1、ICS 67120X 04 a亘中华人民共和国国家标准GBT 2 1 322-2007动物源食品中3一甲基喹喔啉一2一羧酸残留的测定 高效液相色谱法Determination of 3-methyl。quinoxaline-2-。carboxylic acid residues in animalorigin food-High performance liquid chromatography method2007-1 0-29发布 2008-04-01实施丰瞀徽紫瓣訾糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会仅111刖 置GBT 21322-2007本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华
2、人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：华中农业大学、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：袁宗辉、吴玉杰、陶燕飞、王玉莲、黄玲利、陈冬梅、彭涛、刘振利、彭大鹏、戴梦红。动物源食品中3一甲基喹喔啉-2-羧酸残留的测定高效液相色谱法GBT 21322-20071范围本标准规定了猪、鸡、鱼可食性组织中3一甲基喹喔啉一2一羧酸(3-methylquinoxaline-2一carboxylicacid，MQCA)残留检测的制样和高效液相色谱的测定方法。本标准适用于猪、鸡肌肉、肝脏和鱼肌肉中MQCA残留的定量检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条
3、款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 1992，neq ISO 3696：1987)3原理肌肉或肝脏组织样在酸性溶液中水解，然后经乙酸乙酯提取，磷酸盐缓冲溶液反萃取，用混合阴离子SPE柱净化后，高效液相色谱法(紫外检测器)测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GBT 6682规定的一级水。41乙腈：色谱纯。42乙酸乙酯。43偏磷酸：优级纯
4、。44磷酸：优级纯。45甲酸：优级纯。46磷酸氢二钾。47偏磷酸甲醇溶液：准确称取偏磷酸500 g，加入水，加热至溶解，冷却后加入甲醇200 mL，加水定容至1 000 mL，混匀，常温保存，有效期1个月。48氢氧化钠溶液(o05 toolL)：准确称取氢氧化钠05 g，用蒸馏水溶解，冷却后定容至250 mL，常温保存，有效期3个月。49甲酸一甲醇溶液：准确量取甲酸i mL于50 mL容量瓶中，加甲醇，稀释并定容至50 mL，混匀，现配现用。410磷酸缓冲液(o01 toolL)：准确称取磷酸氢二钾(K。HPO。3H20)228 g，加900 mL水溶解，磷酸调pH值至70，加水定容至1 00
5、0 mL，常温保存，有效期1个月。411标准品：3一甲基喹喔啉一2一羧酸，含量高于98。412标准贮备液：准确称取MQCA 100 mg，用甲醇配成浓度为10 mgmL的标准贮备液，4C避光保存，有效期6个月。413 固相萃取小柱MAX柱(混合阴离子交换柱)：规格60 mg，3 mL。1GBT 21322-20075仪器和设备51高效液相色谱仪：配紫外检测器。52高速离心机。53高速组织捣碎机。54涡旋混合器。55真空泵。56固相萃取装置。57移液器：1 mL5 mL，100 btLl 000 pL。58 pH计。6试样制备与保存61试样的制备取新鲜猪或鸡的肌肉、肝脏或鱼肌肉组织，绞碎并均质。
6、62试样的保存一20以下贮存。注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化7样品处理71提取准确称取新鲜或解冻后的试样500 g置于离心管中，加偏磷酸甲醇溶液8 mL，旋涡混合2 rain，6 000 rmin离心15 min，取出上清液，在残渣中再加入偏磷酸甲醇溶液8 mL重复提取一次，合并2次上清液。于上清液中加乙酸乙酯8 mL，旋涡混合1 min，4 000 rmin离心10 min，取有机相层，再加乙酸乙酯8 mL重复提取，合并2次有机相。有机相中，加磷酸盐缓冲液6 mL，旋涡混和1 min，放置10 min，收集下层水相，另用磷酸盐缓冲液6 mL再反萃取有机相一次，合并
7、2次水相待净化。72净化MAX柱依次用甲醇3 mL、水3 mL活化，加71样品提取液至MAX柱中，控制流速小于1 mLmin，先后用005 molL氢氧化钠溶液3 mL、甲醇3 mL淋洗，抽干，2甲酸一甲醇溶液3 mL洗脱，40C以下氮吹至近干，加甲醇05 mL溶解残渣，旋涡混匀，待测。73测定731液相色谱条件色谱柱：Cm250 mm46 mm(内径)，粒径5 pm，或相当者；流动相：1甲酸水溶液+乙腈(80+20)；流速：10 mLmin；紫外检测器波长：320 nm；进样量：20“L；柱温：30。732液相色谱测定取试样溶液和标准工作液，作单点或多点校准，以色谱峰面积定量，标准工作液及试
8、样液中的MQCA响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下，MQCA保留时间在90min左右，标准溶液和试样溶液的液相色谱图参见附录A。74标准曲线的制备准备移取MQCA标准贮备液适量，用甲醇依次稀释成浓度分别为25 t-gL、50 t-gL、100-gL、2GBT 21322-2007250 btgL、500 btgL、1 000 pgL的标准工作液。每个浓度重复3次，将测得的峰面积与相对应浓度绘制标准曲线，拟合，求回归方程和相关系数。75空白实验对于除不添加标准品工作液外的阴性样品采用完全相同的步骤进行操作。8结果计算残留量按式(1)进行计算：x一墅堕型 。(1)，n式中：x试样中
9、分析物的含量，单位为微克每千克(-gkg)；R样液中的分析物与内标物峰面积比值；c混合基质标准溶液中分析物的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；V样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m试样的质量，单位为克(g)。注：计算结果需将空白值扣除。9测定低限(LOQ)在猪、鸡、鱼肌肉中的测定低限均为4tgkg；猪、鸡肝脏中的测定低限均为10tgkg。10回收率和精密度参见表B1表B6。GBT 2 1 322-20074附录A(资料性附录)标准样品高效液相色谱图图A1 MQCA标准溶液浓度为50 pgL的色谱图在选定条件下，MQCA的保留时间为88 rain。附录B(资辩性附录)添加回收率表B1喹乙醇
10、代谢物MQCA在猪肌肉组织中的回收率GBT 21322-2007回收率添加浓度(pgkg)批次1 批次2 批次3 批次4 批次5 平均值(n一25)813 685 749 648 772734 759 782 788 7914 853 875 894 815 755 784土89794 8j3 886 709 758685 824 812 803 786763 752 845 814 831796 836 767 759 8188 794 635 795 867 785 808土9 1771 803 875 707 70、795 874 888 86 2 91991 2 8l 81 915 8
11、45873 842 86 2 868 80216 89 921 831 813 786 844土50783 8j9 852 867 911791 785 735 932 805表B2喹乙醇代谢物MQCA在猪肝脏组织中的回收率回收率添加浓度(pgkg)批次1 批次2 批次3 批次4 批次5 平均值(”一25)795 802 798 647 854804 917 872 792 72710 789 767 80 689 853 806士63798 876 799 882 834816 924 874 758 707876 904 786 849 905786 794 732 789 80750 8
12、25 813 802 902 786 805士30776 851 813 804 807827 756 724 754 762848 828 851 874 821879 831 843 968 805100 854 938 881 756 813 85536972 736 855 903 834817 844 807 922 916GBIT 2 1 322-2007表B3喹乙醇代谢物MQCA在鸡肌肉组织中的回收率回收率添加浓度(pgkg)批次1 批次2 批次3 批次4 批次5 平均值(n一25)713 745 869 85 2 746844 866 767 871 6574 795 794
13、812 711 867 780士24763 664 672 778 739818 745 794 843 785743 936 768 705 769828 806 694 736 8128 867 761 814 775 90 795土72764 812 849 782 764718 857 863 809 75692 792 756 859 89581Z 76 4 845 908 76216 713 822 931 802 719 829土68865 88 1 725 878 812836 733 978 793 935表B4喹乙醇代谢物MQCA在鸡肝脏组织中的回收率回收率舔加浓度(pgk
14、g)批次1 批次2 批改3 批次4 批次5 平均值(n一25)746 75 4 789 705 775856 655 798 865 88110 796 971 666 42 795 806土85923 773 805 834 864851 857 924 768 764824 728 69 893 799641 783 768 756 88550 884 812 897 942 724 802士91864 771 825 764 846782 813 816 78 762921 808 812 83 878805 819 956 821 864100 859 847 797 803 818
15、841士42938 783 856 847 80809 838 77 4 893 827表B5喹乙醇代谢物MQcA在鱼肌肉组织中的回收率GBT 21322-2007回收率添加浓度(pgkg)批次1 批次2 批次3 批次4 批次5 平均值(n一25)837 728 801 794 835836 845 732 900 8184 833 827 802 915 828 815土76906 794 856 858 762802 8l 804 754 708848 828 851 874 721779 831 843 868 8398 854 938 721 956 813 826土52885 736
16、 755 803 834817 865 873 722 762726 82 2 792 1115 90 8773 802 8j3 922 90516 801 818 825 91 3 858 855土45712 742 901 93 3 829827 823 905 91 4 95表B6 喹乙醇代谢物MQCA测定日内和El间相对标准偏差(RsD)日内平均值组织 添加浓度(btgkg) 日间平均值1 2 3 4 54 5 7 113 159 148 82 123猪肌肉 8 83 51 87 61 21 17116 94 119 62 86 96 8 710 143 72 41 100 80 112猪肝脏 50 27 134 62 35 35 76100 62 55 67 87 62 644 104 55 195 54 49 144鸡肌肉 8 192 56 74 115 148 16516 71 95 94 47 81 6310 73 69 103 84 78 77鸡肝脏 50 74 81 81 31 42 64100 83 72 73 43 51 684 63 43 57 91 53 100鱼肌肉 8 45 55 56 82 69 6416 48 87 82 104 64 77
