1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1164.3-2006 牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验操作规程Protocol of ELISA for infectious bovine rhinotracheitis 2006-01-26发布060712000122 2006-08-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检瘦总局中华人民共和国出入境检验检疫行业标准牛传染性鼻气管炎酶联免症服附试验操作规程SN;T 1164.3-2006 祷中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本8
2、80X 1230 1;16 印张0.5字数8千字2006年4月第一版2006年4月第一次印刷印数12000祷书号:155066.2-16741 定价6.00元前言SN/T 1164分为四部分:一牛传染性鼻气管炎病毒分离操作规程;一一牛传染性鼻气管炎微量血清中和试验操作规程;一一牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验操作规程F一一牛传染性鼻气管炎病毒检测鉴定方法PCR法。本部分为SN/T1164的第3部分。本部分的附录A为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位:中华人民共和国云南出入境检验检疫局。本部分主要起草人:肖荣海、周晓黎、徐维加、杨雁雄、应雪松。本部分系首次发
3、布的出入境检验检疫行业标准。SN/T 1164.3-2006 I 1 范围牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验操作规程SN/T 1164的本部分规定了牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验方法。本部分适用于牛传染性鼻气管炎抗体的检测。2 规范性引用文件SN/T门64.3-2006下列文件中的条款通过SN/T1164的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 缩略语
4、下列缩略语适用于SN/T1164的本部分。3. 1 IBR 牛传染性鼻气管炎infectious bovine rhinotracheitis 3.2 ELISA 酶联免瘟眼附试验enzyme-Iinked immunosorbent幽say4 试剂和材料4.1 包被抗原:由指定单位提供。4.2 血清:标准强阳性、阴性血清，由指定单位提供。4.3 被检血清:牛血清560C5rc灭活30min.羊血清580C590C灭活30min。4.4 酶标记抗抗体:由指定单位提供。4.5 洛液z抗原包被缓冲液、封闭液、洗涤液、底物溶液和终止液，见附录A。4.6 水:符合GB/T6682分析实验室二级水规格。
5、5 器械和设备5. 1 酶标仪。5.2 聚苯乙烯微量反应板(96孔酶标板)。5.3 单孔道、多孔道可调微量移液器(1L、50L、100L、1000L)、微量滴头。5.4 吸管(5mL、10mL)。5.5 刻度最筒(100mL、1000 mL)。5.6 试剂瓶(50mL、100mL、500mL)。5. 7 洗涤瓶(500L)。SN/T 1164.3-2006 5.8 3rC恒温箱。6 操作步骤6. 1 包被酶标板:按照提供的包被抗原所附说明书要求，用包被液稀释抗原，包被96孔酶标板，每孔孔100L。加样完毕后放370C温箱作用1 h，按6.2洗涤。6.5 加酶标记抗抗体:每孔加工作浓度的酶标记抗
6、抗体100L，置370C温度作用7 结果判定7. 1 判定标准:用酶标仪在波长450nm下测定00值，按式(1)计算S/N值:S/ N =被检血清平均00值/标准阴性血清平均00值 ( 1 ) 一-1.50S/N2.。一-S/N2.0判为7.2 凡可疑被检血清2 SN/T门64.3-2006附录A(规范性附录)溶液配制A.1 包被液:O. 05 moI/L pH值9.6碳酸盐缓冲液用使内周川箱J冰HQ hC4 、2L1Ja丰J蜘例置氢销后酸酸解碳碳水溶1. 46 g 0.97 g(或Na2C03 10H20 1. 2 g) 500 mL A.2 洗涤液:0.01mol/L pH值7.4PBS
7、O. 05 % Tween-20 氯化铀(NaCD磷酸二氢拥(KH2P04)磷酸氢二铀(Na2HP04 12H2) 氯化饵(KCDTween-20 水榕解后置于4.C冰箱备用。A.3 稀释液:洗涤液脱脂奶粉溶解后置于4.C冰箱备用。A.4 封闭液z三握甲基氨基甲烧(Tris)氯化铀(NaCD乙二胶四乙酸二铀(EDTA)健康马血清4 g O. 1 g 1. 45 g O. 1 g 0.25 mL 500 mL 100 mL 1 g 6.06 g 8.80 g 0.37 g 30 mL 加元离子水至1 000 mL 用1mol/L盐酸调pH值至7.4，临用前加入吐温-20(Tween-20)，使终
8、浓度达0.1%。A.5 底物液:A.5.1 乙酸-拧攘酸缓冲液(pH值6.0)乙酸铀(A液): 乙酸铀水榕解后置于4.C冰箱备用。拧攘酸(B液): 拧橡酸1. 64 g 200 mL 2. 1 g OON|的.S二回ZmSN/T门64.3-2006水榕解后置于40C冰箱备用。配制:取B液(约2mL)调A液pH值至6.0，置于40C冰箱备用。A.5.2 TMB榕液:TMB 100 mL 350 mg 100 mL 9.7 mL 300L 7L 甲醇加温溶解后于暗盒中存室温。A.5.3 底物液z临用前配制pH6.0乙酸E拧攘酸缓冲液(37C)TMB溶液双氧水(H202) 22.2 mL 终止液:2mol/L硫酸浓硫酸水A.6 侵权必究书号:155066 2-16741 定价:6.00元导版权专有177.8 mL 1164.3-2006
