1、GB/T 18932.17-2003 前言GB/T 18932的本部分修改采用加拿大标准ACC-056-V2.0(蜂蜜中磺胶残留量测定方法高效液相色谱质谱测定法)，修改的主要内容是2一一测定品种有所调整;增加了苯磺酸型阳离子交换柱和OasisHLB柱净化步骤;使用的液相色谱柱和流动相不同s一一单囚极杆质i曹检测器换成串联囚极杆质谱检测器。本部分的附录A和附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本部分主要起草人z庞国芳、曹彦忠、张进杰、贸光群、范春林、李学民、刘永明、石玉秋。本部
2、分系首次发布的国家标准。1 范围蜂蜜中16种磺肢残留量的测定方法液相色i普串联质谱法GB/T 18932.17-2003 GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中16种磺胶残留量液相色谱串联质谱测定方法。本部分适用于蜂蜜中16种磺胶残留量的测定。本部分的方法检出限:磺胶甲唾二嗖为1.0g/kg;磺胶醋酸、磺胶略舵、磺胶毗院、磺胶二甲异略略、磺胶甲基嘻院、磺胶氯隧嗦、磺胶-6-甲氧嘻晓、磺胶邻二甲氧蜻院、磺胶甲基异略略为2.。g/kg;磺胶喽嗖、磺胶甲氧由主嚓、磺胶间工甲氧略院为4.0g/kg;磺胶甲氧喘院、磺胶二甲略院为8.0g/kg;磺胶苯毗嗖为12.0g/kg，2 规范性引用文件下列文件中
3、的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 6379测试方法的精密度通过实验室间实验确定标准测试方法的重复性和再现性(GB/T 6379-1986 ,neq IS 5725 ,1981) GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-1992 , neq IS 3696 ;1 987) 3 原理蜂蜜中磺胶类药物残留用磷酸溶液(pH2)提取，过滤后
4、，经阳离子交换柱和OasisHLB或相当的固相萃取柱净化，用甲醇洗脱并蒸干，残渣用乙腊十乙酸钱溶液(0.1mol/L)溶解。样品溶液供液相色i普串联质谱仪测定，外标法定量。4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1 甲醇t色谱纯。4.2 乙睛:色谱纯。4.3 磷酸:优级纯。4.4 庚炕磺酸纳(C，HI5S，Na.H20)，色谱纯。4.5 乙酸馁。4.6 磷酸二氢御z优级纯。4.7 磷酸氢二饵:优级纯。4.8 磷酸溶液，pH二2，1 000 mL水中加入1mL磷酸(4.3)，在pH计上再滴加磷酸以调节济液pH2。4.9 磷酸盐缓冲溶液，0.2 mol
5、lL，pH8，分别称取1.05 g磷酸二氢梆(4.6)和33.46g磷酸氢二御(4.7)，用水溶解，定容至1000mL 4.10 庚烧磺酸锅溶液，0.5mol/L。称取11g庚皖磺酸纳(4.4)，用水溶解，定容至100mL。GB/T 18932.17-2003 4.11 阳离子交换柱=苯磺酸型.500mg.3 mL，用前分别用5mL甲醇和10mL水处理。保持柱体湿润。4. 12 Oasis HLB柱或相当者，60mg.3 mL用前分别用3mL甲醇和6mL水处理。保持柱体湿润。4.13 磺胶醋酸、磺胶甲嚓二略、磺胶二甲异略略、磺胶氯昵嚓、磺胶略晓、磺胶甲基异略略、磺胶唾睡、磺胶6甲氧略晓、磺胶甲
6、基喀院、磺胶邻二甲氧瞻咬、磺胶咣院、磺胶对甲氧暗院、磺胶甲氧隧嚓、磺胶二甲略舵、磺胶苯咣略、磺胶间二甲氧喀咬标准物质z纯度二三99%。4.14 16种磺胶标准储备溶液，0.1mg/mL。准确称取适量的每种磺胶标准物质，用甲醇配成0.1 mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4C保存可使用两个月。4.15 磺胶混合标准工作溶液根据每种磺胶的灵敏度和仪器线性范围，用空白样品提取液配成不同浓度(ng/mL)的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液在4C保存，可使用一周。5 仪器5.1 液相色谱-串联质谱仪2配有电喷雾离子源。5.2 困相萃取真空装置。5.3 旋转蒸发器。5.4 液体混匀器。5.5 分析天平=
7、感量。.1mg和0.01g各一台。5.6 真空泵。5.7 移液器，1mL.2 mL, 5.8 鸡心瓶，150mL。5.9 样品瓶，2mL，带聚四氟乙烯旋盖。5.10 玻璃贮液器，50mL。5.11 pH计z测量精度土0.02。6 试样制备与保存6.1 试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60C的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。6.2 试样的保存将试样于常温下保存。7 ii!1定步骤7.1 提取称取5g试样，精确至0.01g。置于150mL三角瓶中，加入25m
8、L磷酸溶液(4.剖，于液体混匀器上快速混匀1min，使试样完全溶解。7.2 净化将塞有玻璃棉塞的玻璃贮液器连到苯磺酸型阳离子交换柱(4.11)上，把样液(7.1)倒入玻璃贮液器中，在减压情况下使样液以小于等于3mL/min的流速通过苯磺酸型阳离子交换柱，待样液完全流出后，分别用5mL磷酸溶液和5mL水洗柱，弃去全部流出液。最后用40mL磷酸盐缓冲溶液(4.9)洗脱，收集洗脱液于100时，平底烧瓶中。在洗脱液中加入1.5 mL庚烧磺酸锅溶液(4.10).然后用磷酸(4.3)调至pH=6。按上述方法将调好pH的洗脱液过OasisHLB或相当的固相萃取柱(4.12).调节流速小于等于GB/T 189
9、32.17-2003 3 mL/min.待洗脱液完全流出后，再用3mL水洗柱，弃去全部流出液。在65kPa负压下，减压抽干5 miny最后用10mL甲醇(4.1)洗税，洗脱液收集于150mL鸡心瓶中。用旋转蒸发器于4S.C水浴中减压蒸发至干。准确加入1.0 mL流动相溶解残渣，供液相色谱串联质谱仪测定。7.3 色谱测定7.3.1 液相色谱条件a) 色谱柱，Lichrospher 100 RP-18 5m 250 mmX4.6 mm(i.d)或相当者$b) 流动相z乙腊+乙酸镀溶液(0.01mol!L) (12+88) ; c) 流速:0.8mL/min; d) 柱温，35C;e) 进样量:40
10、L;f) 分流比:1 3. 7.3.2 质谱条件a) 离子源z电喷雾离子源gb) 扫描方式z正离子扫描gd 检测方式s多反应检测sd) 电喷雾电压，5500 V; 的雾化气压力，0.076MPa; f) 气帘气压力，0.069MPa; g) 辅助气流速6L/min; h) 离子源温度:350C;i) 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表1。表116种横肢的定性离子对、定量商子对、碰撞气能量和去簇电压名称定性离子对/(m/z)定量离子对/(m/z)碰撞气能量/V2151156 J8 磺胶醋酷215/108 215/156 28 271/156 磺胶甲喔二嗖271/107 20 27
11、1/156 32 2681156 20 磺胶二甲异嗯瞠268/156 268/113 23 285/156 23 磺胶氯盹嗦285/156 285/108 35 251/156 磺胶略院251/185 23 251/156 27 254/156 23 磺睽甲基异略略254/147 254/156 22 256/156 22 磺肢唾哇256/107 2561156 32 281/156 25 磺胶6甲氧噎咬28 1/215 281/156 2:; 去簇电压!v40 45 50 50 45 45 50 50 55 50 50 45 55 47 65 50 GB/T 18932.17-2003 表1
12、(续)名称定性离于对!(m;)定量离于对/(m!zl碰撞气能量!V去簇电压!V265/156 25 50 磺胶甲基瞎院265/172 265 /156 24 60 311/156 31 70 E声眩邻工甲氧喀嚓311/156 3111108 35 55 250/156 25 50 磺胶毗睫250/184 250/156 25 60 281/156 25 65 磺胶对甲氧嘻吱281!156 281!215 25 50 281 /156 25 6 磺胶甲氧啦嚓28 1/215 2811156 25 50 卜一-一一一一一号279/156 22 55 磺胶一甲啼咬279/156 279/204 20
13、 60 .115 /1 56 32 55 磺胶苯。此略315 /156 315/1 60 35 55 31j /j56 31 70 磺胶间二甲氧畸呢311/218 311 /1 56 27 70 7.3.3 液相色i曹串联质谱测定用混合标准工作溶液(4.15)分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，佯品榕液中16种磺胶的响应值均应在仪器测定的线性范罔内。在上述色谱条作和质谱条件下.16种磺胶的参考保留时间见表2016种磺胶的标准总离子流图参见附录A中的图A.l、图A.2，表216种横肢参考保留时间药物名称保留时间/min药
14、物名称保留时间Im.n磺胶自古陪t一_j_2.61 磺胶甲基睹院9.93 磺版甲嗤&咀4.51 磺胶邻二甲氧晴堤11. 29 横肢一磺号肢二股氯甲帆异盹呼噪吨一一一一一-L|-4一529一0l一二!I 磺胶毗院11. 62 磺胶对甲氧嗜院12.66 6.54 磺胶甲氧盹嗦17.28 磺胶甲车掉的?8.41 磺胶二甲嗜睫17.95 磺肢哩盹9.13 E盖脑苯5比瞠22.29 磺胶6甲氧唔啧9.48 磺腹间二甲氧唔昵川7_j 7.4 平行试验按以t步骤.X、Jliil试样进行平行试验测定。7.5 空白试验除，1称取样品外，均按上述y罪进行。GBjT 18932.17-2003 8 结果计算试样中每
15、种磺胶残留量利用数据处理系统计算戎按式(1)计算.x c主.1000 m 1000 .( 1) 式中zX 试样中被测组分残留量.单位为微克每千克(l1g/kg); 一一从标准工作曲线得到的被视l组分榕液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mLl; V 试样溶液定容体积，单位为毫升(mLl;m一一试样溶液所代表试样的质量.单位为克(g)。注计算结果应扣除空白值。9 精密度本部分的精密度数据是按照GB/T6379的规定确定的，其重复性和l再现性的值足以95%的可信度来汁算。9.1 重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(川，蜂蜜中16种磺胶含量范围及重复性方程见表3。如果差
16、值超过重复性限(川，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，蜂蜜中16种碳胶的含量范围及再现性方程见表3，表3含量范围及重复性和再限性方程名称!含量范围八月/陆)I 重复性限r再现性限H磺胶醋酷磺胶甲唾二哇磺胶二甲异略略磺肢氯何生嗦磺胶略睫磺胶甲基异略瞠磺胶唾瞠磺胶6甲氧嘻睫磺胶甲基暗院磺胶邻二甲氧嘈昵2. O50. 0 2. 050. 0 2. O50. 0 2.0-50.0 19 r=O. 9358 !g m-l. 0259 I 19 R=O. 153 !:J Ig m。心361 一一一一-一一一-19
17、 r= 1. 084 1 19 m一1.0704I IgR.- 1. 07441gm 0.676 5 !g r=O. 8428 19 m-O, 876 0 I 19 R=. 7392 19 m 0. 5188 19 , =0.970 51gm- 1. 0008 R=O.1414 m-!.Q.2000 2. O50.0 I 19 r= 12712 19 m- 1. 2329 i Jg J? =O. S,jO 1 Ig lW.- l). 5.19 J 巳王刊19zt;731;1-fE098l巴T739:2. O50. () ! Ig r= 1. 093 1 Ig m- 1. 1693 I Ig R
18、 = l. Og ?l 0 Ig m -0.85斗82Ig r= 1. 153 llg rn-J 267 f日u-o.比819 )11 ._(). 510 2 磺胶毗院2.0-50.0 i 19 =0.8943 19 m-O. El!lO I 19 -=0.82:) 2 19 m ). (1 I磺胶对甲氧唔呢8. O2.0 I 19 r 1. 07号519 m一_07.:l- 以1-1.;)(- .t Ig川-o. R;n 6 广运面王画正一tI;11只r二丁石70 19 YT工7石了。丁l认!-i :2 D I以川().812 (J 1正函E寸丁立正7丁19r -o 1gm-l.0612一l
19、jLoUllLZ-iu一磺肢苯目比瞠12. O300. 0 I 19 r 1. 142 1 19 m- 1. 225 8 I 19 R气1.05121g m-O.805.1 磺胶间二甲氧唔陡4.0-100.0 I Ig r=O. 8598 19 m-O. 8796 Ig R=(). 976 () Ig 711-0.6733 注册为两次测定值的平均值。GB/T 18932.17-2003 附录A资料性附录)标准物质总离子流图A.1 11种磺胶标准物质总离子流图，见图A.l.12.66 6.4e4 6.0e4 5.0e4 17.28 4.0e4 3. 0e4 5.20 躏朦醋醺2.61min 躏脏
20、用事二唾4.54min 躏眩嘈睫5.20mm 磺眩扭幢幢6.54mm 躏胶甲基异睡唾8.41min 躏眩甲基嘈睫9, 93ml 确胶则比睫lL62min 磺眩对甲氧嘈睫12.66mm 2.0,4 , 1-.,-. 111 11 11 躏眩甲氧瞄喃17. 28min 醺踱苯眶唾22. 29min 1.004 f. 1 11 I , 11 11 11 11 11 叩阳、11硝眩间二甲氧嘈睫28. 97min O.O、!l，1l(W，).气、丁、=Ilmin 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 回A.1A.2 5种磺胶标准物质总离子流图，见图A.2.5.
21、5e4 5.0e4 4.0e4 3.0e4 2.0e4 1. 0e4 。.09.13 11. 29 11.由17.95 18.19 10 12 14 16 18 20 图A.2耐肢二甲异咂瞠(.91mm 确应喔哩9. 13mm 磁脏t甲氧嘈幢9. 48mm 磺腹部二甲. 嘈睫口回nun蜻膛二甲嘈睫17. 95min tlmin 附录B(资料性附录)回收率本方法中16种磺胶添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表Il.L表B.1药物名称添加浓度/(昭/kg)2.0 5. 磺胶醋酷10.0 50.0 1. 0 2.5 磺胶甲唾二嗖5.0 25.0 2.0 :J, O 磺胶嘻院10.0 50.0 2.
22、0 5.0 磺胶氯盹嗦10.0 50.0 2.0 5.0 磺胶甲基异曙瞠10.0 50.0 z.o 5.0 磺肢甲基暗院10.0 50.0 2. 5.0 磺胶口比院10.0 50.0 GB/T 18932.17-2003 平均回收率/(%)77.1 77.7 77.3 78.7 78.7 80.0 79.3 77.9 84.7 86.6 86.4 77.5 82.1 85.7 77.2 78.6 83.0 87.8 97.8 80.5 8 1. 8 83.3 89.4 81. 6 87.9 85.0 84.1 77.9 GB/T 18932.17-2003 表B.1(续)药物名称添加浓度/(g
23、/kgJ平均回收率/(%J8.0 91. 3 磺胶对甲氧略睫20.0 84.2 40.0 88.9 200.0 76.4 4.0 89.8 磺胶甲氧昵嚓10.0 92.0 20.0 80.2 100.0 75.2 12.0 85.0 磺胶苯毗瞠30.0 83.8 60.0 86.4 300.0 77.6 4.0 90.4 磺黯i司二甲氧嘈哽10.0 81. 9 20.0 89.8 100.0 74.4 2.0 90.2 磺胶二甲异同E嗖5.0 75.5 10.0 76.9 50.0 87.5 2.0 95.6 磺胶6甲氧嘈睫5.0 88.9 10.0 94.8 50.0 102.5 4.0 85.3 磺胶噎瞠10.0 70.9 20.0 76.5 100.0 86.7 2.0 97.4 5.0 86.5 磺胶邻二甲氧嘻院10.0 92.1 50.0 95.4 8.0 95.0 磺胶二甲嘻跪20.0 82.4 40.0 92.4 2000 一94.8
