1、ICS 11.020 c50 备案号:15863-2005 明TS中华人民共和国卫生行业标准WS瓜、247-2005甲型胎儿球蛋白检测产前监测和开放性神经管缺损诊断准则Approved Guideline of Systems for Alpha Fetoprotein(AFP) Assays Used in Prenatal Screening and Diagnosis of Open Neural Tube Defects 2005-05-08发布2005斗2-01实施咔:r.fl主川、民E主乓不noo=r主组主苦口发布-帽-1.目。自WS/T 247-2005 本标准修改采用美国国家临
2、床实验室标准化委员会CNationalCommittee of Clinical Laboratory Standards, NCCLS) I/LA17-A中有关条款结合我国实际进行编写，旨在规范有关甲型胎儿球蛋白检测用于产前监测和开放性神经管缺损诊断方法，从而加强准确性和可比性，提高应用价值。本标准从2005年12月01日起实施。本才示准由卫生部提出。本标准起草单位:四川省临床检验中心。本标准主要起草人:袁红、王智斌、杨明清c本标准由卫生部负责解释。WS/T 247-2005 1 范围甲型胎儿球蛋白检测产前监测和开放性神经管缺损诊断准则本标准规定了利用母体血清甲型胎儿球蛋白(maternal
3、serum AFP, MSAFP)和羊水甲型胎儿球蛋白Camnioticfluid AFP, AFAFP)检测进行产前监测和开放性神经管缺损Cpen neural tube defects , ONTD)诊断的方法和程序、标本采集和保存、正常参考值的制定、标准品的选择、干扰因素、方法优化和质量控制措施。本标准适用于MSAFP和AFAFP检测及产前监测和开放性神经管缺损的诊断。2 标准物质2.1 WHO标准物质世界卫生组织CWHO)有AFP标准物质供应(72/225)，用脐带血凉干制成。该标准物质使用国际单位CTI刀，并由定标实验室联合赋值。2.2 中国国家标准物质中国还没有国家标准物质。在中国
4、的国家标准物质(其定值应溯源到WHO标准物质)确定以前，生产厂商应使用WHO、英国、美国标准物质标定实验室日常使用的标准物质，或直接使用WHO、英国、美国标准物质作为实验室日常使用的标准物质。在中国的国家标准物质确定以后，实验室可使用国家标准物质。2. 3 标准物质的使用2.3. 1 使用标准物质制作的工作曲线应最大限度地适应临床标本的AFP含量范围，尽量避免对血清标本进行稀释。2.3.2 工作曲线以母体血清AFP检测为准。羊水需使用试剂盒生产厂商在试剂盒中提供的稀释液或单独出售的稀释液作适当稀释0/100到1/200)后检测。实验室使用自制的稀释液时，必须经过对照试验证明其适合试剂盒的检测需
5、要，并在分析过程中带人稀释质控品以监测稀释过程的精确度。2.3.3 制备工作曲线统一使用IU作为AFP单位，或使用试剂盒提供的转换因子转换为IU报告AFP检测结果。3 标本收集、运输和贮存3. 1 标本收集3. 1. 1 血清血掖收集在无抗凝剂的玻璃管内，室温放置3045分钟，血块收缩后，以1OOOl 200g离心510分钟，获得血清标本。标本有乳廉微粒或严重榕血，为不合格标本。3. 1.2 血摸试剂盒允许时，可使用血浆标本。3. 1.3 羊水用标准的羊水采集技术收集羊水，实验或送检前将样本离心，去除红细胞，并做记录。3.2 标本保存、运输l WS/T 247-2005 血清:采血后立即分离血
6、清，可以常温运送标本，实验前或运送前放40C80C冰箱保存。羊水:实验前必须贮存于40C80C冰箱，温度较高或运送时间长，标本应放置冰块送检。用于MSAFP或AFAFP分析的标本，放置于带塞的管子内，在一200C可延长保存时间。4 检测方法AFP的定量测定方法包括:放射免疫分析技术、酶联免疫吸附技术和发光免疫分析技术等。检测时严格按照试剂盒说明书操作。5 质量保证建立严格的5. 1 参考值的制定监测实验室必须建立自?考值是每个实验室使用周的正常均值的倍数(5. 1. 1 母体血清中选择A.首同血选择B:选择C:100份已经测定室的中位值。样本MSAFP中位系统误差。选择D(加MSAFP值计算加
7、值作为中位值用于监测，5. 1.2 羊水中位值的建立罔5.2 AFP实验的室内质控所有的标准质控方法均适用于AFP当的。MSAFP监测参位值。病人结果用相应孕100份MSAFP检果，但使用未经控制品的含量应在医学决定水平(cutoff值)附近。三种质量控制品:正常浓度控制品、高浓度控制品和极高雄度控制品，其AFP浓度分别为3045IU/mL、6090IU/mL和100-150IU/mL。使用自备或购买质控血清进行室内质控，其数量应足够一年使用。血清在冻融过程中AFP含量稳定，实验室可以通过测定以往的某个病人标本来监测长期的实验漂移。该标本应是在计算和制定现在使用的中位值时所检测的病人标本。如果
8、检测结果变化幅度超过了5%8%，中位值和监测cutoff值就可能发生了相应的漂移，应重新计算和校准参考值。如果测定结果发生了稳定的改变，并且中位值的改变超过了5%，则应选择漂移发生后的数据重新计算中位值。如果这些数据不足以计算一组可靠的中位值，可使用一个校正因子对旧的中位值进行校2 WS/T 247-2005 正后作为新的中位值。在标本量很大时，应在实验过程中随机加入质控进行监测。5.3 实验室工作血清AFP水平与孕龄、母体体重、种族、膜岛素依赖性糖尿病和多胎娃振有关，高低各不相间，解释血清AFP结果时必须考虑以上因素。应综合考虑病人本身因素和AFP测定因素来评估神经管缺损的监测报告，充分考虑
9、了各方面引起变异的因素和问题后，为临床医生提供合理的建议。评价一个实验室进行AFP监测的资格时必须考虑到如下因素:参考值必须来自本实验室或证明使用点甜值时刊实验室的监测对象。影响AFP结果的所有因评估神经管缺损时必向医生提供对结果进对孕妇MSAFP监酣棉外合跚跚!:k幽翻jj翩翩护勤的，的剧性率(initialpercentage of women with po 5.4 室间质量评价开展AFP监测5.5 监测过程中通过对胎方式。通过对标本量达到6 数据处理6. 1 单位单位使用国防6.2 精密度在临响比较小。6.3 工作曲线范围AFP实验的工作范围包含正常孕妇均标本应稀释后重新测定。6.4
10、校准和准确度定期校准仪器及加样器的精确6.5 cutoff值考虑这种监测理标本。该工作曲线/mL。超过最大检测限的cutoff值是判断监测对象的检测结果是否异常的标准，其表达方式为中位值的倍数，不同监测中心可使用不同的cutoff值。正常孕妇MSAFP测定结果中，如以3倍中位值做为cutoff值，大约有1%会超过cutoff值;以2.5倍中位值做为cutoff值，大约2%超过;以2倍中位值做为cutoff值，大约5%超过。对初检结果超过cutoff值的正常孕妇应做进一步的检查(重新抽血复查、超声检查和校正孕龄等)。7 监测方法及结果解释选择不同的AFP诊断阔值会直接影响到对ONTD监测的假阳性
11、率和检出率。母体的体重对AFAFP总量没有影响。膜岛素依赖性糖尿病孕妇的MSAFP水平较低(大约20%)0MSAFP实验结3 WSjT 247-2005 果用相应孕龄元。NTD孕妇检测结果的中位值的倍数表示。无ONTD母体的年龄、是否单身及地理因素都不会影响其血清和羊水AFP测定结果。7. 1 母体血AFP测定7. 1. 1 检测时的孕龄实验室在提供结果解择时必须明确采集标本时病人的孕龄。7. 1.1. 1 孕周的计算方法送检血清样本进行MSAFP测定时统一采用实周计算法。结合末次月经Clastmenstrual period , LMP)和声像监测估算孕龄改善ONTD的监测效果。常规使用二顶
12、骨直径测定来计算孕龄，可能会错误提高开放性脊柱裂的检出阳性率。7.1. 1. 2 检测最佳时间产前诊断的最佳时间为16到18孕周。15孕周之前用MSAFP监测ONTD是不可靠的，同时也不推荐在20孕周以后进行。7.1. 1. 3 监测方案MSAFP初检结果升高时，应对MSAFP进行两次连续的检测(采样时间间隔l周以上)，再进行进一步的诊断检查。然后进行声谱仪检查，其目的是:Ca)确认孕期;Cb)检查是否是双胞胎;C c)评估胎儿的发育状况;(c!)检查无脑畸形口如果MSAFP升高仍然得不到合理解释，应再次进行超声检查以查找其他的胎儿畸形，特别是开放性脊柱裂和开放性腹壁缺损。最后进行羊水AFPC
13、AFAFP)检测。7.1. 1. 4 结果报告每一项实验均应立即进行并及时发出报告。7. 1. 2 正常参考值7.1.2.1 正常参考值娃振中期的MSAFP眼皮正常中位值大约每周上升15%。某孕周的正常单胎孕妇的AFP值大约90%都介于O.5到2倍中位值(16实周时，大约为35IU/mL) 之问。每一孕用的MSAFP值近似于对数正态分布。将结果绘制成图，其分布向一侧倾斜，顶部的值特别大，呈钟形曲线分布。7. 1. 2.2 解释MSAFP结果的统计方洼将相同孕用的正常孕妇的r定结果计算出中位值，然后用MoM表示病人的AFP测定结果。7.1.3 MSAFP升高的临床意义7. 1. 3. 1 开放性
14、神经营缺损娃振妇女血清AFP测定的目的是为了鉴别ONTD，特别是胎儿开放性脊柱裂。开放性脊柱裂孕妇MSAFP大约相当于正常单胎中位值的4倍，而无脑畸形孕妇的MSAFP则相当于正常中位值的8倍。对cutoff值附近的MSAFP结果的解择规则应进行定期评审。7.1.3.2 多胎蛙报双胞胎娃报的MSAFP大约相当于单胎娃1匠的2倍，三胎则大约为3倍。因此一旦确认为多胎娃振，则需要使用相应的多胎娃振参考范围对结果作恰当诊断。7. 1. 3. 3 对死胎、先兆流产、低体重儿或阜产儿的处理这些情况也会造成MSAFP水平升高。对异常结果，应该在做完所有必需的进一步检查之后，再重新进行详细分析。7.1.3.4
15、 与MSAFP升高相关的其他主要的胎儿畸形开放性腹壁缺损和芬兰型先天性肾病变应通过MSAFP监测加以鉴定。7.2 羊水AFP测定7.2. 1 检测时的孕龄7. 2. 1. 1 孕周的计算方法4 WS/T 247-2005 参照母体MSAFP检测的孕周计算方法(7.1.1.1)计算孕周。7. 2. 1. 2 推荐的检测时间推荐在1622孕周进行羊水分析监测ONTDo7.2.2 正常参考值7. 2. 2. 1 正常参考值正常孕妇的AFAFP水平均在540kIU/mL间。虹-振17周的正常中位值大约是10kIU/mL7.2.2.2解释羊水A归结果的统计方法使用与MSAFP相同的方法对AFAFP结果进
16、行统计分析。7.2.3 AFAFP 水平升高的临床意义7. 2. 3. 1 开放性神经营缺损AFAFP的阳性结果需对羊水进行HbF分析加以纠正。但由于可能出现胎儿血对样本的污染，因此不能根据胎儿血的存在直接排除ONTDa排除AFP假阳性结果最可靠和最特异的方法是检测神经酶一乙酷胆碱醋酶(acetylcholinesterase，AchE)a AchE分析是针对羊水AFP阳性结果必须做的确认试验。检测方法参照有关文献。开展该项实验有困难的小实验室应将标本送到较大的实验室作AchE分析。7.2.3.2 死胎死胎也会造成AFAFP水平上升。死胎羊水AchE凝胶分析会出现一种特有的斑点状模式。7.2.
17、3.3 误抽服母体尿的鉴别抽取羊水时错误地抽吸了母亲膀肮中的尿标本，AFAFP浓度常常低得无法检测。应通过pHC新鲜吸取的尿标本pH较低)或藏叶试验(尿标本为阴性)加以鉴别。藏叶试验的做法是:将一滴样本滴在一块载玻片上，自然干燥后用显微镜镜检，羊水标本会出现一种与藏类植物叶子形状类似的特殊结晶结构。7.2.3.4 其他胎儿畸形其他主要的胎儿畸形也可造成AFAFP监测结果升高。开放性腹壁缺损也是常见的胎儿畸形之一。由于Turners综合征有膀脱水囊形成，如果发生水囊破裂或不小心抽到了水囊部位，也会导致AFP结果升高。5 中华人民共和国卫生行业标准甲型胎儿球蛋白检测产前监测和开放性神经管缺损诊断准则WS/T 247 - 2005 * ws厅247-2005出版发行:人民卫生出版社(中继线67616688)地址:(100078)北京市丰台区方庄芳群固3区3号楼网址:http:/ E-mail: 印刷:北京新丰印刷厂经销:新华书店开本:880 x 1230 1/16 印张:O. 75 字数:22千字版次:2006年5月第1版2006年5月第1版第1次印刷书号:14117 . 10 定价:6.00元著作权所有，请勿擅自用本书制作各类出版物，违者必究(凡属印装质量问题请与本社销售部联系退换)的CON-h寸NHK飞-JF
