1、ICS 67.200.10 X 14 GB 国家标准和国11: ./、中华人民GB/T 26636-2011 /ISO 16931 : 200 1 动植物油脂聚合甘油三醋的测定高效空间排阻色谱法(HPSEC)Animal and vegetable fats and oils Determination of polymerized triglycerides content by high-performance size-exclusion chromatography (HPSEC) (lSO 16931: 2001, IDT) 2011-06自16发布2011-11-01实施数码防伪中
2、华人民共和国国家质量监督检验检亵总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T 26636-2011 /ISO 16931 : 200 1 目。吕本标准等同采用ISO16931 :2001 (动植物油脂聚合甘油三醋的测定高效空间排阻色谱法)(英文版)。为了便于使用，本标准对ISO16931:2001进行了下列编辑性修改:-一本国际标准改为本标准;一一删除了国际标准的前言;一一用小数点飞.一规范性引用文件中用GB町/T15687(动植物油脂试样的制备代替ISO6创61:1989( An旧imall and vegetable fats and oils-Preparation of test samp
3、le); 将ISO16931 :2001中3.1的注调整至第4章原理中。本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位:南京财经大学。本标准参与起草单位:湖北省粮油食品质量监测站、国家粮食局科学研究院。本标准主要起草人:鞠兴荣、袁建、王立峰、汪海峰、杨晓蓉、熊宁、薛雅琳。I GB/T 26636-2011/ISO 16931 :2001 动植物油脂聚合甘油三醋的测定高效空间排阻色谱法(HPSEC)1 范围本标准规定了应用高效空间排阻色谱法测定动植物油脂中聚合甘油三醋含量的方法。含量的适用范围为不低于3%(按峰面积计算)。本标准适用于
4、煎炸油、加热处理后的油脂，也可用于动物饲料脂肪中聚合物的测定。注1:聚合甘油三醋(即二聚和寡聚甘泊三醋)在油脂加热过程中形成，本方法用于评价煎炸油脂的热劣变程度。注2:在分析动物饲料中脂肪时，使用的萃取法对结果有影响(见ISO6492)。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 15687动植物油脂试样的制备(GB/T15687一2008，ISO661:20
5、03 ,IDT) 3 术语与定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 聚合甘油三醋polymerized triglycerides 在本标准规定的条件下，由高效空间排阻色谱法(HPSEC)测得的加热过的油脂中的甘油三醋的聚合物。4 原理样品溶解于四氢吱喃后，在装填有凝胶的色谱柱上，根据分子量的大小将聚合甘油三醋分离，利用示差折光检测器检测其组分。聚合甘油三醋的含量以提取的所有酷基甘油醋(甘油三醋TAGs，聚合甘油三醋PTAGs，甘油二醋DAGs和甘油一醋MAGs)的峰面积的百分率表示。5 试剂所用试剂均为分析纯。5. 1 四氢吱喃:加入0.1%的2，6-二叔丁基对甲酣(BHT)以保持稳定，脱
6、气。用于溶解样品的四氢吱喃和用作流动相的四氢吱喃水分含量应相同，否则会出现负峰。5.2 甲苯。5.3 硫酸铀z元水。6 仪器设备实验室常规仪器和下列特殊仪器。6. 1 储液器:250mL，具流动相过滤器(材质为聚四氟乙烯，孔径1m)。6.2 高效液相色谱用泵:元脉冲，流量为O.5 mL/min1. 5 mL/min。6.3 进样阔z具10L定量环和体积50L100L的注射器，或带有10L定量环的自动进样器。GB/T 26636-2011 /ISO 16931: 200 1 6.4 不锈钢柱:长300mm，内径7.5 mm7. 8 mm，填充有苯乙烯和二苯乙烯聚合成的高效球形凝胶(粒径5m，孔径
7、10nm)或其他具有相同分离能力和分辨率的凝肢。推荐使用色谱柱温度控制装置，以使柱温度保持在30.C到35.C之间。如果需要，色谱柱应充以甲苯保存。6.5 检测器:示差折光检测器，具温度控制，灵敏度要求满标折射率至少1X10-4理想的检测器温度为高于环境温度(30.C到35.C)。6.6 记录仪和(或)积分仪或色谱工作站:可显示色谱峰并能对峰面积准确定量。7 抨样实验室收到的样品应确实具有代表性，并在运输和储存过程中未受损和变质。采样不是本标准规定的内容，推荐采用GB/T5524。8 试样制备试样制备按GB/T15687进行。9 操作步骤注:如果简要检查是否符合重复性限要求，则按9.1和9.2
8、步骤进行两次单独的测定。9. 1 仪器准备按照仪器说明书要求进行操作。启动高效液相色谱仪，以O.5 mL/minl mL/min的流速泵入四氢吱喃清洗整个系统，一直到进样阀。将柱连接到进样阀，用大约30mL四氢吱喃冲洗。连接柱到检测器的样品池，用四氢吱喃充满参比池。将流动相流速调整在0.5mL/m血和1.0 mL/min之间，并使仪器稳定(基钱无明显的漂移和噪声)。如果采用6.4的色谱柱，仪器可在15min内达到稳定。如果采用填充其他固定相的色谱柱，仪器的稳定可能会困难一些，例如，可使用每次增加25%以上的四氢吱喃的不同配比的方式，逐步将流动相从甲苯变为四氢吱喃，正常情况下在12h左右系统可达
9、到稳定。9.2 样液制备和分析称取油脂样品约50mg，加入1mL3 mL间氢映喃，混匀。加入50mg元水硫酸铀，放置2min 5 min.用孔径1m的滤膜过滤。用注射器吸取50L100L试样溶液，充满进样环，进样和接通积分仪。如果使用自动进样器，将样液装入自动进样器的样品瓶，打开自动进样器，启动积分仪。流动相流速为1mL/min时，分析时间大约为10mn。用甘油三醋单体色谱峰计算理论塔板数(n)确定色谱柱的柱效时，n应不小于6000。10 结果表示10. 1 定性分析测试的色谱图显示一个甘油三醋单体(相对分子质量大约900)的主峰，一个或几个保留时间较短的聚合甘油三醋(二聚和多聚的低聚物)的小
10、峰。在适当条件下，即使在聚合甘油三醋含量较低时，甘油三醋(TAGs)和聚合甘油三醋(PTAGs)也可得到较好的分离见图1a)和图1b)J。但有时候(可能与复杂的劣变现象有关)，甘油三醋峰前面的峰形可能不太清晰而导致结果计算困难图1c)J。10.2 定量分斩假设所有洗脱出的样品组分具有相同的响应系数，通过内标归一化法计算。2 GB/T 26636-2011月SO16931 :2001 聚合甘油三醋含量按式(1)计算:P智x100% 式中:PPTAG一一聚合甘油三醋的质量分数(基于峰面积)，%;APTAG一一聚合甘油三醋峰的峰面积;A tot -所有甘油醋(甘三醋、聚合甘油三醋、甘二醋及甘一面的峰
11、的峰面积。可分别按下列二种情况计算APTAG:a) 峰之间分离程度较高时(R二三1)可采用常规积分方法(手工或电子自动)计算单个和总的峰面积。b) 峰之间分离程度较差时(Rl). ( 1 ) 假设所有在(dr一0.5)前流出的组分均为聚合甘油三醋dr是指从色谱开始到甘油三醋峰值处的距离，单位为毫米(mm)，w是指甘油三醋的峰底宽度，单位为毫米(mm)，如图1所示。分离度按式(2)计算:式中zR=旦w . ( 2 ) D 非聚合甘油三醋(TAGs)峰值与邻近聚合甘油兰醋(PTAGs)峰值间的距离，单位为毫米(mm) ; r一甘油三醋的峰底宽度(峰切线与基线相交点间的距离)，单位为毫米(mm)。使
12、用电子积分时，积分仪应仔细调节(反向水平积分)到能对包括曲线与基线间所有面积积分。如果采用手工可通过三角形测量法测定甘油三醋的峰面积。测定结果保留1位小数。TAG TAG TAG PTAG a) PT AG content 1 % b) PTAG content 10% 。PTAGcontent 10% 图1甘油三醋和聚合甘油三醋高效空间排阻色谱分析示意图3 GB/T 26636-2011/ISO 16931 :2001 11 精密度11. 1 重复试验附录A详述了本标准精密度的实验室间比对测试结果，对于其他浓度范围和测试物质来说，本次实验室对比测试结果也许并不适用。11. 2 重复性在同一实
13、验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测定结果的绝对差值大于附录A中的表A.l中给出的重复性限(r)的情况不超过5%。11. 3 再现性在不同一实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测定结果的绝对差值大于附录A中的表人1中给出的再现性限(R)的情况不超过5%。12 测试报告4 测试报告应详细说明:一标识样品的全部信息;一-所使用的采样方法(如果已知); 一一本标准所涉及的测试方法;一一本标准没有具体说明的，或者被认为是可选性的，以及所有可能影响结果的操作细节;一一一
14、测试结果，如进行了重复性试验，则报告最终结果。GB/T 26636-2011/ISO 16931 :2001 附录A(资料性附录)实验室间的测试结果19861987年国际理论与应用化学联合会组织进行了国际间的多实验室比对试验，10个和17个实验室参与了油、脂肪及其衍生物的测定，每份样品进行了两次测试。按ISO57251)方法统计结果见表A.1。表A.1统计结果样口口口项自A B C D F G H 参加试验的实验室数17 10 10 17 16 16 10 剔除异常值后的实验室数15 9 10 16 16 15 10 接受的测定次数30 18 20 32 32 30 20 聚合甘泊三醋含茧的平
15、均值/%l. 8 2.4 3.6 5.2 9.7 10.0 22.0 重复性标准偏差(Syo. 1 0.07 0.12 O. 1 0.3 0.2 O. 18 重复性变异系数/%5.5 2.8 3.3 2. 9 3.2 2.2 0.8 重复性限(r)0.3 O. 19 0.34 0.3 0.4 l. 2 l. 48 再现性标准偏差(SR)0.4 0.61 0.45 O. 3 0.4 l. 2 l. 48 再现性变异系数/%23.7 25.9 12.5 6. 7 4.6 12.2 6.8 再现性限(R)l. 2 l. 7 l. 25 l. 0 l. 3 3.5 4.2 a以总甘泊三醋的百分率表示。
16、1) ISO 5725可用于计算精密度。5 GB/T 26636-2011/ISO 16931 :2001 参考文献lJ GB/T 5524动植物油脂抨样(GBjT5524-2008,IS0 5555:2001 ,IDT) 2J IS0 5725: 1986 Precision of test methods-Determination of repeatability and reproduc ibility for a standard test method by inter-laboratory tests 3J IS0 5725-1: 1994 Accuracy (trueness
17、and precision) of measurement methods and results-Part 1: General principles and definitions 4J 1臼SO5725-亿2:1994 Accuracy (t忧n阳resul ts一Part2: Basic method for t由h巳determinationof r陀ep严ea剖tabi山lit句yand r陀ep严ro叫ducibil川li让tyof a standard me臼asu盯remen川tmethod 5J IS0 6492: 1999 Animal feeding stuffs-De
18、termination of fat content 6 FOON Fmum 。白.- .-ONi的NH益。中华人民共和国国家标准动植物油脂聚合甘油三醋的测定高效空间排阻色谱法(HPSEC)GB/T 26636-2011/1S0 16931 :2001 非中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销唔开本880X12301/16 印张O.75 字数13千字2011年8月第一版2011年8月第一次印刷，晤书号:155066. 1-43405定价16.00元GB/T 26636-2011 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533打印日期:2011年9月16日F002A
