1、GB/T 4789. 15-2,003 102 前言本标准对GB/T4789. 15-1994(食品卫生微生物学检验霉茵和酵母汁数进行修订。本标准与GB/T4789. 15-1994相比主要修改如下2按照GB/T1. 1-2000对标准文本的格式和文字进行修改。一一一修改并规范原标准中的设备和材料。一一删去培养基和试剂中4.3高盐察氏培养基。本标准自实施之日起，GB/T4789. 15-1994同时废止。本标准的附录A是资料性附录。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人z罗雪云、李风琴、李玉伟。本标准于1984年首次发布，1
2、994年第一次修订，本次为第二次修订。GB/T 4789. 15-2003 1 范围食品卫生微生物学检验毒菌和酵母计数本标准规定了各类粮食、食品和饮料霉菌和酵母菌计数的检验方法。本标准适用于各类食品和饮料中霉菌和酵母菌的计数。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 4789. 2 食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB/T 4789. 28-2003 食品卫
3、生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3. 1 冰箱:0C4C。3.2 恒温培养箱:25 C 28C。3.3 恒温振荡器。3.4 显微镜:lOX100X 3.5 架盘药物天平:0 g500 g.精确至0.5g。3.6 灭菌具玻塞锥形瓶:300mL. 3.7 灭菌广口瓶:500mL。3.8 灭菌吸管:1mL(具0.01mL刻度、10mL(具0.1mL刻度)。3.9灭菌平皿直径90mm。3. 10 灭菌试管:16mmX160 mm。3. 11 载玻片、盖玻片。3. 12 灭菌牛皮纸袋、塑料袋。3. 13 灭菌金属勺、刀等。4 培养基和试1IIJ4. 1 马铃薯葡萄糖琼脂培养基，附加抗菌素
4、z按GB!T4789.28-2003中4.78规定。4.2 孟加拉红培养基:按GB/T4789. 282003中4.80规定。4.3 灭菌蒸馆水。5 检验程序检验程序见图1。103 GB/T 4789. 15-2003 栓样辑食块状食晶粉状啻晶液状食品糊状食晶258+225 mL无菌水25 mL+225mL无菌水6 操作步骤做成几个适当倍数的稀f液选择三个适宜稀辑度，各取lmL加入灭菌平皿内每皿加入适量培#基可选用马恃事-葡萄糖事脂附加抗菌章、高盐事民培葬基或孟加拉红培养基25C-四cI5 d 菌革计量报告图16. 1 以无菌操作称取检样25g(mL)，放入含225mL灭菌水的具玻塞锥形瓶中，
5、振摇30min，即为1 10稀释液。6.2 用灭菌吸管吸取1 10稀释液10mL，注入灭商试管中，另用1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌抱子充分散开。6.3 取1mL 1 10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸五次，此液为1 100稀释液。6.4 按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择三个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿，然后将晾至45C左右的培养基注入平皿中，并转动平皿使之与祥液混匀，待琼脂凝固后，倒置于25C28C温箱中，3d后开始观察，共培
6、养观察5d. 6.5 计算方法z通常选择菌落数在10150之间的平皿进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克(或毫升)检样中所含霉菌和酵母数。稀释度选择及菌落报告方式可参考GB/T 4789. 2。6.6 报告z每克(或毫升)食品所含霉菌和酵母数以cfu/g(mL)表示。7 霉菌直接镜检计撒法霉菌直接镜检计数法见附录A。104 附录A(资料性附录)霉菌直接镜检计敛法常用的为郝氏霉菌计测法，本方法适用于番茄酱罐头。A. 1 设备和材料A. 1. 1 折光仪。A. 1. 2 显微镜。A. 1. 3 郝氏计测玻片s具有标准计测室的特制玻片。A. 1.4 盖玻片。A. 1. 5
7、测微器:具标准穿j度的玻片。A.2 操作步骤GB/T 4789. 15-2003 A. 2. 1 检样的制备z取定量检样，加蒸馆水稀释至折光指数为1.344 7 1. 346 0 (即浓度为7.9% 8.8%) .备用。A. 2. 2 显微镜标准视野的校正2将显微镜按放大率90倍125倍调节标准视野，使其直径为1. 382 mm A.2.3 涂片z洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，以备观察。A.2.4 观测z将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测，一般每一检样观察50个视野，同一检样应由两人进行观察。A. 2. 5 结果与计算z在标准视野下，发现有霉茵茵丝其长度超过标准视野(1.382 mm)的六分之一或三根菌丝总长度超过标准视野的六分之一(即测微器的一格)时即为阳性(+).否则为阴性().按100个视野计，其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。105
