1、GB/T 14926.1694 1 主题内容与适用范围 本标准规定了乙型溶血性链球菌检验，适用于实验小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔的检验。 2 引用标准 GB 4789.11 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验 GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 3 材料和试剂 3.1 链球菌增菌肉汤 3.1.1 成分 3.1.2 制法：除L胱氨酸、三氮化钠、结晶紫外，加热溶解调pH，121灭菌 15min，然后以无菌手续加入其余成分，摇匀，分装中试管备用。 3.2 血琼脂 GB 4789.28中3.6。 3.3 KF 选择性琼脂 3.3.1 成分 酸水解酪蛋白 15g豆胨（胰蛋
2、白胨） 5g氯化钠 4g 柠檬酸钠 1g L-胱氨酸 0.2gD葡萄糖 5g硫酸钠 0.2g三氮化钠 0.2g结晶紫 0.0002g蒸馏水 1000mLpH 7.6蛋白胨 10g酵母膏 5g麦芽糖 1g0.4溴甲酚紫溶液 5mL氯化钠 5g甘油磷酸钠 10g叠氮钠 0.4g1氯化三苯基四氮唑（TTC） 10mL页码，1/4GB/T 14926.16942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92616K.htm3.3.2 制法：上述成分，除琼脂、溴甲酚紫外，加热溶解，调pH7.6，加入琼脂，煮沸溶解冷至50，加入1TTC10mL，0.4溴甲酚紫5mL，混
3、匀，制成平皿备用。 3.4 杆菌肽敏感试验 GB 4789.11。 3.5 马尿酸钠水解试验培基 3.5.1 成分 3.5.2 制法：溶解即可。 3.6 氯化钠-七叶灵培养基 3.6.1 成分 3.6.2 制法：上述成分溶解后调pH，分装小试管，每管3mL，11520min灭菌备用 。 3.7 糖发酵管 GB 4789.28中2.2。 3.8 精氨酸脱羧酶培养基 GB 4789.28中2.12。 4 检验程序 琼脂 20g蒸馏水 1000mL马尿酸钠 1g蒸馏水 100mL 七叶灵 2g柠檬酸铁铵 0.5g氯化钠 50g磷酸氢二钾 0.4g磷酸二氢钾 0.12g蒸馏水 1000mLpH 5.6
4、5.8页码，2/4GB/T 14926.16942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92616K.htm 5 操作步骤 5.1 采样，采取气管分泌物或病灶标本。 5.2 分离培养：标本直接分离于血平皿或KF选择性平皿上，361温箱培养24h；从平面上挑选圆形、突起、米黄色菌落，大小1mm，其周围有乙型溶血环；接种血平皿，进行分纯，备做鉴定试验。 5.3 鉴定试验 5.3.1 革兰氏染色：革兰氏阳性球菌，呈链状排列，短者48个，长者20个左右，大小为0.51mm。 5.3.2 杆菌肽敏感试验：见GB 4789.11中4.6。 5.3.3 CAMP试验：
5、在5羊血琼脂平皿上，一端划线分离待鉴定的溶血性链球菌，而与其相距1cm处，再划线接种已知产生溶血的金黄色葡萄球菌，于361，10CO2下培养24h。乙型溶血性链球菌能产生一种CAMP因子，能促进金黄色葡萄球菌的溶血作用。因而在两种细菌的连接处，显示出犬牙交错的溶血现象，为阳性反应。 5.3.4 氯化钠-七叶灵试验：将待鉴定菌株，接种培养基内，361培养2448h，所有D群链球菌为黑色反应，为阳性。而乙型溶血性链球菌为阴性反应。 5.3.5 马尿酸钠水解试验：将待鉴定菌株，于0.4mL马尿酸钠溶液中，制成浓厚菌悬液，于361水浴培养2h后，沿管壁加入3.5水合印三酮试剂，形成两层，如果产生蓝紫色
6、至深紫色，为阳性反应。乙型溶血性链球菌为阴性反应。 乙型溶血性链球菌与相关细菌的鉴别 C 页码，3/4GB/T 14926.16942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92616K.htm 注： ：阳性；：阴性；D：不定；NT：未做试验。 6 结果报告 凡符合上述各项实验结果者，均可发出报告。 特 性化 脓 性 链 球 菌无 乳 链 球 菌马 链 球 菌停 乳 链 球 菌G L 群 链 球 菌枕 外 窿 链 球 菌肺 炎 链 球 菌E P U 链 球 菌乳糖甘露醇精氨酸马尿酸钠-溶血6.5NaCl- 七叶灵+D-+-+D-+-+NT+ +-+-D-+-D+-D页码，4/4GB/T 14926.16942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92616K.htm
