1、ICS 65140B 47 圆亘中华人民共和国国家标准GBT 23 1 952008蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法紫外分光光度法Method for the determination of catalase in bee pollenUltaraviolet spectrophotometry2008-12-31发布 2009060 1实施丰瞀粥鬻瓣挈襻瞥星发布中国国家标准化管理委员会徼1“前 言本标准由中华全国供销合作总社提出并归口。本标准起草单位：广州市宝生园有限公司、华南农业大学。本标准主要起草人：郑尧隆、刘伟、陈伟彬。GBT 2319520081范围蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法紫外分光
2、光度法本标准规定了蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法。本标准适用于蜂花粉中过氧化氢酶的测定。GBT 2319520082规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理过氧化氢在240 nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度在一定范围内随反应时
3、间而降低，根据测量吸光度的变化速度即可测定过氧化氢酶的活性。4试剂除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和符合GBT 6682要求的蒸馏水或去离子水。41磷酸缓冲液：pH为6870，浓度为50 mmolL，含有1 mmolL乙二胺四乙酸二钠(EDTA)。准确称取1791 g Na：HPO。12H zO加蒸馏水溶解并稀释至500 mL，作为A液；准确称取780 g NaH。POt2H：O加蒸馏水溶解并稀释至500 mL，作为B液；准确量取550 mL A液与450 mL B液于200 mL烧杯中，加入007 g EDTA，加蒸馏水稀释混匀(加至160mL左右)，用酸度计标定至6870，转入200
4、mL容量瓶中，定容至刻度，混匀。42过氧化氢溶液：体积分数为01。准确吸取05mL 30过氧化氢置于50mL棕色容量瓶中，用磷酸缓冲液(41)定容至刻度，混匀，从中准确量取100 mL于100 mL三角锥瓶(避光)中，再准确量取200 mL的磷酸缓冲液(41)加入混匀即得。43液氮。5仪器设备51紫外分光光度计。52冷冻离心机。53恒温水浴锅。54酸度计。55分析天平：感量01 mg。56移液枪：100 btL，5 000 pL。6待测液的制备称取i g样品，精确到1 mg，置于已用适量液氮预冷的瓷研钵中，边加液氮边研磨，待样品充分研1GBT 23 1 952008磨后，静置至研钵解冻升温后加
5、入约10 mL新鲜配制的磷酸缓冲液(41)溶解，转入25 mL容量瓶中，并用磷酸缓冲液冲洗研钵数次，合并洗液并定容至刻度。混合均匀后将容量瓶置4冰箱中静置30 min，取上清液在低温离心机4、12 000 rmin的条件下离心15 min，取澄清液即得待测液。7分析步骤71紫外分光光度计参数为：方式：时间扫描；波长：240 nm；测定时间：120 S；读数间隔：5 s。72将样液及过氧化氢溶液(42)分别置于40恒温水浴锅中10 min，准确吸取样液01 mL于石英皿中，将石英皿放回槽中(未放石英皿前仪器已消零)，再准确吸取29 mL过氧化氢溶液(42)加入石英皿中，混合均匀，立即开始读数。73从0 s90 S中截取线性较好的1 rain，计算其吸光度差值。8计算与表述以1 min内过氧化氢在240 nm波长下吸光度减少001的酶量为1个酶活单位(u)。过氧化氢酶活性(Ug)按式(1)计算。 过氧化氢酶活性一瓦丽专每式中：zxA结果中选取的1 min吸光度差值；V。一样液总体积，单位为毫升(mL)；001240nm波长下吸光度每下降001为1个酶活单位(u)；1 rain；耽测定用样液体积，单位为毫升(mL)；m样品质量，单位为克(g)。计算结果表示到整数位，报告结果为平行测定结果的算术平均值。9允许差同一实验室平行测定或重复测定结果相对标准偏差lo。
