1、ICS 67.040 C 53 B 中华人民共和国国家标准GB/T 5009.191-2003 食品中3-氯-1，2-丙二醇含量的测定Determination of 3-monochloro- 1 ,2-propane-diol in foods 2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员瓦511 GB/T 5009. 191-2003 前言本标准修改采用了国际分析化学家协会(AOACInt)方法AOAC2000.01残留量的测定方法。本标准适用于水解援物蛋白液、#趣味品、香汤、奶筋、鱼、商粉、淀粉、谷物和国包中3-氯-1，2-丙二喜事含量
2、的泌定。本标准的测定限为5g/kgo本标准线性范围在O.005 ngO. 600吨。2 原想本标准采用两位素稀释技术，以d5心-氯1，2-丙二董事(d5-3-MCPDl为内标定量。试样中加入内标溶液，以硅藻土(Extrelut 20 l为吸附剂，采用柱层析分离，用正己烧啕乙隧(9+1)洗脱样品中非极做的脂质细分，用乙隧洗脱样品中的3一MCP口，用七氟丁院选咪瞠(HFBlJ溶液为衍生化试剂。采用选择离子监测(SIM)的质谱扫描模式进行定量去分析，内标法定髦。3 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和蒸馆水戎相当纯度的水。3.1 2.2，4-兰甲基戊烧。3.2 乙撼。3.3 i
3、E己烧。3.4 氯化锅。3.5 元水硫商量锅。3.6 Ex艺陀lut20，或相当的硅藻士。3.7 七氟丁酸基咪峨a3.8 3靠在-1，2丙二醇标准品(3-MCPD，纯度98%。3.9 d5 3-氯-1，2丙二二撞事标准品(d5-3-MCPD)，纯度98%。3.9 饱满氯化镇溶液(5mol!L)，称滚雪在化镇290g，放水毒草解并稀移至D古自由自L。3.10 iE己烧乙隧(9十1)，量取乙隧100mL.加正己烧900mL.l!il匀q3.11 3-MCPD标准储备液(1000 mg/L) ，称取3-MCPD25 mg(精确至0.01mg).建25mL最瓶中，加正己烧溶解，并稀转交刻度53.12
4、3-MCPD中11骂溶液(1号。mg!L)，准确移取3-MCPD储备液10mL，堂100mL:l重瓶中，刻正己统稀择却j度。3.13 3-MCPD系列溶液g准确移取3-MCPD中间溶液适量，置25mL量瓶中，加IE己烧稀释至刻IJ1f(浓度为0.00、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00、6.00mg/U 0 3.14 d5-3-MCPD储备液(100古mg/L):称取d5-3-MCPD25 mg(精确至0.01mg)，室主25扭L量瓶中，如乙酸乙酶溶解，并稀释至t度e3.15 d5-3-MCPD内栋溶液(10mg/L):准确移取而心-MCPD储备液1mL.置100mL量瓶中，加乙
5、酸乙黯稀释至刻度。515 GB/T 5009. 191-2003 4 仪器4.1 气相色谱质谱联用仪(GC-MS)。4.2 色谱柱:DB-5ms柱.30mXO. 25 mmXO. 25m.或等效毛细管色谱柱。4.3 玻璃层析柱.柱长40cm，柱内径2cm, 4.4 旋转蒸发器。4.5 氮气蒸发器。4.6 恒温箱或其他恒温加热器。4.7 涡派混合器。4.8 气密针.1mL, 5 分析步骤5.1 试样IfjIJ备5.1.1 液状试样称取试样4.00g.置100mL烧杯中，加d5-3-MCPD内标溶液(10mg/L)50L.JJ日饱和氯化纳溶液6 g.超声15min。5. 1. 2 汤料或固体与半固
6、体植物水解蛋白称取试样4.00g.置100mL烧杯中，加d5-3-MCPD内标溶液(10mg/L) 50L.加饱和氯化销溶液6 g.超声15min。5. 1. 3 香肠或奶酶称取试样10.00日，置100mL烧杯中，加d5-3-MCPD内标溶液(10mg/L)50L.加饱和氯化饷溶液30g.混和均匀，离心(3500r/min)20 min.取上清液lOg。5. 1. 4 面粉或淀粉或谷物或面包称取试样5.00g.置100mL烧杯中，加d5-3-MCPD内标溶液(10mg/L)50L.加饱和氯化锅溶液15 g.放置过夜。5.2 试样摄取将一袋Extrelut20柱填料分为两份，取其中一份加到试样
7、溶液中，混匀$将另一份柱填料装入层析柱中(层析柱下端填以玻璃棉)。将试样与吸附剂的混合物装人层析柱中，上层加1cm高度的无水硫酸纳。放置15min后，用正己烧-乙隧(9+1)80mL洗脱非极性成分，并弃取。用乙隧250mL洗脱3MCPD(流速约为8mL/ min)。在收集的乙酿中加元水硫酸纳15g.放置10min后过滤。滤液于35C温度下旋转蒸发至约2mL.定量转移至5mL具塞试管中，用乙隧稀释至4mLo在乙酿中加少量元水硫酸锅，振摇，放置15min以上。5.3 衍生化移取试样溶液1mL.置5mL具塞试管中，并在室温下用氮气蒸发器吹至近干，立即加入2.2.4三甲基戊烧1mL，用气密针加入七氟丁
8、酷基眯瞠0.05mL.立即密塞。涡司在混合后，于70C保温20min, 取出后，放至室温，加饱和氯化锅溶液3mL，涡激混合30s.使两相分离。取有机相加元水硫酸锅约为0.3 g干燥。将溶液转移至自动进样的样品瓶中，供GC-MS测定。5.4 空白试样制备称取饱和氯化销溶液(5mol!L)10 mL.置于100mL烧杯中，加d5-3-MCPD内标溶液(10mg/L) 50L.超声15min。以下步骤与样品提取及衍生化方法相同(5.2和5.3)。5.5 标准系列溶液的制备吸取标准系列溶液各0.1mL.加d5-3-MCPD内标溶液(10mg/L)10L.加2.2.4-三甲基戊炕516 GB/T 500
9、9. 191-2003 0.9 mL，用气密针加入七氟丁酷基咪略0.05mL.立即密塞。以下步骤与试样的衍生化方法相同(5.2和5.3)。5.6 测定5.6.1 色谱条件色谱柱，DB-5ms柱.30mXO. 25 mmXO. 25m。进样口温度，230.C。传输线温度，250OC。程序温度，50OC保持1min，以2.C/min速度升至900C.再以40C/min的速度升至2500C.并保持5 mino 载气=氮气，柱前压为6psi。不分流进样，进样体积1L.5.6.2 质谱参披电离模式z电子轰击源也D.能量为70eV。离子源温度为2000C。分析器(电子倍增器)电压为450V。溶剂延迟为12
10、min，质谱采集时间为12min 18 min. 扫描方式:采用选择离子扫描(SIM)采集.3-MCPD的特征离子为m/z253、275、289、291和453.d5-3-MCPD的特征离子为m/z257、294、296和456.选择不同的离子通道，以m/z253作为3-MCPD定量离子.m/z257作为d5-3-MCPD的定量离子，以m/z253、275、289、291和453作为3-MCPD定性鉴别离子，考察各碎片离子与m/z453离子的强度比，要求四个离子(m/z253、275、289和291)中至少两个离子的强度比不得超过标准溶液的相同离子强度比的士20%。5.6.3 测定量取试样溶液
11、1L进样。3-MCPD和d5-3-MCPD的保留时间约为16min.记录3-MCPD和d53-MCPD的峰面积。计算3-MCPD(m/z253)和d5-3-MCPD(m/z257)的峰面积比，以各系列标准溶液的进样量(ng)与对应的3-MCPD(m/z235)和d5-3-MCPD(m/z257)的峰面积比绘制标准曲线。5.7 结果计算按内标法计算样品中3氯1，2-丙二醇的含量。见下式z式中=x=生兰工2 X一一试样中3氯1.2丙二醇含量，单位为微克每千克(或微克每升)g/kg(或g/L)J，A 试样色谱峰与内标色谱峰的峰面积比值对应的3-氯-1，2丙二醇质量，单位为纳克(ng), f 试样溶液
12、的稀释倍数;m 试样的取样量，单位为克(或毫升)g(或mL门。计算结果表示到三位有效数位。6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。517 GB/T 5009. 191-2003 7 其他16.381 1 % d5-3-MCP. m I z 257 14.39014.655 14.994 15.479 16.489 16.580 1古j 3-MCPD.m/z253 %, o 14.14314.3剧14刷815础回国316.336 J .!已坐回13氯1，2丙二醇及其氟代同位素的全扫描总离子流回% 100 50 100 150 z 随时?咱$5 4 1
13、30 i5 ;4 1 3 4 ; ; 4似; : : Olf5 43 3 7、，2斗3问肉。;0 87L3 : 0 5 2 0 0 2 % 169 100 50 100 150 200 250 3回350400 450 固23-氯-1.2-丙二酶及其饨代同位素的质谱固11d5叩D，rn/z257酬25川CPD，m/z253.275，2891XL一则可d 5- MCPD , m/Z257 16;52 %f飞OTMTMTMn 16.389 100可3-MCPD，m/z253 %1 14.o 14.500 15.o 15.500 16.000 16.500 17.000 图33氯1，2-丙二醇及其凭代同位素的选择性离子总离子流圄518 GB/T 5009. 191-2003 253.00 100 -r 1 3-MCPD -1 275.00 289.00 i飞11蝠;a.-Iliiiilii . Um:!Alilli 叫1山叩fTll1m俨俨m/z260 280 300 320 340 3BO 3黯40042Q 440 257 100 d5-3-MCPD % 296.即456.0。mlz 260 2回300320 340 3酣380400 420 440 倒43氯-1.2-ji哥二董事及其氛代闵位素的选摞离子质谱圈519
