1、ICS 11.220 B 41 中华人民共和国农业行业标准NY /T 557-2002 马瘟诊断技术Diagnostic techniques for glanders 2002- 08-27发布2002 -12 -01实施中华人民共和国农业部发布451 NY /T 557-2002 前百首E司马鼻症(glanders)是马、骤、驴等单蹄动物的一种高度接触性的传染病，被世界动物卫生组织World Organization for Animal Health(英),Office International des Epizooties (法).OIEJ列为B类疾病，我国农业部把该病列为二类动物疫
2、病。本病以在鼻腔、喉头、气管就膜或皮肤上形成鼻瘟结节、溃殇和癫痕，在肺、淋巴结或其他实质器宫发生鼻瘟性结节为特征。本病的病原为假单胞菌属(Pseudomonas)的鼻瘟杆菌(Pseudomonasmallei) 0 本标准的附录A为规范性附录.本标准由农业部畜牧兽医局提出。卒标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位.中国人民解放军军需大学e本标准主要起草人:王世若、王兴龙、韩文瑜、梁焕春、沈广。452 NY /T 557-2002 马鼻瘟诊断技术1 范围牛;标准规定了鼻瘟商素变态反应试验(含点眼试验皮内注射试验及皮下注射试验)，临床检查及补体综合反应的检验方法的技术要求。本标准适
3、用于马、骤、驴等马属动物产地、集散地、饲养、管理、使用单位(含个体及国境口岸等地的鼻瘟检疫。2 临床症状感染鼻瘟伯克霍尔德菌的马、骤、驴及驴螺(统称马)，包括急性鼻痕马、慢性鼻痕马(又称鼻瘟菌素阳性马)和开放性鼻瘟马。2. 1 急性鼻瘟马鼻瘟菌素点D试验阳性反应(或提纯鼻瘟菌素皮内或皮下注射试验阳性反应)及补体结合反应阳性反应。2.2 慢性鼻瘟马病程较长，可持续数月、数年，甚至十多年，病变仅限于内脏，临床症状不明显，或元症状。鼻殖菌素点i试验阳性反应。2.3 开放性鼻瘟马病马鼻霜膜、肺脏或皮肤等处发生典型鼻瘟病变，并向外界排带菌的服性排泄物或脉性分泌物。3 鼻瘟菌素点眼试验3. 1 点眼准备马
4、每次检疫时，点眼23次。2累、驴及驴骤每次检疫应点眼3次。点眼试验应于早晨进行，点眼后，于第3h，6h，9h、24h各检查一次反应强度，而且在第6h和第24h应翻眼检查。3. 2 鼻瘟菌素点眼试验操作3. 2. 1 栅材及药品3. 2.1.1 器材=点眼管、煮沸消毒器、脸盆、消毒盘、慑子、工作服、口罩、线手套、记录表格、耳夹子等。3.2.1.2 药品鼻瘟菌素(如用提纯鼻瘟菌素须用生理盐水稀释，使每毫升含0.5mg)、2%4%跚酸棉球、75%酒精棉球、3%来苏JL、0.1%新洁尔灭、0.1%洗必泰、脱脂棉、纱布等。3.2.2 鼻瘟菌素点眼试验操作方法3.2.2.1 点眼前，须详细检查两眼结膜，以
5、及是否单、双眼瞎，眼结膜正常者，方可点眼，以另一只眼作对照，并做记录。3. 2.2.2 点眼时，助手保定马，检查者用左手食指插入上眼险窝内，使瞬膜露出，以拇指拨开下眼险，使瞬膜与下眼险构成凹兜。右手持吸了鼻瘟菌素的点眼管，保持水平，手掌下缘支撑额骨之眶部，点眼管尖端距凹兜约lcm，拇指按压点眼管的胶皮乳头，滴入凹兜鼻瘟菌素34滴(约O.2 mLO. 3 mL)。注意避免点眼管与眼结膜接触。3.2.2.3 每回点眼应点于同一眼中，一般应点于左眼，如左眼有疾患，亦可点于右眼，但须在记录t注明。453 NY /T 557-2002 3.2.2.4 点眼后，注意拴系，并防止风沙侵入和阳光直射，以及磨擦
6、已被点眼的眼睛。3. 3 反应强度判定标准反应强度判定标准如下a) 强阳性反应(十+)眼险炎症反应特别明显，上下眼险互相胶着一起，出现大量腋汁。b) 阳性反应(十+)，Iil险浮肿，眼睛呈半开状态，出现中等量的版性Iil惨。c) 弱阳性反应(十)，眼结膜发炎，浮肿明显，并含有少量的旅性眼略，或在灰白色粘液眼哆中混有除性眼膨od) 疑似反应(士)眼结膜潮红，有弥漫性浮肿和灰白色秸液性(非版性眼略。e) 阴性反应(-)眼结膜没有反应，或眼结膜轻微充血和流泪.3. 4 点眼试验结果判定呈现十十+、+、十均判定为阳性反应。士和一者，经过5d-6d后要进行第二次点眼，如仍呈士、+或以上反应者，均判为阳性
7、反应。一者虽判为阴性反应，但间隔5d-6 d后，对* 者要进行第二次点眼，如仍呈一者判定为阴性反应，呈士、十或以上反应者则判定为阳性反应。最后结果的判定，应以连续两次或三次点眼中任何一次的最高反应为准。4 鼻瘟临床检查4. 1 操作4. 1. 1 器材及消毒药4.1.1.1 器材:工作服、胶手套、线手套、防护面具、口罩、风镜、反光镜、手电筒、煮沸消毒器、脸盆、耳夹子、记录表格等。4.1.1.2 消毒药，0.1%升柔水、3%来苏JL、0.1%新洁尔灭、75%酒精棉球等。4. 1. 2 检查方法4.1.2.1 检查者及助手均须穿全套工作服，带好胶手套及线手套、口罩、风镜及防护面具，然后在马旁侧，选
8、择适当位置，对妥为保定后的马进行检查。4.1.2.2 按要求，逐项检查马的鼻腔、皮肤、颁下淋巴结及事丸等。注意观察是否有结节、溃荡、鼻漏、皮下浮肿、领下淋巴结肿胀、事丸炎及咳嗽、异常消瘦等症状。4.1.2.3 检查鼻腔时，先以消毒药水(如3%来苏儿)洗净鼻腔内外的鼻漏，然后以双手打开鼻孔，用反光镜或手电筒将光线射入鼻腔深部，仔细检查毅膜上有无鼻痕特有的病变(见4.2.1)。4.1.2.4 检查结束，检查者及助手的手需用0.1%升录水或3%来苏儿或0.1%新泊尔灭或75%酒精棉球彻底消毒，工作服及用过的器材分别用3%来苏儿等浸泡1h.或煮沸10min消毒。检疫现场用10%石灰乳、2%热火碱水、1
9、0%-20%漂白粉消毒。4.2 鼻瘟的主要临床症状4. 2. 1 鼻腔有侬性鼻漏，呼吸带哮鸣音$鼻中隔有大小不等的灰白色鼻瘟性结节，周围有红晕，或有大小不等深浅不一边缘隆起的溃殇;或发生溃殇已愈者，见到星芒状、冰花状的癫痕。皮肤有结节，进而形成深陷的火山口状溃荡，排出灰黄色或混有血液的毅稠旅汁，溃荡底面似猪油状，结节和溃殇附近的淋巴管肿大、硬团，粗如绳索(索状肿).沿索状肿可发现串珠状结节和溃瘤。上述症状为典型的鼻瘟临床症状，这种马不进行鼻瘟菌素点眼试验，即可定性，此均判定为开放性鼻瘟马。4.2.2 鼻腔有鼻漏、领下淋巴结肿胀、皮下浮肿、咳嗽、靠丸炎、消瘦等疑似鼻瘟症状者，除其中确有大量服性鼻
10、漏，马体异常消瘦，同时鼻瘟菌素点眼试验呈现阳性反应者，判为开放性鼻瘟马外.其他如鼻瘟菌素点M试验和补体结合反应均呈阳性反应者，判定为急性鼻瘟马。454 5 鼻瘟补体结合反应5. 1 材料准备5. 1. 1 被检血清的采取及处理被检Ifn.清的采取及处理见附录A(规范性附录入5. 1. 2 各种要素的配制及效价测定5.1.2.1 各种要素的配制NY /T 557-2002 5.1.2.1.1 生理盐水，100mL蒸馆水中加入0.85g氯化纳(化学纯)，充分搅匀后，用滤纸过滤。经107 kPa 15 min灭菌后使用。5.1.2.1.2 绵羊红细胞悬液绵羊脱纤血的制备:采健康绵羊颈静脉血至装有玻璃
11、珠的灭菌脱纤瓶内，振荡15min - 20 min.脱去纤维蛋白，使其失去凝固性，即为脱纤血。绵羊红细胞泥的制备:将脱纤血用两层纱布滤过后，移入离心管内，加2倍3倍量的生理盐水，混匀，以2000 r/min离心沉淀10min后，吸去上清液，再加生理盐水，用玻璃棒搅匀，再离心沉淀，如此反复二次(第一次除外)，直到上清液透明为止，然后吸去上消液，所剩沉淀，即为红细胞泥(压积红细胞)。绵羊红细胞悬液的配制及检定=用生理盐水将红细胞泥配成2.5%的浓度，即为试验用的红细胞悬液。应用前须进行检定，看其浓度是否适当。其方法是，取2mL生理盐水放入反应管中，然后加入2.5%红细胞悬液0.5mL , 71昆匀
12、后，如呈现徽红色即为合格，倘若色淡，需酌量补加红细胞泥予以校正(必要时应计算红细胞数，以每立方毫米中含50万个左右为度)。5.1.2.1.3 溶血素。5.1.2.1.4 补体=可用冻干补体。也可应用豚鼠的新鲜血清作补体，新鲜补体须在实施反应的前一天，自3只以上健康豚鼠心脏采血，根据体重不同，每头采血5mL8 mL左右。将采集的血液置培养皿中凝固(每个约盛15mL为宜)，随后，用玻璃棒划破血凝块，放37C水浴箱中15min后再放于冰箱中过夜，次日吸取血清，离心沉淀后，其上清即为补体，新采集的补体只能当天使用，置于H8C冰箱，可使用2d;如置20 C -25C冰箱冷冻保存，可供一个月使用。5.1.
13、2. 1- 5 标准血清z鼻瘟阴、阳性血清。5.1.2.1.6 鼻瘟抗原。5.1.2.2 各种要素的效价的测定5.1.2.2.1 溶血素效价测定(通常-个月左右测定一次)5.1.2.2.1.1 稀释榕血素z先将溶血素稀释成1, 100的基础液(如溶血素以石炭酸防腐时，则取0.1 mL加9.9mL生理盐水，如为甘油防腐，则取0.2mL加9.8mL生理盐水，混合即成)，再按表1进一步稀释。亵1混血素稀释法稀要章ImL1 500 11000 1 1 500 112000 1 I 100溶血章ImL。.2 O. 1 O. 1 O. 1 生理盐水ImL0.8 O. 9 1. 4 1. 9 全量ImL1.
14、 0 1. 0 1. 5 2.0 5.1.2.2.1.2 补体21220稀释的补体，每管0.5mL. 5. 1- 2. 2. 1. 3 溶血素效价测定的方法z按表2实施。释倍1 2 500 O. 1 2. 4 2. 5 数13000 1 3 500 1 04 000 1 : 5 000 O. 1 O. 1 O. 1 O. 1 2. 9 3. 4 3. 9 4. 9 3. 0 3. 5 4.0 5.0 455 N Y /T 557-2002 表2溶血素效价测定法稀释倍数(1 X) 对照要章ImL1 : OO 500 100 1 500 2000 2500 3000 3500 4000 5000
15、补体红细胞溶血章稀粹的前年血章ImLQ. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 0.5 O. 5 。.5 叶理盐水ImL.0 .0 1. 0 .0 1. 0 , 0 1. 0 1. 0 1. 0 1. 5 1. 5 2. 0 1 20补体。5O. ;) O. 5 O. 5 o. 5 0.5 O. 5 O. 5 0.5 O. 5 2. :川吉L细胞悬擅1m!。-5O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 o. 5 O. 5 O. 5 。-50.5 O. 5 O. 5 L一感作37 C水浴15min 一-一一一一主占果?十1十+ 十tft+t+ +十t+十十+十十+ -一注
16、2十斗十+为100%溶血z十十+为75%溶血?+为50%溶血，+为25%榕血;-为不黯血。5.1.2.2. 1.4 溶血素效价确定:能使0.5mL的2.5%红细胞悬液在3TC-38C水浴箱内10min完全溶血的最小是溶血素，称为一个溶血素单位，或溶血素效价。测定补体、抗原和做正式试验时，溶血素的用量须提高倍，即两个单位。例如表2的测定结果，0.5时_1 : 2 500为一个溶血素单位，则1: 1 250的稀释液0.5mL，即为两个单位。5.1.2.2.2 补体效价测定每次进行补体结合反应时，应于当天按表3的程序在阳性血清和阴性血清的参与下，测定补体效价表3补体效价测定法试管号对照要章ImL1
17、2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 20补体O. 19 0.22 0.25 0.28 O. 31 0.34 0.37 0.40 。.43 。.46 生理盐革o. 31 0.28 O. 25 0.22 O. 19 O. 16 O. 13 O. 10 0.07 0.04 O. 5 抗原一列O. 5 O. 5 O. 5 0.5 O. 5 O. 5 0.5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 1 1 0阴性血清O. 5 O. 5 O. 5 0.5 O. 5 。.5 0.5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 血清组抗原二列血清1. 0 1. 0 1. 0 .0 1.0 , 0 1.
18、0 1.0 1. 0 1. 0 .0 一一-一-,-_.-抗原二列o. 5 。.5 O. 5 0.5 0.5 O. 5 0.5 0.5 O. 5 O. 5 (). 5 1 10阳性血清O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 Q.5 O. 5 o. 5 O. 5 血清组抗原四列血清1. 0 1.0 , 0 .0 1.0 1. 0 1.0 1.0 1.0 1. 0 .0 感作置3TC-38C水浴箱中20mn 溶血章(2单位)O. 5 O. 5 0.5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 0.5 0.5 O. 5 O. 5 2.5%红细胞悬被O. 5 0.5 0.5
19、 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 一一感作置37C-38C串浴箱中20ntin 1 10阴性F列同. 斗才卡+ +十十+十卡+十十+十+十结果血清组-列十斗+十十十+十十+ t+十十+十十+十十+(例)1 10阳性-t列十+血清组四列十十十+ 十十十十十十+十+斗斗斗+十十+十十+注:一完全不榕血.+为25%溶血;+为50%溶血.+为75%溶血，+为100溶血。从表3看出，第二、四列分别为第一、三列的对照，其结果应该是除前儿管因为补体量不足，不发生456 NY!T 557-2002 或轻微发生溶血外，其余各管应完全溶血，在此前提下，确定补体效价，
20、即第三列完全不溶血与第一列完全溶血的最小量补体对应管所用的补体量，即为补体效价，如表3之例，补体效价为1 20稀释的补体0.34 mL(第六管)。正式试验使用的工作补体用量可按比例换算成使用。5时，的稀释倍数。如t例:20 , X O. 34 , O. 5 O. 34X20XO. 5 10 X一.29.4(倍)0.34 即补体作1, 29. 4稀释，每管0.5mL。为了方便，现将不同效价的补体，做正式试验使用0.5时，时，原补体应稀释的倍数列于表4。表4补体使用换算亵补体效价(1, 20倍的毫升数)使用0.5mL时原补体应稀释的倍数O. 19 1 52.6 0.22 1 , 45.5 O. 2
21、5 1 I 40. 0 0.28 1 : 35.7 0.31 1 I 32. 2 O. 34 1 29. 4 0.37 1 27. 0 0.40 1 , 25. 0 0.43 1 , 23. 2 0.46 1 , 21. 7 5.1.2.2.3 抗原效价测定按表5进行抗原效价测定。亵5抗原效价测定抗原稀释倍数对!照要章/mL1 I 10 1 I 50 1 75 1 I 100 1 I 150 1 I 200 1 300 1 I 400 1 I 500 1 I 10 被测抗原O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 0.5 0.5 。.5 O. 5 O. 5 O. 5 稀释的阳性血清O. 5 O.
22、 5 O. 5 O. 5 0.5 。.5 0.5 O. 5 O. 5 (10.25.50.75.100倍工作补体O. 5 O. 5 O. 5 Q. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 生理盐水O. 5 感作置37:-38C水浴箱中20min 2单位溶血章O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 0.5 0.5 O. 5 O. 5 O. 5 2.5%红细胞悬液O. 5 O. 5 O. 5 o. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 O. 5 感作置37C38C水浴箱中20min 注g每一血清稀释度(1110.1125 ,1 50 ,1: 75
23、,: 100)各做列，共计5列.按表5操作结束后，自水浴箱中取出反应管，在室温下静置一夜，次日观察记录结果。现举例说明如表6，457 NY /T 557-2002 表6抗原效价测定结果被测抗原稀释倩数血清稀释倍数对照1 10 1 , 50 1 75 1 100 1 150 1 200 1 , 300 1 , 400 1 500 1 1 0 ( 列管)。10 20 30 100 1 25 (二列管10 。10 30 60 100 1 : 50 (歹IJ管)10 10 。10 20 40 60 100 1 75 (四列管)20 10 10 10 。10 40 60 100 100 1 IOO(五列
24、管)30 20 20 20 10 40 100 100 100 100 注:表中的数字为溶血百分数(%).0为完全阻止榕血。工作抗原效价确定:应以最高稀释度的鼻瘟阳性血清与最高稀释度的抗原发生最强反应域的顶点为准，确定该抗原的工作效价，如上述为1 150。5.2 正式试验5.2. , 要素准备按5.1. 2项的测定结果对各种要素作稀释。5.2. 被检血清(见附录A)，每管滴加0.5mL。5.2. .2 工作抗原:按测定的效价稀释后，用0.5mLo 5.2.3 工作补体:按测定的效价稀释后，用。.5mL。5.2.4 溶血素:2单位，每管加0.5mL。5.2. .5 红细胞悬液，2.5%悬液，每管
25、加0.5mL。5.2.6 鼻瘟阳性血清:灭活后，1 10稀释.用。.5mLo 5.2.7 鼻瘟阴性血清:灭活后，1 10稀释，用0.5mL。5.2.2 实施反应按表7、表8的程序实施。表7马血清检查法对照管检查管对照要章ImL1 2 1 , 10阴性血清11 10阳性血清生理盐卓1. 35一被撞血清O. 15 0.5 O. 5 O. 5 工作抗原O. 5 O. 5 。.5工作补体O. 5 O. 5 。.50.5 组感作置37C38C水浴箱中放置20min 溶血章(2单位O. 5 0.5 0.5 O. 5 2.5%红细胞悬液O. 5 O. 5 0.5 0.5 感作置37C38C水浴箱中放置20m
26、in 抗原1. 0 0.5 O. 5 0.5 结果完全溶血待定完全榕血不熔血完全榕血精血章1. 0 O. 5 0.5 O. 5 完全榕血因为骤、驴、驴骤血清在灭活时，己作了1: 10稀释，所以在进行正式试验时，可按照表8直接添加被检血清即可。458 NY /T 557-2002 表8曝、驴及驴骤血清检查法要章1m!.对照管检查管1 10被检血清1. 0 O. 5 工作抗原O. 5 工作补体O. 5 O. 5 感作37C38(水洛箱中放置20min 溶血章(2单位)O. 5 O. 5 2.5%红细胞悬液O. 5 O. 5 感作37.C38C水m箱中放置20min 结果完全榕血待定5.3 结果判定
27、5. 3- 1 标准比色曹配制为能正确判定反应的最终结果，应按以下方法配制标准比色管，供第二天终判反应时与反应管比色用。配制标准比色管时，应于正式试验的同时实施，所用反应管的管径大小和管壁厚薄，以及各种要素都应与正式试验时使用的相同。5.3.1.1 0.5%溶解红细胞液的配制g取红细胞泥2.5mL加于47.5mL蒸馆水内，使红细胞完全溶解后，再加1.7%盐水50mL，制成2.5%溶解红细胞液，然后再用生理盐水稀释5倍，即0.5%溶解红细胞液。为了方便，也可将当天测定补体等的完全溶血的各管液体(就是0.5%溶解组细胞液)收集起来，供配制标准比色管用。5.3.1.2 0.5%红细胞悬液的配制2于2
28、.5mL的2.5%红细胞悬液内加10mL生理盐水即成，然后按表9加0.5%溶解红细胞液和0.5%红细胞悬液，摇匀后，静置室温下，次日待用。表9标准比色臂的配制反应管溶血百分比1(%) 要章ImL10 20 30 40 50 60 70 80 90 0.5%溶解红细胞液1m!.0.25 O. 5 0.75 1. 0 1. 25 1. 5 1. 75 2.0 2. 25 0.5%虹细胞悬液ImL2. 25 2.0 1. 75 1. 5 1. 25 1. 0 0.75 O. 5 0.25 5.3.2 第一次判定(初判)自水浴箱中取出反应管后，即可进行。先观察总对照1、2、3、4管，应呈现下述结果，方
29、说明所用要素完全合格，才可判定被检血清的反应结果。对照管13阴性血清对照，完全溶血。对照管2，阳性血清对照，完全不溶血。对照管3，抗原对照，完全溶血。对照管4，溶血素对照，完全溶血。然后观察被检血清的第一管(即被检血清对照管)完全榕血时，说明反应正确，再检查第二管，完全榕血，即判定为阴性，并登记结果，若第二管不完全溶血或不溶血，则应将反应管留置室温内(置冷暗处并盖以红黑布)12h后，再作第二次判定。5. 3. 3 第二次判定(终判)取被检血清的第二管与制备的上述标准比色管进行比色。按其上液色调和沉淀红细胞的量，决定洛血程度，再按下述标准对被检血清作终如U: a) 阳性反应:010%溶血者为+，
30、1l%40%溶血者为+十十;459 NY /T 557- 2002 41%50%溶血者为十+，b) 可疑反应，51%70%溶血者为十，71%90%溶血者为士。c) 阴性反应91%100%溶血者为一。6 鼻瘟菌素皮内注射试验无鼻瘟症状马，鼻瘟商素点眼试验阴性反应，补体结合反应阳性反应者，须做鼻瘟菌素皮肉或皮下注射试验。皮肉注射试验，即以生理盐水稀释的提纯鼻瘟菌素于马颈部皮内注射O.1 mL，经72h，用卡尺检查皮肤的增厚度及炎症反应，如局部皮肤炎症反应明显，皮肤增厚4mm以上者，判定为阳性反应(+);如局部炎症反应明显，皮肤增厚2.lmm3. 9 mm者，判为疑似反应(土);如局部皮肤无炎症反应
31、，皮肤增厚2mm以下者，判定为阴性反应(-)。对于疑似反应的马可在对侧部位，用同一批鼻瘟菌素再做第二回皮肉注射试验，注射后经72h，仍虽疑似反应或以上者，判定为阳性反应。7 鼻殖菌素皮下注射试验山于这种试验干扰以后的血清学诊断，所以一般选用上述两种鼻瘟菌素试验，有些国家也不接受此试验。试验前的前一天和注射时，以及注射后9h、12h和15h，马体温应不高于38.8 C。将颈中部10 cm2的面积剪毛消毒后，于其中心皮下注射2.5m L稀释的马来因。如为阳性马，则在注射后头15h 内出现40C或高于40C的高热，注射部位在24h内出现边缘隆起、坚实、有痛感的肿胀。没有感染鼻瘟的马，不出现反应，或者
32、出现轻微的暂时性局部肿胀。可疑马在14d后用双倍剂量的马来因重检。8 马鼻瘟的综合判定8. 1 有鼻瘟临床症状的马，按本标准4.2的规定，判定为开放性鼻痕马或急性鼻瘟马。8.2 有疑似鼻症症状马，鼻瘟菌素点服试验或鼻瘟菌素皮内注射试验阳性反应，补体结合反应阳性反应者，判定为急性鼻瘟马。8. 3 元鼻瘟症状马，鼻瘟菌素点眼试验或鼻痕菌素皮内(皮下)注射试验阳性反应，补体结合反应阴性反应者，判定为慢性鼻瘟马(又称鼻瘟菌素阳性马或马来因马)。8.4 无鼻痕症状马，鼻瘟菌素点眼试验(或鼻瘟菌素皮内、皮下注射试验)及补体结合反应均阴性反应者，判定为非鼻瘟马。9 鉴别诊断在确定为鼻瘟马之前，须与以下三种疾
33、病作鉴别。9. 1 流行性淋巴管炎在皮肤、皮下组织和粘膜上发生结节、溃荡和淋巴管囊肿;结节常呈串珠状，溃荡常突出于周围皮肤表闹，呈蘑菇状;取服汁或分泌物做压片检查，可见到呈椭圆形或西瓜籽状，有双层菌膜，胞浆内有24个能回旋运动的闪亮小颗粒，即流行性淋巳管炎囊球菌。9. 2 马腺疫领下淋巴结肿胀，初硬固、热痛，达鸡蛋至拳头大，继而成熟变软，最后破溃，流出黄色粘稠腋汁;取陈汁革兰氏染色镜检，可见4050个或更多菌体构成的长链状革兰氏阳性球菌，即马腺疫链球菌。9.3 类鼻瘟主要发生在热带和亚热带地区，为自然疫源性疾病，当在疫区发现可疑病畜有不可解释的化服性疾病时，取腋性渗出物革兰氏染色镜检，发现菌体
34、两极浓染，革兰氏阴性短杆菌，有鞭毛，能运动;在甘泊琼脂平板l一形成同心圆菌落，表面有皱纹，似蜂窝状等特征，即类鼻痕杆菌。460 NY /T 557-2002 附录A(规范性附录)被检血清的采取和处理A.l 马匹采血局部的消毒处理及采血在被检马匹颈部前三分之一处，静脉沟部剪毛后，用硕酒及酒精消毒，将灭菌的采血针沿静脉沟刺入颈静脉内.使血液沿试管壁流人管内，应防止血液直接滴人，引起溶血。A.2 被检血液的运送采集的血液，冬天应防止冻结，夏天应防腐败，并迅速送往化验室。如在72h内不能送到，应先用铅金耳将凝固血液与试管壁间划离，待血清自血液中分离出，倒入另一支灭菌试管内，并按1mL血清加入5%石炭酸生理盐水1滴2滴，进行防腐，然后送检。A.3 被检血清的处理马血清可先不作稀释，直接在58C60 C水浴箱中加温30min，使其灭活。骤、驴及驴骤血清则需先用生理盐水作1: 10稀释后，再置63C 64C水浴箱中，灭活30mino 461
