1、ICS 65.020.01 B 16 道昌和国国家标准11: ./、中华人民GB/T 28097-2011 草果黑星病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Venturia inaequalis (Cooke) Wint. 2011-12-30发布2012-06-01实施数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T 28097-2011 剧吕本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国安徽出入境检验检疫局、安徽
2、农业大学、中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本标准主要起草人z姚剑、植根甲、温劲松、余晓峰、张萍、李刚、郑海松、李云飞、方元炜、张道环、李生贵、段禄华。I GB/T 28097-2011 苹果黑星病菌检疫鉴定方法范围本标准规定了苹果黑星病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于苹果属果树、果实、种苗及其他材料的检疫和鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本造用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样3 苹果黑星病菌基本信息中文名:苹果黑星病菌。学名z有性型:V
3、enturia inaequalis (Cooke) Winto 元性型:SpilocaeaomiFr.。病害英文名:applescab , black spot o 异名z有性型:S phaeria cinerascens Fr. S phaerella cinerascens Fuck. S phaerella inaequalis Cooke. Endostigme inaequalis (Cooke) Syd. S pilosticta inaequalis (Cooke) Petr. Endostigme cinerascens (Fleisch) J orst. 元性型:Fusic
4、ladium dendriticum (Wallr. )Fuck. Claorium dendriticum Wallr. 根据真菌词典第九版(2001)，有性型属真菌界Fungi，子囊菌门Ascomycota，子囊菌纲Ascomycetes，座囊菌亚纲Dothideomycetidae，格抱腔菌目Pleosporales，黑星菌科Ven turiaceae，属星国属Ven-turza。元性型属环黑星抱属Spilocaea，仁果环黑星抱Silocaeapomi Fr. (= Fusicladium dendriticum (Wallr. ) Fuck. )。苹果黑星病菌的其他信息参见附录A。4
5、 方法原理经现场查验、取样后，实验室用显微镜等仪器设备进行检测，根据其危害症状、形态学特征进行结果判定。1 GB/T 28097-2011 5 仪器及用具5. 1 仪器显微镜、超净工作台、高压灭菌锅、生物培养箱。5.2 用具解剖刀、慑子。6 试剂和培养基6. 1 试剂4%次氯酸纳，70%酒精旬6.2 培养基PDA培养基，pH值调节至5.56. 50 7 现场检验7. 1 抽样方法按SN/T2122进行抽样。7.2 症状检查逐一对抽检样品进行症状检查，并将疑似感病样品带回实验室作进一步检验。7.2. 1 叶片检查叶片上病斑多先从叶片正面发生。病原菌从侵入点放射状扩展，形成病斑。叶片正面病斑初为淡
6、黄绿色，色泽逐渐变深，后变为黑色，圆形、近圆形，直径3mm6 mm或更大，病斑周围有明显的边缘，老叶上尤甚。幼叶病斑多表面粗糙羽毛状，成叶病斑边缘明显而不整齐，有时表生白色棉絮状物。病斑多由叶片正面向上突起，其背面形成环状凹人，呈泡斑状，有时病斑脱落穿孔。叶背面侵染形成的病斑略成圆形，表生黑褐色霉状物，叶片正面对应部位祖绿，枯死。侵染较晚的，仅在叶片背面产生黑色多角形病斑。叶片上病斑可互相汇合，占据大部叶面，叶片扭曲、卷曲，进而干枯并早期落叶。在叶柄和主叶脉上的病斑黑色，较小，小点状、梭形或长条形，往往导致叶片变黄脱落。7.2.2 花器检查发病花瓣褪色，尊片上生灰色病斑，但常被尊片绒毛覆盖，不
7、易察觉。花梗上病斑还可环切花梗，造成落花。7.2.3 果实检查果实从幼果至成熟期均可被侵染，果面病斑初为黑色星状斑点，很小、微凸，上生有绒状菌丝体。随着果实膨大，病斑逐渐扩大并凹陷，表层木栓化，边缘开裂，有不规则细小裂纹，整体疮癫状。病果开裂、畸形。在秋季被侵染的果实，病面密生黑色或褐色小点，不表现典型症状，但在贮藏期病斑逐渐扩大。GB/T 28097-20门7.2.4 苗木、接疆等繁殖材料检查1年生枝条被侵染，常发生在离枝端大于10cm的部位，病斑较小，枝条长大后，病斑消失，但在一些感病的品种上，病斑并不消失，使病枝呈泡肿状。另外，芽鳞内也有越季存活的菌丝体或分生抱子。8 实验室检测8. 1
8、 切片检测选取疑似感病植物组织病健交界处切片，移于载玻片中央的水滴中，镜捡，观察子实体特征。8.2 分离培养检测选取疑似感病植物组织，剪取病健交界处组织若干小块，约2JnmX2 mm，在70%酒精中浸湿一下后立即移入4%次氯酸铀中消毒处理1min，用元菌水洗3次，放于PDA平板培养基上，每皿5块，置于16 .C20 .C，光照强度为6001x、光周期为12h条件下培养。观察病菌形态特征。9 鉴定特征9. 1 病菌形态特征苹果黑星病菌有性型Venturiainaequalis CCooke) Wint.子囊座在落叶上形成，埋生或近表生叶肉组织中，黑褐色，球形、近球形，直径约90mr-.，100m
9、，孔口处稍有乳状突起，具刚毛，刚毛长25m75m。子囊座内产生多数子囊，处于不同发育阶段。子囊长棍棒形，无色，大小(55m75m)X (6m12m)，有短柄，壁薄。子囊内含8个子囊抱子，成熟子囊抱子卵圆形，暗褐色，双胞，顶细胞较小，基部细胞较大，大小(11m15m)X (4m8mL元性型Fusicladiumdendriticum (Wallr.) Fuck.分生子包子梗丛生、淡褐色至橄榄色，短棒状，直立或弯曲，不分枝，单胞，0个2个隔膜，全壁芽生产抱，环痕式延伸，大小(50m60m)X(4m6m)。分生抱子顶生，倒梨形或倒棍棒状，顶端略尖，初元色，谈褐色至橄榄色，初单胞，后生1个隔膜，隔膜处
10、稍锺缩，抱基平截，表面光滑或具小疵突，大小(12.0m26.0m)X(5.5ml1. 5m)。分离培养的分生抱子比切片观察的略大(参见附录B)。9.2 病菌培养性状菌株在PDA培养基上培养4d后，开始形成灰白色菌落。4周后，菌落呈不规则形或圆形，直径约20 mm，平铺状，橄榄色、灰色或黑色，有时被茸毛。菌丝初元色，后变为橄榄色。9.3 与梨黑星病菌Venturiapirina (Cke) Adh.的区别梨黑星病菌有性型抱子囊棍棒形，子囊抱子顶细胞较大，基部细胞较小;元性型分生抱子梗罕见有隔膜，梗壁上有齿状或疵状突起，分生抱子单抱，两端略尖(参见附录C)。10 结果判定如有7.2. 17. 2.
11、 4描述中任一症状，且切片或分离培养观察的病菌形态特征与描述的病原有性型或无性型特征相符，可判定为苹果黑星病菌。3 GB/T 28097-2011 11 样晶、菌种保藏分离菌转接在PDA培养基斜面上，待斜面表面长满菌丝后，置于4.C保存，定期转接。有条件可进行冷冻干燥保存。检出病菌的样品妥善保存6个月。保存期满灭活处理。4 GB/T 28097-2011 附录A(资料性附录)苹果黑星病菌其他信息A.1 地理分布美洲:墨西哥、美国、加拿大、阿根廷、巴西、智利;欧洲:芬兰、英国、法国、奥地利、德国、前苏联、捷克、斯洛伐克、波兰、保加利亚、匈牙利、罗马尼亚、前南斯拉夫、比利时、意大利、丹麦、荷兰、挪
12、威、瑞典、瑞士、土耳其;亚洲z印度、日本、朝鲜、阿富汗、叙利亚、塞浦路斯以及中国(吉林、黑龙江、新疆、四川、云南等h非洲:南非、肯尼亚、利比亚;大洋洲z澳大利亚、新西兰等。A.2 寄主范围主要为苹果属果树(Malus)。5 GB/T 28097-20门附录B(资料性附录苹果黑星病菌形态特征一一一-分生甩子图B.l无性型分生于包子梗及分生于包子图B.2有性型子囊和子囊抱子6 GB/T 28097-2011 附录C(资料性附录)梨黑星病菌形态特征图C.1梨黑星病菌形态特征图FFON|hgNH阁。华人民共和国家标准苹果黑星病菌检瘟鉴定方法GB/T 28097-2011 国由* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(10004日网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销晤印张O.75 字数12千字2012年3月第一次印刷开本880X12301/16 2012年3月第一版* 16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107定价书号:155066. 1-44649 GB/T 28097-2011 打印H期:2012年4月16HF002A
