1、ICS 67120X 04 a雷中华人民共和国国家标准GBT 2 1 320一2007动物源食品中阿维菌素类药物残留量的测定 液相色谱一串联质谱法Determination of avermectins residues in foodstuffs of animal OriginLC-MSMS2007-1 0-29发布 2008040 1实施丰瞀粥鬻瓣訾糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会促19刖 昌GBT 21320-2007本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中国农业大学、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：沈建忠、丁
2、双阳、李晓薇、夏曦、张素霞、江海洋、程林丽、曹兴元、彭涛、国伟。动物源食品中阿维菌素类药物残留量的测定 液相色谱一串联质谱法GBT 21320-20071范围本标准规定了动物源食品中阿维菌素类药物残留量的液相色谱一串联质谱检测法。本标准适用于牛肝脏和牛肌肉中埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素残留量的测定。本标准的方法检测限：埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素均为15,ugkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这
3、些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 1992，neq ISO 3696：1987)3原理用乙腈提取试样中的4种阿维菌素类药物，经C，。固相萃取柱和c。固相萃取柱净化后，用液相色谱一串联质谱法测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GBT 6682规定的一级水。41乙腈：色谱纯。42三乙胺。43甲酸：色谱纯。44埃普利诺菌素标准品：纯度98。45阿维菌素标准品：纯度98。46多拉菌素标准品：纯度943。47伊维菌素标准品：纯度98。48 C18固相萃取柱：500 mg，3 m
4、L。49 C8固相萃取柱：500 mg，10 mL。410样品稀释液：水+三乙胺(30+0045，体积比)。411 C，8固相萃取柱洗涤液：乙腈+水+三乙胺(40+60+01，体积比)。412 C。固相萃取柱洗涤液：乙腈+水+三乙胺(30十70+o1，体积比)。413埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准储备液：100,u-gmL。分别准确称取0010 g埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准品(4447)于四个100 mL容量瓶，用乙腈溶解稀释至刻度。 20保存六个月。414混合标准储备液：1 p-gmL。取四种标准储备液(413)各10 mL于100 mL容量瓶中，用乙腈稀
5、释至刻度，4保存三个月。415标准工作液：分别量取适量上述混合标准储备液(414)，用乙腈稀释成浓度为1、5、10、20、50、100和200 ngmL的系列标准工作液。1GBT 21320-20075仪器51液相色谱一串联四级杆质谱仪：配有电喷雾电离源(electray spray ionozition，ESI)。52离心机。53振荡器。54涡动仪。55氮吹仪。56组织匀浆机。6试样制备与保存取新鲜或解冻的动物组织，剪碎，10 000 rmin匀浆1 rain。一20C下保存。7分析步骤71提取称取试样25 g(精确到001 g)，于50 mL离心管中，加8 mL乙腈，涡动05 rain，2
6、 000 rrain离心2 rain，取上清液。残渣用8 mL乙腈重复提取一次，合并两次上清液。加30 mL样品稀释液(410)，涡动混合均匀，为样品提取液，备用。72净化取C，s固相萃取柱，依次用5 mL乙腈、5 mL C，。固相萃取柱洗涤液(411)活化。将备用的样品提取液(71)过柱。用20 mL C。固相萃取柱洗涤液(411)淋洗，抽干；再用3 mL正己烷淋洗，抽干。2 mL乙腈洗脱，收集。加入4 mL样品稀释液(410)，混合均匀，备用。取C8固相萃取柱，依次用5 mL乙腈和c8固相萃取柱洗涤液(412)平衡，取备用液过柱。用10 mL C。固相萃取柱洗涤液(412)淋洗，挤干；再用
7、8 mL正已烷淋洗，挤干；用2 mL乙腈洗脱，收集洗脱液。于50下氮气吹干，加05 mL乙腈溶解。过02*m滤膜，进样分析。注：上样溶液、淋洗液和洗脱液的流速均控制不超过1 mLmin。73基质添加标准工作液的制备取空白试样按提取(71)与净化(72)进行处理，在洗脱液中加入05 mL相应浓度的标准工作液(415)，氮吹、定容后作为基质添加标准工作液，供液相色谱一串联质谱仪测定。74测定741液相色谱条件色谱柱：C18，150 minX21 mill，粒径3 pm，或相当者。流动相：乙腈+水+甲酸(95+5+o1，体积比)。流速：02 mLmin。柱温：室温。进样量：10 pL。742质谱参考
8、条件离子化方式：电喷雾离子源，正离子扫描(EsI+)。毛细管电压：32 kV。离子源温度：120。雾化气：300。倍增器电压：650 V。碰撞气：氩气。其他参数见表1。2表1质谱参数设置(；BT 21320-2007母离子 子离子 驻留时间 碰撞能量 锥孔电压药物(mz) (mz) eV V35204埃普利诺菌素 9366 04 28 7549003274阿维菌素 8956 O4 25 7044933532多拉菌素 9215 04 28 804490329r伊维菌素 8975 04 25 707533a定量离子。743液相色谱串联质谱测定根据样品溶液中药物的残留量，选择峰面积相近的标准工作液作
9、为随行标样。对标准工作液和样品溶液等体积参插进样进行测定。4种药物的离子色谱图见附录A。7431定性测定通过液相色谱保留时间与串联质谱选择离子共同定性。待测样品的保留时间与外标标准样品保留时间的相对偏差不大于25。且与外标标准品相比，样品中待测组分两个定性子离子的相对丰度比不大于10。7432定量测定分别取适量试样溶液和相应浓度的基质添加标准工作液，作单点校准，以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样液中阿维菌素类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内，试样液进样测定过程中应参插标准工作液，以便准确定量。标准溶液离子色谱图见附录A。8结果计算与表达按式(1)计算试样中阿维菌素类药物的残留量。
10、X一叁!丕!圣生 A。m式中：x试样中药物的残留量，单位为微克每千克(pgkg)；A。试样特征离子峰面积；V试样溶液最终定容体积，单位为毫升(mL)；f，基质标准溶液浓度，单位为微克每升(pgL)；A，基质标准溶液特征离子峰面积；m试样质量，单位为克(g)。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位。3GBT 2 1 320-20079精密度本方法的批内变异系数20，批间变异系数30。附录A(资料性附录)标准溶液色谱图GBT 21320-2007曩一，一，一，发：二，一，一一：一一一1可 酽sz 8100250 6 50 C：，。，。，3。，。，一 0+r
11、r1Trr_7r”7Tr111T7r_1Tr11TrPr”1T7HTrf1r1TrrnlTr，111f，r”11T，-”1”0050 ep 9215，353 2 o o4 oj，、，+，、，、，、，。，、，。，￥!，!b，、，。，。，。，。，。，一100? ES741一墨，一一一，一辫，一一，越=：3 ：j氅驾一茸一，一一一，一：辱，一一，ZS一，”I”00i s*t 897 5，3291 。一 ：i_一一一一一、一一，、，j幸牟!辈!一，一，。一z：s。 0+trrrrr1，Trrrrrrr，1，rTrrrrrrr1，ttTrr；rrrn，1，trfrrrrr，1，T十；rrr-r11，-r
12、rl10025，0 55i00738056449 3G：L 。 一 ，一一一，一一一，一一翼一，n1rTl-r，P，T1-r1r1rr，r1r_，TT，r1P，r1r1-PTr1，-r1r1r1r，jP，P，1r1r1r1r1r1r1r，r1r1r1r1F1；=，r，r，P，r一10025，0 s?。89569274100“1 “0j一一一一一一一一一一一。，!：!：一，一2髯!，!：!；，一，一，一。A一一埃普利诺菌素mz490选择离子色谱图；B一一埃普利诺菌素mz352选择离子色谱图；c多拉菌素mz449选择离子色谱图；D 多拉菌素mz3532选择离子色谱图；E伊维菌素mz7533选择离子色谱图；F伊维菌素mz3291选择离子色谱图；G一一阿维菌素mz4493选择离子色谱图；H阿维菌素mz3274选择离子色谱图；I四种药物的总离子流色谱图。图A1 阿维菌素类标准溶液的离子色谱图5
