品，在校准(参考)程序和被校准(常规)程序之间缺乏稳
8、定的程序间比值(即缺乏互换性)。由这些问题，对建议进行校准的较高等级的酶参考物质和测量程序二者，提出了系列要求。校准品宜稳定、内含的分析物酶在其基质中的催化特性应和常规样品中分析物酶的催化特性接近;测量程序自身对于目标酶的催化活性，应具有相同的特异性。俨这样，对于每个具有重要临床意义的酶，可通过选择一种参考测量程序及鉴定一系列相关程序实现常规酶测量结果的可比性。该系列的任一程序所得结果都可以在计量学上溯源至选定的参考测量程序。用川山yy IT 0638-2008/ISO 18153: 2003 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准晶和控制物质中酶催化浓度赋值的计量学溯源性1 范围本标准规定了
9、确保酶催化浓度校准品和控制物质赋值的计量学溯源性的方法。这些校准品和控制物质预期用于建立或验证酶催化浓度测量的正确度，由制造商提供，作为体外诊断医疗器械的一部分或与其组合使用。本标准不适用于:a) 对参考测量程序设计或选择的要求:b) 酶质量或酶免疫反应性涉及的量;c) 元赋值、仅用于评价测量程序精密度，即重复性或重现性的控制物质(精密度控制物质); d) 预期用于室内质量控制的控制物质，此类物质具有建议的可接受结果值区间，此区间由不同实验室针对某一规定测量程序协议制定，其限值不具计量学溯源性;e) 常规结果向产品校准品的计量学溯源性，及其与医学判断限的关系;f) 与名义和顺序标度相关的特性。
10、2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而构成为本标准的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单或修订版不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准(包括修改单。GB/ T 21415-2008体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性CISO17511: 2003 , IDT) 国际计量学基础和通用术语词汇CVIM)，第2版，日内瓦:ISO，19931)测量不确定度表达指南，第1版，日内瓦:ISO，19932)盯3 术语和定义3.1 下列术语和定义适用于本标准。分析
11、物analyte 可测量名称中示出的组分。ISO 17511 :2003 ,3. 2J 示例:在血浆中乳酸脱氢酶同工酶1的催化浓度中，乳酸脱氢酶同工酶1是分析物。血浆中乳酸脱氢酶同工酶1的催化浓度代表被测量，参见3.5.1)在此标准中使用缩写V1M:1993.2)本出版物是由以下机构所指派的联合工作组的专家制定的:BIMP国际重量和度量局、IEC国际电工委员会、IFCC国际临床化学和检验医学联盟、ISO国际标准化组织，IUPAC国际理论和应用化学联合会、IUPAP国际理论和应用物理联合会、OIML国际法制计量组织。3)在此标准中使用结写GUM:1993.、，YY /T 0638-2008/IS
12、O 18153: 2003 3.2 3.3 3.4 3.5 3. 6 催化活性catalytic activity 在特定测量系统中，与特定化学反应转化被催化物质速率相关的组分特性。IUPAC/IFCC 1995 ,9.101. 3J 注1:本标准中，组分(component)是一种酶。注2:u催化活性量与活性酶的数量有关，不是其浓度。注3:一贯导出SI单位是katal(kat)(凯塔尔)等于mol/s(摩尔/秒)。注4.在被测量的定义中，测量程序是一个基注5.许多情况下，测量的不是酶分析联反应底物的指示物质的的特定系统的酶催化活催化活性法度注2.在此标准物质的被副量作为测量对象VIM:199
13、3, 2. 注:见3.1的示例。计量学溯源性.在检验医学中，体程序测量常规通过一条具有规定不确的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标VIM:1993 ,6.10J 注1.每个比较由校准传递方案规定的参考注2:溯源性有几种类型.故在本文中使用计量学溯源性这一术语.4 计量学溯源链与技准等级4. 1 原理4. 1. 1 GB/T 21415给出的生物样品中量的测量结果的校准及计量学溯源的命名和基本原理，也应适用于分析物是酶、被测量是导出量类催化活性(或进一步导出量类，如催化浓度或催化含量)的情况。图l中列出了校准等级的几个典型级别水平。一级参考测量程序应为一级校准品赋值，该校准品用于校
14、准下一级测量程序，以此类推，直到终端用户测定常规样品得到的结果。注:此处一级参考测量程序是指一套详细的测量说明，而物质的量咨询委员会(CCQM)定义的一级测量方法2 VY/T 0638一2008/ISO18153:2003 是对涉及多个程序的某种测量原理或方法的一般描述.4.1.2 使用这样的传递方案的先决条件是，等级图中以降序列出的各测量程序测量相同的量。因此，应证明校准等级中从属于一级参考测量程序的各程序测量相同的被测量，例如，在一给定系统中的一种特定同工酶的催化浓度，或表现相同相对活性的一组同工酶的催化浓度。注1:由于催化活性量类定义为在特定反应体系(具体指，例如，底物浓度、辅因子、分析
15、部分的体积分数、温度)中，特定物质被转化的速率，所有降序排列的测量程序的反应体系宜尽量相似。这些反应条件的变异将会增加校准品或控制物质赋值的不确定度，需予以避免。注2:一些中等催化特异性的酶，可以接受不考测量程序，吉普要另外实验提4. 1. 3 原则上，如果制造商产准品。同的被测量。级参考测量程序和制造商产品校. ) .鼓励按实际需求去除多个连uc(y) IE挺累也非庐CGPM国际计量大会儿os国际科学组织(例如IFCC);ML制造商实验室;NMl国家计量机构.符号uc(y)表示测量的合成标准不确定度。最右侧U，(y)下的短线不代表刻度。a BlPM、NMI、ARML及制造商合作。b校准品可以
16、是合适的代用参考物质或人体样品.固1完整校准等级和向SI单位的计量溯源4.2 结构4.2. 1 在有可获得的一级参考测量程序时，一贯导出SI单位凯塔尔每立方米或者摩尔每(秒立方米)(符号为katm-3=mol s-lm-3J)应是所有酶催化浓度校准等级的最高级。注1:u催化浓度量类是以katal(或摩尔每秒)为单位的组分催化活性除以立方米为单位的(原始)系统取样体积。YY /T 0638-2008/ISO 18153: 2003 注2:检验医学中，分母可选用升，得到非一贯导出单位凯塔尔每升，符号为katL - 1 = mol S-I L-1 = (mol/s)/L。注3:另一个使用的非一贯单位
17、为催化活性单位酶单位叫或国际单位勺，符号为U;转换式为:1 U=1mol min-I起16.667X 10-9 kat.也即，1U/L=16. 667X10-9kat/ L. 测量单位与测量程序无关。4.2.2 一级参考测量程序应是给定校准等级的下一水平，也是第一级操作水平。通过对包括反应条件等的测量系统的描述，它定义被测量，尤其是酶组分。测量结果应直接用催化浓度表示，如导出SI单位凯塔尔每升或摩尔每秒升，或是其相应的倍数或约数。测量的每一步应清楚定义，这样才可能对标准不确定度进行估计。应明确从所有输入量计算输出量被测量的函数关系，这样才能按照GUM:1993计算合成不确定度。注1:不确定度评
18、估要求每一测量步骤定义明确、可通过实验控制，这对于自动化测量程序有时难以实现.注2:一级参考测量程序宜由国际组织推荐，如国际临床化学和检验医学学会(IFCC).如果没有国际认可的一级参考测量程序，可鼓励国家计量机构或科学组织建立这样的程序，并寻求国际认可。注3:IFCC目前正在更新其参考测量程序，反应温度用37C代替30C。已经发布了新的37C下测量ALT，AST, CK , r-GT和LDH的参考测量程序。l附录A列出了一级参考测量程序清单.4.2.3 一级校准品应由一级参考测量程序确定其量值和测量不确定度，此过程应通过正式实验室间验证实验完成，验证实验包括互换性评估。注1.一级校准物质的制
19、备和验证宜由国际组织负责.注2:举例来说，BCR咽的有证参考物质是一级校准物质，由欧盟测量和测试机构建立。或者由欧盟的参考物质和测量研究院(TRMM)与IFCC合作建立。附录B为CRM清单a4.2.4 二级参考测量程序应是由一个或多个一级校准品校准(见4.2.3)的测量系统。其反应条件应保证被测量与一级参考测量系统相同。应按4.2.2给出的原则描述测量程序和计算量值及不确定度。注1:为操作方便，二级参考测量程序可比一级参考测量程序更适合机械操作.但4.2.2注1仍适用。注2二级参考测量程序可由参考测量实验室或制造商进行说明和实施。4.2.5 二级校准品应由二级参考测量程序赋值见4.2.的。注1
20、:二级校准品可以有证书.注2:可在参考测量实验室或制造商实验室内进行赋值。注3.二级校准品可以是具有基质的材料5这些基质相似于终端用户常规测量程序测量的人体样品。4.2.6 制造商选定测量程序应指定一个测量系统，如果可能，该系统应经一个或多个一级或二级校准品校准。注:制造商选定测量程序可以是二级参考测量程序(见4.2.4) 4.2.7 制造商工作校准品应由二级参考测量程序赋值并确定测量不确定度(见4.2.的，也可直接由一级参考测量程序赋值(见4.2.2)。在参考测量程序和被校准的程序间的校准物质应具有足够的互换性(见5.3)。注:制造商工作校准品可以是具有基质的材料;这些基质相似于终端用户常规
21、测量程序测量的人体佯品，4.2.8 制造商常设测量程序应由一个或多个制造商工作校准品校准，也可以由计量学上更高级别的校准品进行校准。注:制造商常设测量程序和常规测量程序很接近，但通过使用较小的输入量和影响量容许区间及进行重复测量，可以有较低的测量不确定度.4.2.9 制造商产品校准品的值和不确定度应由制造商常设测量程序来确|定(见4.2.肘，或者由计量上更高级的程序来确定。校准物质对于赋值测量程序与常规测量程序应具有足够的互换性。4 的BCR有证参考物质是目前商业产品的一个例子.本标准列出此信息的目的是方便用户，并不制定和自CEN认可这些产品.VY/T 0638-2008/ISO 18153
22、:2003 4.2.10 终端用户常规测量程序应由一个或多个制造商产品校准品进行校准(见4.2.9)。制造商应负责证明常规测量程序测量常规样品的量与一级参考测量程序测量的量相同。5 计量溯源校准的确认5. 1 原理正确度传递应确保所有相关的测量程序具有基本相同的分析特异性，井且校准品应具有足够的互换性。注2:依据酶分析物的性位上的差异.5.2 测量程序的分析为表明两见测量区间内注:具有相i曰品和有关的人体若以参考测量学关系与制造商校校准品的互换性。两个测量程序间的分析特异程序，对本用于常规测量程序测量这些样品应最好是单一供体、未添加其他物质的人体样品，它们的值应尽可能分布于被测量特定测量区间的
23、整个范围。只有含添加物质的样品与实际样品相似，才允许添加分析物。5.4 控制物质的互换性如果控制物质赋值采用的测量程序和常规测量程序不同，应采用和校准物质同样的方法对其互换性进行研究。5)国际生化和分子生物学联合会酶学委员会代码。5 YY jT 0638-2008jISO 18153: 2003 附录A(资料性附录)IFCC一级参考测量程序到表国际临床化学和检验医学学会(lFCC)一级参考测量程序:l. Bergmeyer HU. Hrder M. Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement
24、 of catalytic concentration of enzymes. Part 2. IFCC method for aspartate amin otransferase (L-aspartate: 2-oxoglutarate aminotransferase. EC 2.6. l. 1). J Clin Chem Clin Biochem 1986;24: 497-510. 2. Bergmeyer HU, Hrder M. Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of
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30、 centration of enzymes. Part 9. IFCC method for a-amylase (1，4-D-glucan 4-g1ucanohydrolase, EC 3. 2. l. 1). Clin Chem 1998 ,36: 185-203 6 YY /T 0638-2008/ISO 18153: 2003 附录B(资料性附录)有证参考物质CCRM)列表EU-RC参考物质和测量研究院CIRMM)可以提供下列物质。制备酶制品是为了血清酶催化浓度测量标准化。每种制品的酶催化浓度，按国际临床化学与检验医学联合会CIFCC)推荐方法测定，并经认定。每种CRM预期用以验证I
31、FCC方法的可转移性，可能也可用以建立一种特定方法与IFCC方法结果的关系。. 物质号码说明BCR-299 肌酸激酶BB(CK-BB)部分纯化物，来源于人胎盘BCR-319 -谷氨酸转肤酶(GT)部分纯化物，来源于猪肾BCR-371 碱性磷酸酶(ALP)部分纯化物，来源于猪肾lRMM/ IFCC 453 人乳酸脱氢酶(LDH)同工酶1BCR-426 丙氨酸氨基转移酶(ALT)部分纯化物，来源于猪心BCR-608 肌酸肌酶MB(CK-MB来源于人心7 r-YY/ T 0638-2008/ ISO 18153:2003 参考文献lJ EN 12286: 1998, In vitro diagnos
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