1、ICS 67.040 C 53 国中华人民共和国国家标准食c 口口中GB/T 5009.93-2003 代替GB/T12399-1996，部分代替GB13105一1991E西的测定Determination of selenium in foods 2003-08-门发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员GB/T 5009.93-2003 前言本标准对应于AOAC3. 1023. 107(食品中晒的测定以1984年第14版)，本标准与AOAC3.102 3. 107的一致性程度为非等效。本标准代替GB/T12399-1996(食物中晒的测定和GB13105一
2、1991(食品中晒限量卫生标准中的测定方法。本标准与GB/T12399-1996相比主要修改如下:一一将GB13105-1991中测定方法内容纳入本标准中;一按GB/T20001. 4一2001(标准编写规则第4部分:化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准第一法由北京市卫生防疫站、卫生部食品卫生监督检验所负责起草叶七京进口食品卫生监督检验所参加起草。本标准第一法主要起草人毛红、杨惠芬、田佩瑶、阁军、黄流生。本标准第二法由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。本标准第二法主要起草人:王光亚、周瑞华、王淮洲、杨光听、韩驰。原标准于1996年发
3、布，本次为第一次修订。663 GB/T 5009.93-2003 引画耐是人体必需的微量元素，但若摄入过多会对人体健康造成危害，为了控制人体砸的摄入量，制定了GB13105-1991(食品中晒限量卫生标准)，并配套研制了国家标准GB/T12399-1996(食物中晒的测定方法儿鉴于1996版标准中测定方法操作繁琐，所用试剂2，3一二氨基荼(2，3-diaminonaphthale肘，简称DAN)有一定毒性、且需进口，故本次修订中增加了快速、简便、准确度、精密度好的氢化物原子荧光光谱法，作为第二法。664 GB/T 5009.93-2003 食品中晒的测定1 范围本标准规定了用荧光法和氢化物原子
4、荧光光谱法测定食品中砸的方法。本标准适用于各类食品中晒的测定。第一法检出限为3鸣，线性范围为0.01gO.2g;第二法为0.5ng/mL，线性范围为ong/mL 400 ng/mL. 第一法氢化物原子荧光光谱法2 原理试样经酸加热消化后，在6mol/L盐酸(HCD介质中，将试样中的六价砸还原成四价晒，用删氢化锅(NaBH)或棚氢化御(KBH，)作还原剂，将四价晒在盐酸介质中还原成晒化氢(SeHz)，由载气(氢气)带入原子化器中进行原子化，在石西特制空心阴极灯照射下，基态晒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与晒含量成正比。与标准系列比较定量。3试3)lJ3,
5、 1 硝酸(优级纯)。3.2 高氯酸(优级纯)。3.3 盐酸(优级纯)。3.4 混合酸z硝酸十高氯酸(4十1)混合酸。3.5 氢氧化销(优级纯)。3.6 唰氢化纳溶液(8g/Ll ，称取8.0g跚氧化纳(NaBH，)，溶于氢氧化纳溶液(5g/Ll中，然后定容至1 000 mL。3.7 铁氟化饵(100g/L) ，称取10.0g铁氨化饵(K3Fe(CN)，)，溶于100mL水中，11匀。3.8 砸标准储备液=精确称取100.0mg晒(光谱纯)，溶于少量硝酸中，加2mL高氯酸，置沸水浴中加热3h4 h冷却后再加8.4mL盐酸，再置沸水浴中煮2min，准确稀释至1000 mL，其盐酸浓度为0.1 m
6、ol/L，此储备液浓度为每毫升相当于100问砸。3.9 晒标准应用液z取100g/mL砸标准储备液1.0 mL，定容至100mL，此应用液浓度为1g/mL.4 仪器4.1 原子荧光光度计。4.2 电热板。4.3 自动控温消化炉。5 分析步骤5.1 试样制备5. 1. 1 粮食试样用水洗三次，于60C烘干，用不锈钢磨粉碎，储于塑料瓶内，备用。5. 1. 2 蔬菜及其他植物性食品取可食部，用水洗净后用纱布吸去水滴，打成匀浆后备用。5. 1. 3 称取O.5 g2. 0 g试样于150mL高筒烧杯内，加10.0mL 混合酸及几粒玻璃珠，盖上表面皿665 GB/T 5009.93-2003 冷消化过夜
7、。次日于电热板上加热，并及时补加混酸。当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2mL左右，切不可蒸干。冷却，再加5mL 6 mol/L盐酸，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有自烟出现，以完全将六价晒还原成囚价晒。冷却，转移定容至50mL容量瓶中。同时做空白试验。5. 1. 4 吸取10mL试样消化液于15mL离心管中，加浓盐酸2mL，铁氟化饵溶液1mL，混匀待测。5.2 标准曲线的配制分别取O.0 , O. 1 , O. 2 , O. 3 , O. 4 , O. 5 mL标准应用液于15mL离心管中用去离子水定容至10mL, 再分别加浓盐酸2mL，铁氧化梆1mL，j昆匀，制成标准工作
8、曲线。5. 3 il!定5.3.1 仪器参考条件:负高压:340V;灯电流:100mA;原子化温度:8000C;炉高:8mm;载气流速2500 mL/min;屏蔽气流速:1 000 mL/min;测量方式标准曲线法;读数方式:峰面积;延迟时间:1 S;读数时间:15的加液时间:8 S;进样体积:2mL。5.3.2 测定根据实验情况任选以下一种方法。5.3.2.1 浓度测定方式测量.设定好仪器最佳条件，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10min20 min 后开始测量。连续用标准系列的零管进样，待读数稳定之后，转入标准系列测量，绘制标准曲线。转入试样测量，分别测定试样空白和试样消化液，每测不同的试
9、样前都应清洗进样器。试样测定结果按5.4计算。5.3.2.2 仪器自动计算结果方式测量2设定好仪器最佳条件，在试样参数画面，输人以下参数试样质量(g或mU，稀释体积(mL)，并选择结果的浓度单位，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10min 20 min后开始测量。连续用标准系列的零管进样，待读数稳定之后，转入标准系列测量，绘制标准曲线。在转人试样测定之前，再进入空白值测量状态，用试样空白消化液进样，让仪器取其均值作为扣底的空白值。随后即可依次测定试样。测定完毕后，选择打印报告即可将测定结果自动打印。5.4 结果计算见式。)。式中z(c-co) XVX 1000 X( 1 ) m X 1 000
10、X 1 000 X 试样中晒的含量，单位为毫克每千克(或毫克每升)mg/kg(或mg/UJ;C一一试样消化液测定浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); Co一一试样空白消化液测定浓度，单位为纳克每毫升(ng/mU;m一一试样质量(体积)，单位为克(或毫升)g(mL汀，V一一试样消化液总体积，单位为毫升(mL)。计算结果表示到小数点后两位。6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第二法荧光法7 原理将试样用混合酸消化，使晒化合物氧化为无机晒Se4+，在酸性条件下Se4+与2，3二氨基茶(2，3Daminonaphthalene，缩写为DAN)反应生成4
11、，5苯并主晒脑(4 , 5-Benzo piaselenol)，然后用环己烧萃取。在激发光波长为376nm，发射光波长为520nm条件下测定荧光强度，从而计算出试样中砸的含量。666 GB/T 5009.93-2003 8 试押j8.1 晒标准溶液准确称取元素牺(光谱纯)100.0mg，溶于少量浓硝酸中，加人2mL高氯酸(70%72%)，至沸水浴中加热3h4 h，冷却后加入8.4mL盐酸(盐酸浓度为0.1mol/L)。再置沸水浴中煮2min。准确稀释至1000mL，此为储备液(晒含量100g/mU。应用时用0.1mol/L盐酸将储备液稀释至每毫升含0.5吨砸。于冰箱内保存。8.2 DANO g
12、/U试剂此试剂在暗室内配制。称取DAN(纯度95%98%)200mg于一带盖锥形瓶中，加入O.1 mol/L 盐酸200mL，振摇约15min使其全部溶解。加入约40mL环己饶，继续振荡5min将此液倒人塞有玻璃棉(或脱脂棉)的分液漏斗中，待分层后滤去环己;皖层，收集DAN溶液层，反复用环己炕纯化直至环己烧中荧光降至最低时为止(约纯化5次6次)。将纯化后的DAN溶液储于棕色瓶中，加入约1cm 厚的环己烧覆盖表层，至冰箱内保存。必要时在使用前再以环己烧纯化一次。警告z此试押l有一定毒性，使用本试剂的人员应有正规实验室工作经验。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关条例的规定。8
13、.3 混合酸液将硝酸及高氯酸(70%72%)按2十1体和、混合。8.4 去砸硫酸取浓硫酸200mL加于200mL水中，再加入48%氢澳酸30mL，混匀，至沙浴上加热至出现浓白烟，此时体积应为200mL 8.5 EDTA混合液a) O. 2 mol/L EDT A:称取EDTA二锅37g，加水并加热至完全溶解，冷却后稀释至500mL; b) 100 g/L盐酸泾胶溶液称取10g盐酸短胶溶于水中，稀释至100mL; c) 0.2 g/L甲酣红指示剂=称取甲酣红50mg溶于少量水中，加氨水0+1)1滴，待完全溶解后加水稀释至250mL。将上述a)及b)液各取50mL，加c)液5mL，加水稀释至1L，
14、混匀。8.6 氨水(氨水+水二1+1)。8.7 浓盐酸(相对密度1.18)。8.8 环己烧市售品需先测试有无荧光杂质，必要时重蒸后使用，用过的环己烧可回收，重蒸后再使用。8.9 10%盐酸溶液z取10mL浓盐酸加90mL水。9 仪器荧光分光光度计。10 分析步骤10.1 试样处理10. 1. 1 粮食试样用水洗三次，至60C烤箱中烘去表面水分，以不锈钢磨磨成粉状，储于塑料瓶内，放一小包律脑精，盖紧瓶塞保存，备用。10.1.2 蔬菜及其他植物性食晶取可食部，用蒸馆水冲洗三次后，用纱布吸去水滴，用不锈钢刀切碎，取一定量试样在鼓风烤箱中于60C烤干，称量，计算水分。磨成粉保存，备用。667 GB/T
15、 5009.93-2003 计算时应折合成鲜样质量。10.2 试样的消化称含牺量约为0.01g-0.5月的粮食或蔬菜及动物性试样0.5g-2. 0 g于磨口锥形瓶内，加10 mL 5%去砸硫酸，待试样湿润后，再加20mL混合酸液放置过夜，次日置沙浴上逐渐加热。当剧烈反应发生后，溶液呈元色，继续加热至白烟产生，此时溶液逐渐变成淡黄色，即达终点。某些蔬菜试样消化后出现浑浊，以致难以确定终点，这时可注意瓶内出现滚滚白烟，此刻立即取下，溶液冷却后又变为元色。有些含晒较高的蔬菜含有较多的Se6+，需要在消化完成后再加10mL 10%盐酸，继续加热，使再回终点，以完全还原Se6+为Se飞否则结果将偏低。1
16、0.3 测定上述消化后的试样溶液加入20mL EDTA混合液，用氨水(1十1)及盐酸调至淡红橙色(pH1.5-2.0)。以下步骤在暗室操作2加DAN试剂3mL，混匀后，置沸水浴中加热5min，取出冷却后，加环己烧3.0 mL，振摇4min，将全部溶液移入分液漏斗，待分层后弃去水层，小心将环己烧层由分液漏斗上口倾人带盖试管中，勿使环己烧中混入水漓，于荧光分光光度计上用激发光波长376nm、发射光波长520nm 测定羞砸脑的荧光强度。10.4 面标准曲线绘制准确量取标准晒溶液(0.05g/mL)O.0 , 0. 2 ,1. 0 , 2. 0及4.0mL(相当于0.00，01，05，0.10及0.20月晒)，加水至5mL后，按试样测定步骤同时进行测定。当晒含量在0.5月以下时荧光强度与晒含量呈线性关系，在常规测定试样时，每次只需做试剂空臼与试样晒含量相近的标准管(双份)即可。10.5 结果计算见式(2)。.F2 -F, x=一一一一一一- 0 ( 2 ) Ft-Fo m 式中:X 试样中晒含量，单位为微克每克(g/g); mj 标准管中晒的质量，单位为微克(g); F j 标准晒荧光读数gF2一一-试样荧光读数;Fo 空白管荧光读数;m 试样质量，单位为克(g)。计算结果表示到小数点后两位。门精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。668
