1、中华人民共和国国家棉准食品中糖辖锦吕霸定方法Method for determination of saccharin sodlum ln foods 1 主您内容与运愚范噩本标准规定了食品中糖精纳约测定方法。本标准适用于食品中糖精销的测定。GB/T 5009. 28996 代替GB50碍，觅一部最低检出量:高效液相色谱法取样量为10g.进样最为10L时，最低检出最为1.5 ng , 第一篇高效液相色谱法(第一法)2原理样品加i温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中俭，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和)景。取祥量为10g.进样量为10L时最低检出量为1.5吨
2、。3 试知l3. , 月写喜事s经滤膜(0.5m)过滤。3.2 氨水(1十1)，氨水妇等体积水混合3.3 乙器重镀溶液(0.在2mol/L)，称取1.54 g乙重量镑，如水至1000mL溶解，经滤膜.45严m)过滤。3. 4 糖精纳标准储备溶液s准确称取0.0851 g经120C烘干4h后的糖精销(C，凡CNNaS， 2H,) .加水辩解定容至100.0mL，糖精销含量1.0 mg/mL.作为储备溶液。3. 5 糖精纳标准使用溶液z吸取糖精纳标准储备液10.0mL放入100mL容盘瓶中，加水至刻度。经滤膜(0.45m)过滤。该溶液每毫升相当于0.10mg的糖精锅。4仪器离效液相色谱仪，紫外检测
3、稽。5 分析步骤5. , 样品处理5. 1 . 1 汽水g称取5.00-10.g.放入小烧杯中，微撞在搅拌除去二氧化碳，用氨7)(1十1)1题pH约7。如水定容3在适当的体积，经滤痰(0.45严血过滤。5. ,. 2巢汁类z称取5.白。-10.00g.用氨水(1+1)消pH约7.如水定容至适当的体积，离心沉淀，上消液经滤膜(0.45m)过滤。5. ,. 3 配制酒类g称取10.0 g.放小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1+1)调pH约7.加水定容20 mL.经滤膜(0.45m)过滤.5.2 高效液相色谱参考条件中华人民共和雷卫生部1996-06-19数准1996-09-01实施3 GB/T
4、 5009.28-1996 5.2. 1 色谱柱，YWG-C184.6 mmX250 mm 10m不锈钢柱。5.2.2 流动相2甲醇s乙酸镀溶液(0.02mol/L) (5+95)。5.2.3 流速，1mL/min o 5.2.4 检测器2紫外检测器，波长230nm，灵敏度。2AUFS。5.3测定取样品处理液和标准使用液各10L(或相同体积注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据进行定性，以其峰面积求出样液中被测物质的含量，供计算。5.4计算X1 = m叫1三100 0 一m叫，X有X1000 ( 1 ) 式中，X , 样品中糖精销含量.g!kg，m，一一进样体积中糖精纳的质
5、量tmg;V，一一进样体积，niLjV，一一样品稀释液总体积，mL;叫一一样品质量.g0 结果的表述:报告算术平均值的三位小数。5.5 允许差相对相差运H)%o5.6 其他应用5.2的高效液相分离条件可以同时测定苯甲酸、山梨酸和糖精销，色谱图如下s制回踹吾制圃卧剧酣$ 1毒-色谱图第二篇薄层色谱法(第二Z法)6 原理在酸性条件下，食品中的糖精锁用乙隧摄取、浓缩L薄层色谱分离、显色后与标准比较，进行定性和半定量测定。7试弗lj.1 乙隧g不含过氧化物。4 7.2 元水硫酸锅。7.3 元水乙醇及乙醇(95%)。7.4 聚酷胶粉:200目。GB/T 5009.28-1996 7.5 盐酸(l十1):
6、取100mL盐酸，加水稀释至200mL。7.6 展开剂7.6. 1 正了醇+氨水十元水乙醇(7十1+2)。7.6.2 异丙醇十氨水+无水乙醇(7+1十2)。7. 7 显色剂澳甲盼紫溶液(0.4g/L):称取O.04 g 真甲勘紫.用乙醇(50%)溶解，加氧氧化销溶液(4日/L)1. 1 mL调节pH为8.定容至100mL , 7.8硫酸铜溶液。00g/L):称取10g硫酸铜(CuSO. 5H20 1 .用水溶解并稀释至100mL。7.9 氢氧化纳溶液(40g/Ll。7.1 0 糖精锅标准溶液:准确称取O.085 1 g经120C干燥4h后的糖精锅，加乙醇溶解，移入100mL 容量瓶中，加乙回事
7、(95%)稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1rng糖精销(C.H.CONNaS02 2H20l。8仪器8. 1 玻璃纸生物制品透析袋纸或不含增自剂的市售玻璃纸。8.2 玻璃喷雾器。8.3 微量注射器。8.4 紫外光灯z波长253.7nm, 8. 5 薄层板:10cmX20 cm或20cmX20 cm , 8. 6 展开槽。9分析步骤9. 1 样品提取9. 1. 1 饮料、冰棍、汽水z取10.0mL均匀试样如样品中含有二氧化碳，先加热除去。如样品中含有酒精，加4%氢氧化纳溶液使其呈碱性，在沸水浴中加热除去置于100mL分液漏斗中，加2mL盐酸。+1).用30.20.20mL乙隧提取三次，合并乙隘提
8、取液，用5mL盐酸酸化的水洗涤一次，奔去水层。乙酷层通过无水硫酸销脱水后，挥发乙酶，加2.0mL乙醇溶解残留物，密塞保存，备用。9.1.2 酱油、果汁、果酱等z称取20.0g或吸取20.0mL均匀试样，置于100mL容量瓶中，加水至约60 mL.加20mL硫酸铜溶液(100g/L).混匀，再加4.4mL氢氧化销溶液(40日/L).加水至刻度，混匀，静置30min，过滤，取50mL滤液置于150mL分液漏斗中，以下按9.1. 1自加2mL盐酸。+1)起依法操作。9.1.3 固体果汁粉等z称取20.0g磨碎的均匀试样，置于200mL容量瓶中，加100mL水，加温使溶解、放冷。以下按9.1. 2自加
9、20mL硫酸铜溶液(100g/L起依法操作。9. 1.4 糕点、饼干等蛋白、脑肪、淀粉多的食品E称取25.0g均匀试样，置于透析用玻璃纸中，放入大小适当的烧杯内，加50mL氮氧化纳溶液(0.8g/L).调成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有200mL氢氧化销溶液(0.8g/L)的烧杯中，盖主表面皿，透析过夜。量取125mL透析液相当12.5 g样品).加约0.4 mL盐酸0+1)使成中性，加20mL硫酸铜溶液(100g/Ll.li匀，再加4.4mL氢氧化销溶液(40 g/Ll.混匀，静置30min，过滤.取120mL(相当10g祥晶1.置于250mL分液漏斗中，以下按9.1. 1自加2mL盐酸0+
10、1)起依法操作。9.2 薄层板的制备称取1.6 g聚酸胶粉，加0.4g可搭性淀粉，加约7.0mL水，研磨3-5rnin.立即涂成0.25-5 GB/T 5009.28-1996 0.30 mm厚的10cmX20 cm的薄层板，室温干燥后，在80C下干燥1ho置于干燥器中保存。9. 3 点样在薄层板下端2cm处，用微量注射器点10L和20L的样液二个点，同时点3.0.5.0.7.O. 10.0L糖精锅标准溶液，各点间距1.5 cm。9.4 展开与显色将点好的薄层板放入盛有展开剂(7.6. 1或7.6.2)的展开槽中，展开剂液层约O.5 cm，并预先已达到饱和状态。展开至10cm，取出薄层板，挥干
11、，喷显色剂，斑点显黄色，根据样品点和标准点的比移值进行定性，根据斑点颜色深浅进行半定量测定。9. 5计算X，m3三1000 -二叫仨X1 000 式中:X2 样品中糖精销的含量.g/kg或g/L，叫一一测定用祥液中糖精纳的质量，mg;叫一一样品质量(体积).以mL)，V, 样品提取液残留物加入乙醇的体积，mL;V，一一点板液体积.mL。第三篇离子选择电极测定方法(第三法)10 原理 ( 2 ) 糖精选择电极是以季镀盐所制PVC薄膜为感应膜的电极，它和作为参比电极的饱和甘乘电极配合使用以测定食品中糖精纳的含量。当测定温度、溶液总离子强度和溶液接界电位条件一致时，测得的电位遵守能斯特方程式，电位差
12、随溶液中糖精离子的活度(或浓度)改变而变化。被测溶液中糖精销含量在0.02-1mg/mL范围内。电极值与糖精离子浓度的负对数成直线关系。11试J11. 1 11.2 11. 3 乙黯z使用前用盐酸(6mol/L)饱和.无水硫酸销.盐酸6mol/Ll:取100mL盐酸，加水稀释至200mL.使用前以乙酷饱和e11. 4 氢氧化纳溶液0.06mol/L):取2.4g氢氧化纳加水溶解并稀释至1000 mLo 11. 5 硫酸铜溶液(100g/L):称取硫酸铜(CuSO， 5H20)10 g溶于100mL水中。11. 6 氮氧化纳溶液(40g/L)。11. 7 氮氧化纳溶液(0.02mol/L沁将11
13、.4稀释而成，11. 8 磷酸二氧销cCNaH，PO，. 2H)=1 mol/L溶液E取78g磷酸二氧销(NaH，PO， 2H，O)溶解后于500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀.11. 9 磷酸氢二锅cCNa但HPO.12H，O)草lmol/LJ:取89.5 g磷酸氢二销CNa，HPO， 12H20)于250mL容量瓶中溶解后，加水稀释至刻度，播勾.11. 10 总离子强度调节缓冲液:87.7mL磷酸二氧销溶液(1mol/L)与12.3mL磷酸氢二纳溶液(1 mol/L)j昆合即得。11. 11 糖精销标准溶液g准确称取O.085 1 g经120C干燥4h后的糖精纳结晶移入100mL容量瓶
14、中，加水稀释至刻度，摇匀备用.此溶液每毫升相当于1.0 mg糖精销CC，凡CONNaSO， 2H20) 0 6 GB/T 5009.28-1996 12仪器12. 1 精密级酸度计或离子活度计或其他精密级电位计，准确到士1mV。12.2糖精选择电极。12.3 217型甘乘电极2具双盐桥式甘乘电极，下面的盐桥内装入含1%琼腊的氯化仰溶液(3mol/L)。12.4 磁力搅拌器。12.5 透析用玻璃纸。12.6 半对数纸.13 分析步骤13. 1 样品提取13. 1. 1 液体样品:浓缩果汁、饮料、汽水、汽酒、配制酒等。准确吸取25mL均匀试样汽水、汽酒等需先除去二氧化碳后取样)，置于250mL分液
15、漏斗中，加2mL盐酸(6moI/L)，用20，20，10mL乙酷提取三次，合并乙隧提取液，用5mL经盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层，乙酿层转移至50mL容量瓶，用少量乙酷洗涤原分液漏斗合并入容量瓶，并用乙酷定容至J度，必要时加入少许无水硫酸销，摇匀，脱水备用.13. 1.2 含蛋白质、脂肪、淀粉量高的食品s糕点、饼干、酱菜、豆制品、泊炸食品，称取20.00g切碎样晶，置透析用玻璃纸中，加50mL氢氧化销溶液(0.02 mol/L) ，调匀后将玻璃纸口扎紧，放入盛有200mL氢氧化销溶液(0.02moI/L)的烧杯中，盖上表面皿，透析24h.并不时搅动浸泡液.量取125mL 透析液，加约0.4m
16、L盐酸(6moI!L)使成中性，加20mL硫酸铜溶液混匀，再加4.4mL氢氧化销溶液(40 g/L)，混匀.静置30min，过滤。取100mL滤液于250mL分液漏斗中，以下按13.1. 1町加2mL盐酸(6mol/L)起依法操作。13. 1. 3 蜜钱类:称取10.00 g切碎的均匀样品，置透析用玻璃纸中，加50mL氮氧化纳溶液(0.06 mol/L) ，调匀后将玻璃纸扎紧，放入盛有200mL氢氧化销溶液(0.06mol/L)的烧杯中，透析、沉淀、提取按13.1. 2操作.13. 1.4 糯米制食品:称取25.00g切成米粒状的小块均匀样品，按13.1. 2操作。13.2测定13. 2. 1
17、 标准曲线的绘制=准确吸取0，O. 5. 1. 0, 2. 5, 5. 0.10. 0 mL糖精铺标准溶液(相当于O.O. 5 , 1. 0.2. 5, 5. 0,10. 0 mg糖精纳).分别置于50mL容量瓶中，各加5mL总离子强度调节缓冲液，加水至刻度，摇匀。将糖精选择电极和甘乘电极分别与测量仪器的负端和正端相连接，将电极插入盛有水的烧杯中，按其仪器的使用说明书调节至使用状态，在搅拌下用水洗至电极起始电位(例如某些电极起始电位达一320mV).取出电极用滤纸吸干。将上述标准系列溶液按低浓度到高浓度逐个测定，得其在搅拌时的平衡电位值(-mV)。在半对数纸上以毫升毫克)为纵坐标，电位值(-m
18、V)为横坐标绘制标准曲线。13. 2. 2 样品的测定s准确吸取20mL 13.1条下的乙隧提取液置于50mL烧杯中，挥发至于残渣，加5 mL总离子强度调节缓冲液。小心转动，振摇烧杯使残渣溶解，将烧杯内容物全部定量转移入50mL容量瓶中，原烧杯用少量水多次漂洗后，并入容量瓶中，最后加水至刻度摇匀.依法测定其电位值(-mV)，查标准幽线求得测定液中糖精销毫克数。13. 3 计算Xs=-24旦旦旦. ( 3 ) m，X芮X1000 7 GB/T 5009.28-1996 式中:X，一-样品中糖精销的含量.g/kg或g/L事叫一一测定液中糖精俐的质量，mg;V，一一乙隧提取液的体积.mLIV，-一分
19、取乙隧提取液的体积，mL;m，一一样品的质量或体积.g或mL。结果的表述:同5.4, 13. 4 干扰本法对苯甲酸俐的浓度在200-1000 mg/同时无干扰s山梨酸的浓度在50-500吨/kg.糖精俐的含量在100-150mg/kg范围内，约有3%-10%的正误差，水杨酸及对控基苯甲酸酶等对本法的测定有严重干扰.附加说明s本标准由卫生部卫生监督司提出.本标准第一法由天津市食品卫生监督检验所、辽宁省食品卫生监督检验所、武汉市卫生防疫站、浙江省卫生防疫站、四川省卫生防疫锚负责起草，第二法由卫生部食品卫生监督撞撞所负责起草，第三法由上海市食品卫生监督检验所、扬州市卫生防疫站、上海市南市区卫生防疫站、广西壮族自治区卫生防疫站、太原市卫生防疫站负责起草.本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释.8
