1、ICS 11. 020 C 05 道自中华人民共和国国家标准2011-01-14发布数码防伪GB/T 26350-2010 蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法Test methods of fly resistance to insecticides一The bioassay methods for musca domestica 中华人民共和国卫生部售企中国国家标准化管理委员会.0.11J 2011-05-01实施中华人民共和国国家标准蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法GB/T 26350- -2010 争导中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:68
2、52394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销峰开本880X 1230 1/16 印张o.5 字数8千字2011年4月第一版2011年4月第一次印刷晤书号:155066. 1-42181定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533目。昌本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。GBjT 26350-2010 本标准起草单位:中国农业大学、北京市疾病预防控制中心、中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所。本标准主要起草人:高希武、曾晓菇、马彦、刘婷、梁沛、钱
3、坤、赵彤言。I 1 范围蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法GB/T 26350-2010 本标准规定了家蝇CMuscadomestica)对有机磷、氨摹甲酸醋、拟除虫菊醋等杀虫药剂抗药性的生物检测方法。本标准适用于家蝇抗药性的实验室生物检测。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文作。2.1 诊断剂量diagnostic dose 由敏感品系的敏感基线计算何到的与死亡率99%或99.9%相对应的杀虫药剂剂量值，该剂量值能使敏感品系99%或99.9%的个体致死，利用该剂量通过生物测定技术区分抗性和敏感个体。2.2 F1代F1 generation 从现场捕捉的家蝇，繁殖后得到的第一代。2.3 点滴法
4、topical application melhod 将一定量的药液直接滴在昆虫体暖的特定部位以测定纠剂对供试昆虫的触杀每力。2.4 药膜法medical membrane method 将一定量的药液施布于载体的表面并形成均匀的药膜，然后将试虫放于载体上，药剂通过昆虫的足、体壁等进入虫体内起到毒杀作用，间隔一定时间后统计死亡率。常见的载体有滤纸、玻璃表面等。3 试虫现场采集家蝇，室内饲养，羽化后3d5 d的Fl代雌性家蝇。4 试剂丙隅或其他有机溶剂、CO2或乙醋、杀虫药剂原药。5 仪器具可控光照和温度的培养箱或房间，养虫笼，100mL血清瓶，移液管，微量点滴器(微量进样器)。1 GB/T 2
5、6350-2010 6 测试条件温度:25oc士1OC，光周期:14L:10 D，相对湿度:60%80%。7 敏感基线法7. 1 原理依据杀虫剂应用剂量和害虫死亡机率值关系建立毒力回归方程，以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线作为为敏感基线。以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比，来确定待测种群的抗性水平。具体是比较两条毒力回归线的b值变化以及由毒力回归线计算得到的半数致死量的变化。7.2 操作步骤7.2.1 药膜法用丙酣或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂母液稀释到一系列的浓度(通过预实验确定药剂的浓度系列范围，最低浓度时死亡率小于20%，最高浓度时大于80%)，然后取0.5mL溶液加入
6、100mL血清瓶中，不断转动血清瓶，使药液均匀分布于瓶内壁，置于通风橱中过夜，使有机溶剂挥发完全。然后每瓶放试虫20只，用纱网或纱布封口。实验重复5次。以相应溶剂处理为对照组。3h后统计死亡率。根据每一浓度对应的死亡率求出回归方程，根据回归方程可以求出LCso值。需要分别测定并求出实验室敏感种群和待测种群的LCso值。7.2.2 点滴法用丙酣或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂母液稀释到一系列的浓度(通过预实验确定药剂的浓度系列范围，最低浓度时死亡率小于20%，最高浓度时大于80%)，将试虫用乙酷或CO2等麻醉至昏迷。用微量点滴器将0.5LlL杀虫药剂溶液点滴在雌性家蝇前胸背板上。每个处理点滴30
7、只羽化后3d5 d雌性家蝇，以相应溶剂点滴为空白对照，实验重复3次。将受药后的试虫转入清洁容器内，供给水和食物，正常饲养，24h后统计死亡率。根据每一浓度对应的死亡率求出回归方程，根据回归方程可以求出LDso值。需要分别测定并求出实验室敏感种群和待测种群的LDs。值。7.3 死亡判断试虫完全不动或腹部上翻、抽擂，不能爬行视为死亡。7.4 结果表述结果用抗性倍数表述，抗性倍数=待测种群LCso(LDso)值/敏感种群LCso(LDso)值。7.5 判别标准敏感品系和测定样本95%置信限不重叠，且抗性倍数注5倍为抗性种群。8 诊断剂量法8. 1 原理依据药剂对敏感品系的毒力回归线，确定一个能够区分
8、敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂量。2 一般用敏感品系的LD99(LC99)值作为诊断剂量，预期死亡率为99%。8.2 操作步骤8.2. 1 药膜法G/T 26350-2010 用丙酣或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酣或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂稀释到一定的浓度，取0.5mL溶液加入100mL血清瓶中(血清瓶内表团药膜的最终剂量达到诊断剂量，常见杀虫药剂对敏感家蝇种群的诊断剂量参见表A.1)，不断转动血清瓶，使药液均匀分布于瓶内壁，置于通风橱中过夜，使有机溶剂挥发完全。然后每瓶放试虫20只，用纱网或纱布封口。实验重复5次。以相应溶剂处理为对照组。在测试条件下放置3h
9、后，检查结果并计算死亡率。8.2.2 点滴法用丙酣或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂母液稀释到诊断剂量需要的浓度。将试虫用乙醋、CO2等麻醉至昏迷。用微量点滴器将O.5LlL杀虫药剂溶液点滴在雌性家蝇胸部背板上(每头家蝇的受药量等于诊断剂量，常见杀虫药剂对敏感家蝇种群的诊断剂量见表A.1)。每个处理点滴30只羽化后3d5 d雌性家蝇，以相应溶剂点滴为空白对照，实验重复3次。将受药后的试虫转入请前容器内，供给水和食物，正常饲养，24h后统计死亡率。8.3 死亡判断试虫完全不动或腹部上翻、抽擂，不能爬行视为死亡。8.4 结果表述结果用死亡率表述，计算见公式。)。式中tM 死亡率;Nm一死亡虫数;N一
10、一试虫总数。M二哥X1. ( 1 ) 对照死亡率小于5%无需校正;对照死亡率在5%20%之间，用Abbott公式进行校正z对照死亡率大于20%为无效测定。依据Abbott公式校正死亡率，计算见公式(2)。式中:Mm 校正死亡率;Mt 处理组死亡率;此一一对照组死亡率。8.5 判别标准校正死亡率小于80%为抗性种群。M, -M, m二一一一:cx 100% l-Mc . ( 2 ) OFONlom问NH阁。G/T 26350一-2010附录(资料性附录)常见杀虫药剂对敏感家蝇种群的诊断剂量A 表A.l给出了常见杀虫药剂对敏感家蝇种群的诊断剂量。常见杀虫药剂对敏感家蝇种群的诊断剂量诊断剂量(药膜法)诊断剂盐(点滴法)杀虫药剂LD99 LDgg g/cm g/只残杀威(propoxur)0.30 1. 0 敌敌畏(DDVP)2.00 1. 0 胶菊酶(tetramethrin) 1. 00 0.30 澳1(菊酶(deltamethrin)0.03 0.005 高效氯饵菊醋(alpha-cypermethrin)0.04 0.025 注:敏感品系来自中国农业大学选育的家蝇敏感品系，2004年测定结果。表A.l侵权必究书号:155066 1-42181 定价:晤版权专有14.00 G GB/T 26350-2010 打印日期:2011年5月4日F002A
