1、Ics 6712099B 45 囝亘中华人民共和国国家标准GBT 211652007肠衣中氯霉素残留量的测定液相色谱一串联质谱法Determination of chloramphenicol residues in casingLC-MSMS method2007-10-31发布 200804-0 1实施宰瞀嬲鬻瓣訾辫瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会仅11刖 吾GBT 211652007本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。本标准主要起草人：徐锦忠、吴斌、李丽花、沈崇钰、赵增运、丁涛、陈惠兰、
2、张扬、蒋原、蔡宝亮、陶宏锦。肠衣中氯霉素残留量的测定液相色谱一串联质谱法1范围本标准规定了肠衣中氯霉素残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于肠衣中氯霉素残留量的测定。2规范性引用文件GBT 21 1652007下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-1992，neq ISO 3696：1987)3方法提要试样加
3、入内标后用乙酸乙酯提取，蒸干提取溶液，利用液相色谱一串联质谱仪测定，梯度洗脱去除基质干扰，内标法定量。4试剂和材料41水：应符合GBT 6682规定的一级水。42甲醇：HPLC级。43乙酸乙酯：分析纯。44氘代氯霉素内标：纯度99。45氯霉素标准物质：纯度99。46氯霉素标准储备溶液：01 mgmL。准确称取适量的氯霉素标准物质(45)，用甲醇配成01 mgmL的标准储备液。储备液贮存在4冰箱中，可使用2个月。47氘代氯霉素内标储备溶液：01 mgmL。准确称取适量的氘代氯霉素标准物质(44)，用甲醇配成01 mgmL的标准储备液。储备液贮存在4冰箱中。48氘代氯霉素内标工作溶液：取适量内标储
4、备液稀释成500 ngmL工作溶液，内标工作溶液在4保存。49氯霉素标准工作溶液：用空白样品提取液分别配成氯霉素浓度为02 ngmL、05 ngmL、10 ngmL、20 ngmL、50 ngmL、100 ngmL标准工作溶液，标准工作溶液中内标物浓度均为50 ngmL。标准工作溶液在4C保存，可使用一周。5仪器51 液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。52分析天平：感量01 mg和001 g各一台。53旋转蒸发器。54旋涡混匀器。55离心机。】GBT 21165200756移液器：lo mL和200tL。57离心管：50 mL，具塞。58浓缩瓶：50 mL。6试样的制备与保存61试样制备
5、将实验室样品绞碎均匀，分出05 kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。62试样保存将试样于一18下保存。7测定步骤71样品处理称取5 g试样，精确到001 g。置于50 mL具塞离心管中，加入0100 mL 500 ngmL的内标物(48)，加入10mL乙酸乙酯，于旋涡混匀器上快速混合2rain，以2 ooo rrain离心5rain，收集上层清液于干净浓缩瓶中，再次加入6 mL乙酸乙酯，于旋涡混匀器上快速混合z rain，以2 000 rmin离心5 rain，合并上清液，于40水浴中旋转蒸发至干，用甲醇+水(30+70)定容至10 mL，溶液过045 Pm滤膜到进样瓶中
6、，供液相色谱一串联质谱仪测定。72测定721液相色谱条件a)色谱柱：ODSCl8，5 pm，150 mmX 21 mm(内径)，或相当者；b) 流动相：甲醇(A)+水(B)，0 min30 rain 3090A，3o rain6O min 90A，60 min61 min 30A，61 min80 rain 30A；c)流速；02 mLmin；d)柱温：30；e)进样量：25 pL。722串联质谱条件a)离子源：电喷雾离子源(ESI)，正离子监测；b) 扫描方式：选择离子检测(sRM)；c) 雾化气、鞘气为高纯氮气，碰撞气为高纯氦气；d) 电喷雾电压、碰撞电压等自动优化至最佳值；e)定性离子对
7、、定量离子对和碰撞气能量见表1。表1 定性离子对、定量离子对和碰撞气能量定性离子对(ms) 定量离子对(mz) 碰撞气能量eV321176 17321152 321152 19321194 一16326157(内标) 326157(内标) 一1973液相色谱一质谱测定氯霉素标准工作溶液(49)在液相色谱一串联质谱设定条件下分别进样，以标准与内标物峰面积比值为纵坐标，工作溶液浓度(ngmL)为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作益线对样品进行定量，样品溶液中氯霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，氯霉素参考保留时间为360 rain+02 min。氯霉素标准物质色谱图和质
8、谱图参见图A1。274空白试验除不加入试样外，均按上述步骤进行。8结果计算结果用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值R。m。hRm式中：“样品中氯霉素的浓度，单位为微克每千克(pgkg)；R。样品中氯霉素的峰面积与相应内标峰面积比值；m。氯霉素标准品的质量，单位为纳克(ng)；R，标准品中氯霉素的峰面积与相应内标峰面积比值；m样品质量，单位为克(g)。9检测低限和回收率91检测低限本方法对肠衣中氯霉素残留量的检测低限为01tgkg。92回收率肠衣中氯霉素添加浓度及平均回收率(内标校正)的试验数据在01tgkg时，回收率范围为7401300；在03tgkg时，回收率范围为9181360；在10ugkg时，回收率范围为9371341。GBT 211652007GBT 21 1652007附录A(资料性附录)标准物质色谱一质谱图Tlc(总离子流) 保留时间：3 61j 保留时阃：361I 二： 保留时间：3 60”5b0己_一万：二一_I互守一扯t胃忑il d 、mk mz mz256 78780 256781 256782mz图A1 氯霉素标准溶液的液相色谱一串联质谱的总离子流和氯霉素与氯霉素内标的选择离子色谱图及选择离子棒状图0o
