1、ICS 65.020.30 B 40 适自中华人民共和国国家标准GB/T 20364-2006 动物源产品中聚酿类残留量的测定Determination of polyether ionophore residues in products of animal origin 2006-05-25发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2006-09-01实施发布GB/T 20364-2006 前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由山东省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国山东出入境检验检疫局、山东省质量技术监督局。本标准主要起草人:林黎明、张鸿伟
2、、梁增辉、王岩、孟兆宏。I GB/T 20364-2006 动物源产品中聚酶类残留量的测定方法一液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定了动物源产品中莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素3种聚酷类残留量液相色谱串联质谱的测定方法。本标准适用于禽、兔等动物源产品中莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素残留的确证和定量测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6379 测试方
3、法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法(GB/T6682-1992 , neq ISO 3696:1987) 3 原理试样中聚酷类残留，采用异辛烧提取，提取液用硅胶柱净化。液相色i普-串联质谱仪测定，外标法定量。4 试剂和材料4. 1 水:应符合GB/T6682中一级水的规定。4.2 异辛皖:分析纯。4.3 甲醇:液相色谱级。4.4 二氯甲皖:分析纯。4.5 甲醇-二氯甲炕(1+9):甲醇、二氯甲炕按体积比1: 9混匀。4.6 无水硫酸纳:分析纯，5000C灼烧4h，置于干燥器中备用。4. 7 甲醇-水(13+2):甲醇、水按
4、体积比13: 2混匀。4.8 莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素标准品:纯度二三99%。4.9 3种聚酷类标准储备榕液:200g/mL。分别准确称取适量的莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素标准品，用甲醇配成200g/mL的标准储备溶液(40C避光保存可使用6个月)。4. 10 3种聚酶类标准中间溶液:10g/mL。分别准确量取适量的标准储备溶液(4.9)，用甲醇-水(4.7)稀释成10问/mL的标准中间溶液(40C避光保存可使用1个月)。4. 11 3种聚酷类混合标准工作洛液:准确量取适量的标准中间溶液(4.10)，用甲醇水(4.7)配制成浓度系列为10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/m
5、L、100.0ng/mL、250.0ng/mL、500.0ng/mL的聚酶类混合标准工作溶液(40C避光保存可使用1周)。4. 12 3种聚酷类说合标准添加溶液:100 ng/mL。准确量取适量的聚酷类棍合标准中间溶液(4.10), 用甲醇水(4.7)稀释成100ng/mL的聚酷类标准添加榕液(40C避光保存可使用1周)。5 仪器5. 1 液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源。GB/T 20364一20065.2 均质器。5.3 涡流?昆匀器。5. 4 旋转蒸发仪。5.5 固相萃取装置。5.6 氮吹仪。5. 7 离心机:转速4000 r/min。5.8 聚四氟乙烯离心管:50mL。5. 9 固
6、相骂5. 10 移液器:200L、1000 5. 11 =角烧瓶:50mL。5. 12 分析天平:感量。5. 13 一次性注射式也5. 14 250.0 ng/mL、5毡，50.0g/kg、100.O 7. 2 提取3 min，转移上清液于50三角烧瓶中。7. 3 净化于硅胶萃取柱上加入灼烧后的无术苦苦勒T叫屈5mL异辛烧润湿，然后将三角烧瓶中的提取液缓慢加入到萃取柱上，施以适当压力，使其以3mL/min的速度流出，注意不得使柱子流干，而后用15 mL二氯甲皖以2mL/min的速率淋洗萃取柱，弃去淋洗液，待二氯甲:皖流尽后再加压冲柱0.5min , 使萃取柱中残存的二氯甲皖充分流出。再加入甲醇
7、二氯甲皖(4.5)15 mL，以1mL/min的速率洗脱，收集洗脱液，于40.C减压蒸发至近干，氮气吹干，准确加入1mL甲醇-水溶液(4.7)溶解残渣，涡流氓匀后，用一次性注射式滤器过滤至样品瓶中，液相色谱-串联质谱仪测定。7.4 测定7. 4. 1 液相色谱条件a) 色谱柱:C18柱(可用IntersilODS-3，粒径5m，柱长150mm，内径4.6mm或相当者); b) 流动相:甲醇+1%甲酸溶液(梯度洗脱见表1);2 GB/T 20364-2006 时间/minc) 流速:0.9mL/ min; d) 柱温:260C;e) 进样量:10L。7. 4.2 质谱条件a) 离子源:电喷雾离b
8、) 扫描方式:正罗会描:d) 表1甲醇/%)1%甲酸溶液/%)99 87 13 g) h) 电压名去簇电压/V莫能230 230 220 200 220 200 、条挫曰作i二色工仨述准刷上标时在合J混线内用曲围作范工性名称保留时间/min莫能菌素3.48 盐霉素4. 44 甲基盐霉素5.17 8 结果计算试样中每种聚酿类残留量按式(1)计算:=cV100。一一一m 1 000 ( 1 ) 3 GB/T 20364-2006 式中:X一一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(g/kg);c一一-从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); V 试样榕液定容体积，单位
9、为毫升(mL);m一一试样溶液所代表的质量，单位为克(g)。注:计算结果应扣除空白值。9 检出低限(LOD)和定量限(LOQ)9. 1 检出低限(LOD)莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素为1.0g/kg。9.2 定量限(LOQ)莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素为5.0g/kg。10 精密度精密度数据按GB/T6379的规定制定，其重复性和再现性的值以95%的可信度计算。10. 1 重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(忡，动物源产品中3种聚酷类残留含量范围及重复性方程见表3。如果差值超过重复性限(吵，应舍弃实验结果并重新完成两次单个试验的测定。10.2 再现性在再现性条
10、件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，动物源产品中聚酶类残留含量范围及再现性方程见表4。表4含量范围及重复性和再现性方程名称含量范围/(g/kg)重复性限r再现性限R莫能菌素5. O 100 =0.1973+0.1498x R=O. 3169+0.191 3x 盐霉素5. 0100 19r=一0.3597+0.736 71gx R=O. 424 2+0.152 4x 甲基盐霉素5. 0100 r=O. 3159+0.156 2x IgR=一0.5095十0.81561gx 注:工为两次测定值的平均值。方法二液相色谱-质谱法11 范围本标准规定了动物源产品中莫能菌素、盐霉素
11、2种聚酷类残留量液相色谱-质谱的测定方法。本标准适用于畜、禽肉及肝脏中莫能菌素、盐霉素残留量的测定。12 规范性引用文件同第2章。4 GB/T 20364-2006 13 原理试样中莫能菌素、盐霉素残留，用异辛皖提取，提取液用硅胶柱净化。液相色谱-质谱仪测定，外标法定量。14 试剂和材料14. 1 水:应符合GB/T6682中一级水的规定。14.2 异辛皖:分析纯。14.3 甲醇:液相色谱级。14.4 乙睛:液相色谱级。14.5 二氯甲烧:分析纯。14.6 甲醇-二氯甲:皖(1十9):甲醇、二氯甲:皖按体积比1: 9混匀。14.7 元水硫酸饷:分析纯，5000C灼烧4h，置于干燥器中备用。14
12、.8 甲醇-水(13+2):甲醇、水按体积比13: 2 ti昆匀。14.9 莫能菌素、盐霉素标准品，纯度二三99%。14. 10 莫能菌素、盐霉素标准储备溶液的制备:200g/mL。分别准确称取适量的莫能菌素、盐霉素标准品，用甲醇配制成200g/mL的标准储备恪液(40C避光保存可使用6个月)。14. 11 莫能菌素、盐霉素标准中间榕液的制备:10g/mL。分别准确量取适量的标准储备搭被(1 4.10) ，用甲醇水(14.8)稀释成10吨/mL的标准中间榕液(40C避光保存可使用1个月儿14.12 莫能菌素、盐霉素混合标准工作溶液的制备:准确量取适量的标准中间溶液(14.11)，用甲醇水04.
13、8)配制成浓度系列分别为莫能菌素:50.0 ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL、400.0ng/mL、1 000.0 ng/mL;盐霉素:25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的混合标准工作榕液(40C避光保存可使用1周)。14.13 莫能菌素、盐霉素标准添加溶液:100问/mL。准确量取适量的莫能菌素、盐霉素混合标准中间洛被04.11)，用甲醇-水04.8)稀释成100ng/mL的聚酷标准添加溶液(40C避光保存可使用1周)。15 仪器15. 1 液相色谱-质谱仪:配有电喷雾离子源。15.2 均质器。15.3 涡流混匀器。15
14、.4 旋转蒸发仪。15.5 固相萃取装置。15.6 氮吹仪。15. 7 离心机:转速4000 r/min。15.8 聚四氟乙烯离心管:50mL。15.9 固相萃取硅胶柱:500mg , 3 mL。15.10 移液器:200L、1000L、5000L。15. 11 三角烧瓶:50mL。15. 12 一次性注射式滤器:配有0.45m微孔滤膜。15. 13 分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台。15. 14 样品瓶:2mL，带聚四氟乙烯旋盖。5 GB/T 20364-2006 16 试样制备与保存同第6章。17 测定步骤17. 1 标准曲线制备制备混合标准工作溶液04.12)，莫能菌素浓度系列
15、为50.0ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL、17.2 提取同7.20 17.3 净化净化步骤同17.4 9!tl定17.4. 1 液相a) 色谱b) d) e) 17.4. 2 a) b) d) e) f) 喷嘴压力:35 Pl g) 干燥气温度:350飞，h) 定性离子、定量离子在名称定性离子对/Cm/z)莫能菌素693 . 5 242. 5 77 3. 6 盐霉素242. 5 17.4. 3 液相色谱/质谱测定定量离子对/Cm/z)碰撞电压/V增益693 . 5 100 2 773.6 100 2 用混合标准工作液04.12)分别进样，以峰面积为纵坐标，工作液浓度(n
16、g/mL)为横坐标。绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中莫能菌素、盐霉素的响应值均应在仪器测定GB/T 20364-2006 的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，莫能菌素和盐霉素的参考保留时间见表6。莫能菌素、盐霉素标准品的选择离子流和总离子流图参见附录A中的图A.3，相应的质谱图参见附录A中的图A.4、图A.5。表6莫能菌素、盐霉素药物参考保留时间一时一出保留时间/min17. 0 20 . 4 18 结果计算同第8章。19 19. 1 检测低限CL莫能菌素为- 19.2 定量限(莫能菌素20 精密度精密度20. 1 重复在重复a素、盐霉素含计算。名称莫能菌素盐霉
17、素再现性限RR =O. 428 5+ 0. 145 6x R = O. 553 7+ 0.1 28 7x 7 GB/T 20364-2006 附录A(资料性附录)标准晶串联质谱圈和单级质i曹固7.6e5 7.0e5 6.0e5 4.44 0.0 FDFD ee AUAU Ruaa e己也3.0e5 2.0e5 1. Oe5 2 3 4 5 6 7 8 9 tlmin 莫能菌素3.48 min; 盐霉素一-4.44min; 甲基盐霉素一-5.17min。圄A.l3种聚酷类标准晶串联质谱总离子流圄3.48 -莫能菌素(692.9/479.2)A 1. 4e5 1. 2e5 已得1. Oe5 8.0
18、e4 6.0e4 4.0e4 2.0e4 O. 2 3 4 5 6 7 8 9 tlmin a) 莫能菌素/盐霉素(773川2)5.0e5 已4.0e5 电3.0e52.0e5 1. Oe5 0.0 2 3 4 5 6 7 8 9 t/min b) 盐霉素圄A.23种聚醋类标准晶串联质i普选择离子流圄8 5.4e4 5.0e4 4.0e4 aaz e nu qd e也2.0e4 1. Oe4 GB/T 20364-2006 516 _甲基盐霉素(787.5/431.2) 0.0 tlmin 2 5 6 7 9 8 3 4 c) 甲基盐霉素圄A.2(续)莫能菌素盐霉素17.0 min 20.4
19、min 国豆15 2 1口圄A.3莫能菌素、盐霉素标准晶单级质谱选择离子流和总离子流固9 G/T 20364-2006 100 由的hhF由.甘KFKF盯.N-vN80 60 40 20 。100 80 60 40 20 。10 COON-叮的ONH阁。人民共和国家标准动物源产品中聚醋类残留量的测定GB/T 20364-2006 国华白峰中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销4呼印张1字数21千字2006年10月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2006年10月第一版7G 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价12.00峰书号:155066. 1-28170 GB/T 20364-2006
