1、中华人民共和国国家标准GB!T 5009. 29 1996 食品中山、苯甲酸的测定方法Method for determination of sorbic 8cid and benzioc acid in foods 1 主题内容与适用范围代替GB5009.29-85 本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲酸含量的测定方法。本标准适用于酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲酸含量的测定。最低检出浓度:气相色谱法最低检出量为1赂，用F色i曾分析的样品为1g时，最低检出浓度为1 mg!kgo 第一篇气相色谱法(第-法)2 原理样品酸化后，用乙隧提取山梨酸、苯甲酸，用附氢火焰离子化检测器
2、的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。3试剂3. 1 乙醒:不含过氧化物。3. 2 石油隧z沸程3060C。3. 3 盐酸。3. 4 无水硫酸纳。3. 5 盐酸(1十1)，取100mL盐酸，加水稀释至200mL。3. 6 氯化纳酸性溶液(40g!L)，于氯化锵溶液(40g!L)中加少量盐酸。十1)酸化。3. 7 山梨酸、苯甲酸标准溶液准确称取山梨酸、苯甲酸各O.200 0 g.置于100mL容量瓶中，用石油酶乙酷(3+1)混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸或苯甲酸。3. 8 山梨酸、苯甲酸标准使用液z吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油酷-乙隧(3+1)
3、混合溶剂稀释至每毫升相当于50.100.150.200.250mg山梨酸或苯甲酸。4 仪器气相色谱仪:具有氢火焰离子化检测器。5 分析步骤5. 1 样品提取称取2.50g事先混合均匀的样品，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸。+1)酸化，用15.1o mL乙酷提取两次，每次振摇1min，将上层乙隧提取液吸入另一个25mL带塞量筒中。合并乙隧提中华人民共和国卫生部19960619批准19960901实施535 GB/T 5009. 29-1996 取液。用3mL氯他纳酸性溶液(40g/Ll洗涤两次，静止15min，用滴管将乙酷层通过无水硫酸销滤入25 mL容量瓶中.加乙隧至刻度，混匀。准确
4、吸取5mL乙酷提取液于5mL带塞刻度试管中，置40C水浴上挥干，加入2mL石油酷乙酷(3+1)混合溶剂溶解残渣，备用.5.2 色谱参考条件5. 2. 1 色谱柱z玻璃柱，内径3mm，-fX2m，内装涂以5%(m/m)DEGS+1% (m/m)H，PO.固定液的60-80目ChromosorbW A W。5.2.2 气流速度g载气为氮气.50mL/min(氮气和空气、氧气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件)。5.2.3 温度z进样口230C，检测器230C，柱温170C。5.3测定进样2L标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰高，以浓度为横坐标，相应的
5、峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进样2L样晶溶液。测得峰高与标准曲线比较定量。5.4 计算X. m , X 1 000 1叫立E100025 Vj 式中:Xj 样品中山梨酸或苯甲酸的含量.g/kg，mj一一测定用样品液中山梨酸或苯甲酸的质量，g，k一一加入石油隧-乙酷(3+1)混合溶剂的体积，mL;V2 测定时进样的体积，L，叫一样品的质量.g , 5一一测定时吸取乙酷提取液的体积，mL;25 样品乙隘提取液的总体积.mL。由测得苯甲酸的量乘以1.18.即为样品中苯甲酸销的含量。结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。5. 5 允许差相对相差;10%。5.6其他在色谱图中山梨酸保留时间为2分
6、53秒g苯甲酸保留时间为6分8秒。536 ( 1 ) GB/T 5009. 29-1996 甜甜吾耐阻卧带色谱图第二篇离效法相色谱法(第二法)6 原理样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。7试J方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馆水或同等纯度水，溶液为水溶液。7. 1 甲醇s经滤膜(0.5m)过滤。7.2 稀氨水(1十1):氨水加水等体积混合。7.3 乙酸镀溶液(0.02mol/L):称取1.54 g乙酸镀，加水至1000 mL.溶解，经滤膜(0.45m)过滤。7.4 碳酸氢锅溶液(20g/L
7、):称取2g碳酸氢锅(优级纯).1m水至100mL.振摇溶解。7. 5 苯甲酸标准储备溶液s准确称取O.100 0 g苯甲酸，加碳酸氨纳溶液(20g/L)5 mL.加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL.苯甲酸含量为1mg/mL.作为储备溶液.7.6 山梨酸标准储备溶液z准确称取0.1000 g山梨酸，加碳酸氢纳溶液(20g/L)5 mL.加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL.山梨酸含量为1mg/mL.作为储备溶液。7.7 苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液z取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0mL.放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0
8、.1mg/mL。经滤膜(0.45m)过滤(同时测定糖精销时可加GB/T5009. 28中3.4糖精销标准储备溶液。537 GB/T 5009.29-1996 8仪器高效液相色谱仪(带紫外检测器)。9 分析步骤9. 1 样品处理9. 1. 1 汽水:称取5.00-10.0g样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1十1)调pH约7.加水定容至10-20mL，经滤膜(0.45m)过滤。9.1.2 果汁类.称取5.00-10.0g样品，用氨水(1十1)调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜(0.45m)过滤。9.1.3 配制酒类z称取10.0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除
9、去乙醇，用氨水(1十1)调pH约7，加水定容至适当体积，经滤膜(0.45m)过滤。9.2 高效液相色谱参考条件9. 2. 1 色谱柱:YWG-C 4. 6 mm X 250 mm 10m不锈钢柱。9.2.2 流动相z甲醇g乙酸镀溶液(0.02mol/L)(5 95)。9.2.3 流速:1 mL/min 9.2.4 进样量:10L.9.2.5 检测器2紫外检测器，波长230m，灵敏度0.2AUFS.根据保留时间定性，外标峰面积法定量。9. 3 计算X. m, X 1 000 2二巨1000 式中:X，样品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg;m，一迸样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，mg;k一一进样体积
10、，mL;V, 样品稀释液总体积，mL;叫一一样品质量，g.结果的表述g报告算术平均值的二位有效数。9.4 允许差z相对相差10%。9.5 其他同GB/T5009. 28的5.6。注。本方法可同时测定糖精例.10 原理第三篇薄层色谱法(第三法). ( 2 ) 样品酸化后，用乙酷提取苯甲酸、山梨酸。将样品提取液浓缩，点于聚戳胶薄层板上，展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值，与标准比较定性，并可进行概略定量。11 试剂11. 1 异丙醇。11.2 正了醇。538 11. 3 石油隧g沸程为3060C。11. 4 乙隧z不含过氧化物。11. 5 氨水。11. 6 无水乙醇。11. 7 聚M
11、胶粉，200目。GB/T 5009. 29-1996 11. 8 盐酸。+1)，取100mL盐酸，加水稀释至200mL , 11. 9 氯化制酸性溶液(40g/L)，于氯化纳溶液(40g/Ll中加少量盐酸o十1)酸化。11. 10 展开剂。11.10.1 正丁醇十氨水+无水乙醇(7十l十2)。11.10.2 异丙醇+氨水+无水乙醇(7+1+2)。11. 11 山梨酸标准溶液z准确称取0.2000 g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸。11. 12 苯甲酸标准溶液z准确称取O.200 0 g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶
12、中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0mg苯甲酸。11. 13显色剂澳甲盼紫乙醇(50%)溶液(0.4g/Ll.用氢氧化纳溶液(4g/Ll调至pH=8，12仪器12. 1 吹风机。12.2 层析缸。12.3 玻璃板dOcmX18cm，12.4 微量注射器，10L.100L，12.5 喷雾器。13 操作方法13. 1 样品提取称取2.50g事先混合均匀的样品，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸。十1)酸化，用15.10 mL乙隧提取两次，每次振摇1min，将上层酷提取液吸入另一个25mL带塞量筒中，合并乙酷提取液。用3时，氯化纳酸性溶液(40g/L)洗涤两次，静止15min，用滴管将乙
13、酷层通过无水硫酸纳滤入25 mL容量瓶中。加乙酷至J度，1，昆匀。吸取10.0mL乙酷提取液分两次置于10mL带塞离心管中，在约40C的水浴上挥干，加入0.10mL乙醇溶解残渣，备用。13. 2 测定13. 2. 1 聚殷殷粉板的制备z称取1.6g聚酸胶粉，加0.4g可溶性淀粉，加约7mL水，研磨3-.Smin，立即倒入涂布器内制成10cmX18 cm、厚度0.3mm的薄层板两块，室温干燥后，于8WC干燥1h.取出，置于干燥器中保存。13. 2. 2 点样2在薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器点1L.2L样品液，同时各点1L、2L山梨酸、苯甲酸标准溶液。13. 2. 3 展开与显色z将点样
14、后的薄层板放入预先盛有展开剂01.10. 1或11.10. 2)的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm，取出捧干，喷显色剂，斑点成黄色，背景为蓝色。样品中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0.82.0.73)。13.3计算x , m5 1000 . -二-810VC 6 X X ,/ X 1 000 25 V5 . ( 3 ) 539 GB/T 5009. 29-1996 式中，X，一一样晶中苯甲酸或山梨酸的含量.g/kg，m; 测定用样品液中苯甲酸或山梨酸的质量，mg;k 加入乙醇的体积，mL;V，一测定时点样的体积，mL;叫一一样品质量
15、.g，10一测定时吸取乙隧提取液的体积，mL;25 样品乙隧提取液总体积，mLo注2本方法还可以同时测定果酱、果汁中的糖精.14 棚酸、跚砂14. 1 试剂第四篇臻用防腐剂定性试验(第四法)14. 1. 1 盐酸(1+1)，量取盐酸100mL.加水稀释至200mL。14. 1. 2 碳酸锅溶液(40g/L)。14.1.3 氢氧化销溶液(4g/L):称取2g氢氧化锅，溶于水并稀释至500mL。14. 1. 4 姜黄试纸g称取20g姜黄粉末，用冷水浸溃4次，每次各100mL.除去水溶性物质后，残渣在100C干燥，加100mL乙醇，浸琐数日，过滤。取1cmX8 cm滤纸条，浸入溶液中，取出，于空气中
16、干燥，贮于玻璃瓶中。14.2 分析步骤14.2.1 样品处理称取3-5g固体样品，加碳酸纳溶液(40g/L)充分湿润后，于小火上烘干、炭化后再置高温炉中灰化。量取10-20mL液体样品，加碳酸纳溶液(40g/L)至呈碱性后，置水浴上蒸干、炭化后再置高温炉中灰化。14.2. 2 定性试验14. 2. 2. 1 姜黄试纸法z取一部分灰分，滴加少量水与盐酸。十1)至微酸性，边滴边搅拌，使残渣溶解，微温后过滤.将姜黄试纸浸入滤液中，取出试纸置表面皿上，于60-70C干燥，如有砌酸、棚砂存在时，试纸显红色或橙红色，在其变色部分熏以氨即转为绿黑色.14.2.2.2 焰色反应取灰分置于增塌中，加硫酸数i商及
17、乙醇数漓，直接点火，棚酸或棚砂存在时，火焰呈绿色。15 水杨酸15. 1 试剂15. 1. 1 三氯化铁溶液(10g/L)。15.1.2 亚硝酸饵溶液(100g/L)。15.1.3 乙酸(50%)。15.1.4 硫酸铜溶液(100g/L)。称取10g硫酸铜(CuS， 5H2).加水溶解至100mL。15.2 分析步骤15.2.1 样品提取按GB/T5009. 28中9.1操作，将乙酷提取液蒸干后，残渣备用。15. 2. 2 定性试验15. 2. 2. 1 三氯化铁法g残渣加1-2滴三氯化铁溶液(10g/L).水杨酸存在时显紫董色。15. 2. 2. 2 确证试验z溶解残渣于少量热水中，冷后加4-5滴亚硝酸御溶液(100g/L) .4-5滴乙酸540 G/T 5009. 29-1996 (50%)及1滴硫酸铜溶液(100g/L)，混匀，煮沸O.5 h，放置片刻，水杨酸存在时呈血红色(苯甲酸不显色)。附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准第一法由卫生部食品卫生监督检验所负责起草，第二法由天津食品卫生监督检验所、辽宁省食品卫生监督检验所、武汉市卫生防疫站、浙江省卫生防疫站、四川省卫生防疫站负责起草;第三、四法由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。;j 41
