1、道B中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品添加剂GB 26400一2011二十二碳六烯酸油脂(发酵法)2011-03-15发布2011-05-15实施数码防伪中华人民共和国卫生部发布1 范围食品安全国家标准食品添加剂二十二碳六烯酸油脂(发酵法)GB 26400-20门本标准适用于利用裂壶藻CSchizochytriumsp. )或者吾肯氏壶藻CUlkeniaamoeboida)或者寇氏隐甲藻CCry户thecodiniumcohnii)菌种，经生物发酵制得的二十二碳六烯酸CDHA)油脂。2 结构式和相对分子质量2. 1 结构式。、110、/户-2.2 相对分子质量328.5C按2007年国
2、际相对原子质量)3 技术要求3. 1 感官要求:应符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽浅黄色至橙黄色取试祥10mL，置于试管中，于自然光线下采用目气味具有本产品特有的气味测的方法观察其色泽及外观形态，采用鼻嗅的方法检组织状态油状液体查气味3.2 理化指标:应符合表2的规定。1 GB 26400 -20 11 表2理化指标项自指标检验方法含量(以CH3202甘泊三百旨计)，即/%二=35.0 附录A中A.3不皂化物，四/%运二4.0 GB/T 5535.1乙磁提取法水分，w/%主三0.1 GB 5009. 3减压干燥法不溶性杂质，!旷%主三0.2 GB/T 15688 溶剂残留/Cm
3、g/kg)主二1. 0 GB/T 5009.37 酸价(以KOH计)/Cmg/g)=二1. 0 GB/T 5009.37 过氧化值/Cmeq/kg)=二5.0 GB/T 5009.37滴定法反式脂肪酸，即/%主二1. 0 GB 5413.36 黄曲左手毒案B1/Cg/kg)飞产5.0 GB/T 5009.22 总硝(以As计)/Cmg/kg)、一、O. 1 GB/T 5009. 11氢化物原子荧光光度法铅CPb)/Cmg/kg)飞、O. 1 GB 5009. 12石墨炉原子吸收光谱法4 其他要求产品应装于适宜的避光容器中充氮或真空保存，产品的最佳保存温度为一5oc以下。2 GB 26400-2
4、011 附录A检验方法A.1 安全要求本检验方法中使用的部分试剂具有毒性和腐蚀性，操作时须小心谨慎。如溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。使用易燃品时，严禁使用明火加热。A.2 一般规定除另有说明外，所用试剂均为分析纯，检验用水符合GB/T6682-2008中规定的三级水。检验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T 602和GB/T603的规定制备。A.3 二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋的测定A. 3.1 试剂和材料A. 3. 1. 1 二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋标准品:纯度二三99%。A. 3. 1. 2 十三碳
5、皖酸甘油三醋标准品:纯度二三99%。A. 3. 1. 3 氢氧化饵。A. 3. 1. 4 元水甲醇。A. 3. 1. 5 正庚烧，色谱纯。A. 3. 1. 6 石油膛，沸程，30oC60 oC。A. 3.1.7 氢氧化饵甲醇溶液(4mol/L):称取22.4g氢氧化饵(A.3. 1. 3)于烧杯中，加入适量元水甲醇(A.3. 1. 4)使溶解，并转移至100mL的容量瓶中，当氢氧化伺甲醇溶液冷却至室温后，用元水甲醇稀释至刻度，摇匀。A. 3. 1. 8 二十二嵌六烯酸(DHA)甘油三醋储备液(10mg/mL):称取250mg (精确至0.0001 g)二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋(A.3.
6、 1. 1 )于25mL容量瓶中，加入适量正庚炕(A.3. 1. 5 )使溶解，并稀释至刻度，摇匀。A.3. 1. 9 十三碳烧酸甘油三醋内标储备液(10mg/mL):称取0.25g (精确至0.0001 g)十三碳皖酸甘油三醋(A.3. 1. 2)于25mL容量瓶中，加入适量正庚皖(A.3. 1. 5 )使溶解，并稀释至刻度，摇匀。A.3. 1. 10 标准工作溶液的配制:按表A.1分别移取适量二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋储备液(A. 3. 1. 8)于6个10mL容量瓶中，分别移入2.0mL十三碳烧酸甘油三醋内标储备液(A.3. 1. 9) ，加入正庚皖(A.3. 1. 5)稀释至刻度
7、，摇匀。3 GB 26400 -20 11 表A.1标准工作溶液中二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋含量编号加入二十二碳六烯酸CDHA)甘油三醋储备液的体积mL 1 。2 O. 1 3 O. 5 4 1. 0 5 2.0 6 3.0 A. 3. 1. 11 氮气，纯度注99.999%。A. 3. 1. 12 氮气，纯度注99.9999%。A. 3. 2 仪器和设备A. 3. 2.1 气相色谱-质谱仪。A. 3. 2. 2 气相色谱仪，配氢火焰离子化检测器。A. 3. 2. 3 分析天平z感量为0.01g、0.1mg。A. 3. 2. 4 离心机。A. 3. 2. 5 振摇器。A. 3. 3 定性
8、分析A. 3. 3.1 二十二碳六蜡酸(DHA)油脂标准工作溶液中二十二碳六烯酸CDHA)甘泊三醋的浓度mg/mL 。0.1 0.5 1. 0 2.0 ,3.0 称取O.25 g(精确至0.01g)试样于50mL容量瓶巾，加入适量正庚皖(A.3. 1. 5)使溶解，并稀释至刻度，摇匀。准确吸取2mL正庚;皖榕解液于10mL带盖离心管中，加入0.2mL氢氧化饵甲醇溶液(A. 3. 1. 7) ，剧烈振荡1min以上，放置10min(甲基化反应)。如有机层浑浊，可离心使之澄清。取上层有机相溶液备用。A. 3. 3. 2 测定A. 3. 3. 2.1 气相色谱条件a) 色谱柱:DB-5ms(30.0
9、mXO. 25 mmXO. 25m)石英毛细管柱，或相当者;b) 柱温程序:100 .C保持3min，以10.C/min升至260.C，保持8min; c) 载气=氮气(A.3. 1. 12) ; d) 流速:1. 0 mL/min; e) 进样口温度:250.C; f) 进样模式z分流进样(分流比为1: 10); g) 进样量:1L. A.3.3.2.2 质谱条件a) 离子源:EI源，70eV; 4 GB 26400-20门b) 接口温度:280oC; c) 离子源温度:230oC; d) 四极杆温度:150oC;e) 数据采集模式:全扫描;f) 质量扫描范围:20m/z330 m/z; g
10、) 溶剂延迟3.5min。A. 3. 3. 3 结果判定试样的质谱图应与二十二碳六烯酸(DHA)甲醋标准品的质谱图(附录B中图B.1)一致。A.3.4 定量分析A. 3. 4.1 原理试样中二十二破六烯酸(DHA)在氢氧化伺甲醇作用下，生成二十二碳六烯酸(DHA)甲酶，用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行测定，以内标法定量，结果以二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋计。A. 3. 4. 2 试液的制备A. 3. 4. 2.1 二十二碳六烯酸(DHA)油脂试样溶液的制备称取0.04g试样(精确至0.0001 g)于10mL容量瓶中，加入2.0mL十三碳炕酸甘油三醋内标储备液(A.3. 1.的，以
11、下按A.3.3.1加入适量正庚皖(A.3. 1. 5)取上层有机相溶液备用操作。每份试液至少做两个平行样。A. 3. 4. 2. 2 空白溶班的制备除不加试样外按A.3. 4. 2.1所述方法进行处理。A. 3. 4. 3 标准工作溶液甲醋化处理分别准确吸取A.3. 1. 10中系列标准工作溶液2mL于10mL带盖离心管中，以下按A.3. 3. 1自加入0.2mL氢氧化伺甲醇溶液(A.3. 1. 7)取上层有机相溶液备用操作。A. 3. 4. 4 测定A. 3. 4. 4.1 气相色谱条件a) 色谱柱:DB-23(30.0mXO. 25 mmXO. 25m)石英毛细管柱，或相当者;b) 柱温程
12、序:90oC保持5min, 9 oC/min升至240oC，保持5min , 3 oC/min升至250oC; c) 载气=氮气(A.3. 1. 11); d) 流速:1. 3汩3mL/rr旧ne) 进样口温度:250 oC; f) 进样模式:分流进样(分流比为1: 100); g) 检测器温度:300 oC; h) 进样量:1Lo 5 GB 26400 -20 11 A. 3. 4. 4. 2 标准曲线的绘制按A.3. 4. 4. 1所列测定条件，将甲酣化后的标准工作溶液依次进样，测量二十二碳六烯酸(DHA)甲醋和十三碳烧酸甲醋的峰面积。二十二碳六烯酸(DHA)甲醋的峰面积与标准工作溶液中二
13、十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋的浓度成正比。以标准工作溶液中二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋的浓度(mg/mL)为横坐标，以二十二碳六烯酸(DHA)甲醋与十三碳皖酸甲醋的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。二十二碳六烯酸(DHA)甲醋和十三碳皖酸甲醋的色谱图参见附录C中图C.1。按公式(A.1)计算回归参数:y = (a X x)十b.( A.1 ) 式中zy一一二十二碳六烯酸(DHA)甲醋与十三碳炕酸甲醋的峰面积比; 回归曲线的斜率;z 标准工作溶液中二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL); b一一回归曲线的截距。A.3.4.4.3 试液的测定将空白溶液(八.3.
14、4.2.2)和试样溶液(A.3. 4. 2. 1)依次进样，扣除空白值，获得二十二碳六烯酸(DHA)甲醋与十三碳皖酸甲醋的峰面积比。A. 3.4.5 结果计算试样中二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋的含量X按公式(A.2)计算:式中:X=主二XVXlX100%( A.2 ) az X 试样中二十二碳六烯酸(DHA)甘油三醋含量，%;y 试液甲醋化后二十二碳六烯酸(DHA)甲醋与十三碳烧酸甲醋的峰面积比;b一一回归曲线的截距;a 回归曲线的斜率;V 试液最终定容体积，单位为毫升(mL); m一一试样的质量，单位为毫克(mg)。如含量以二十二碳六烯酸(DHA)计，乘以换算系数O.959 7。计算结果
15、以平行测定值的算术平均值表示，保留小数点后两位。A.3.4.6 重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。6 GB 26400 -20 11 附录B二十二碳六烯酸(DHA)甲醋标准品气相色谱-质谱图丰度79.0 2 600 000 2 400 00 2 200 00 2 000 000 1 800 000 1 600 000 1 400 000 105.0 1 200 000 1 000 000 800 000 131. 1 600 000 400 000 200 000 。273. 1 313.2 342.3 60 80 100 120 140 160
16、180 200 220 240 260 280 300 320 340 m/ -) 注:该谱图来源于NIST谱库。图B.1二十二碳六烯酸(DHA)甲醋标准晶质谱图7 GB 26400 -20 11 附录C混合标准工作溶液甲醋化后气相色谱图140 120 2 100 80 60 40 20 胃。10 15 20 mln 1一一十三碳烧酸甲醋(9.9min) ; 2一一二十二碳六烯酸(DHA)甲醋08.8min)。图C.1混合标准工作溶液甲醋化后气相色谱图8 -FON|00寸N阁。国华人民共和国家标准食品安全国家标准由食品添加剂二十二碳六烯酸油脂(发酵法)GB 26400-2011 峰中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销晤印张O.75 字数16千字2011年5月第一次印刷开本880X12301/16 2011年5月第一版导16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价.15号:155066 1-42710 GB 26400-2011 打印H期:2011年5月16H F002A
