1、GB ICS 67. 180. 10 X 31 中华人民共和国国家标准GB/T 18932.25-2005 蜂蜜中青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法Method for the determination of penicillin G , penicillin V, nafcillin ,oxacillin ,cloxacillin , dicloxacillin residues in honey一LC-MS-MS method 2005-08-01实施2005-02回04发布. ltBEE-E ,E EE- 山山山川M
2、MMnv，.，自川呻41，川MHHHH川们哼ruuuuu8 lBEll-B.J . ，E，匠，.、nu 川MUU8EI- 、，国山川川川岛川川川川们们UlnUUUUUUURU 山山山山山山川nu布刚刚刚EEEE-EE-发中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会GB/T 18932.25-2005 前言GB/T 18932本部分的附录A、附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本部分主要起草人z庞国芳、李学民、张进杰、曹彦忠、范春林、刘永明、赵为、郭彤彤、石
3、玉秋。本部分系首次发布的国家标准。I 1 范围下列文件中件，其随后所有的配协议的各方研究部分。GB/ T 6379 4.1 甲醇:色谱纯。4.2 乙睛:色谱纯。4.3 乙酸:优级纯。GB/T 18932.25-2005 蜂蜜中青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉4.4 乙腊+水(1十3):量取25mL乙睛(4.2)与75mL水?昆合。4.5 Oasis HLB固相萃取柱或相当者:500mg, 6 mL。使用前分别用5mL甲醇(4.1)和10mL水预处理，保持柱体湿润。4.6 青霉素G、青霉素V、乙氧荼
4、青霉素、苯唾青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素标准物质:纯度二三99%。4. 7 青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素标准储备溶液:准确称取适量的每种标准物质(4.6) ，分别用乙睛(4.4)配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液。储备液贮存在一180C冰柜中。4.8 青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素标准工作溶液:根据需GB/T 18932.25-2005 要吸取适量青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素标准储备榕液(4. 7) ，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液。5 仪器5.
5、 1 液相色谱串联四极杆质谱仪z配有电喷雾离子源(ESD。5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台。5.3 液体混匀器。5.4 固相萃取真空装置。5.5 贮液器:50mL。5.6 微量注射器:25L，100L.5. 7 刻度样品管:5mL，精度为0.1mL。5.8 真空泵:真空度应达到80kPa。5.9 pH计z测量精度:i:0.02。5.10 氮气吹干仪。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60.C的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中
6、，密封，并做上标记。6.2 试样保存将试样于常温下保存。7 测定步骤7. 1 试样溶液的制备称取5g试样(精确到0.01g)置于150mL三角瓶中，加入25mL去离子水，于液体棍匀器上快速混合1min，使i式样完全梅解。样液移至下接OasisHLB柱(4.5)的贮液器中，以小于或等于3mL/min 的流速通过Oasis固相萃取柱后，用5mL水洗柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，减压抽干20 min，最后用3mL甲醇(4.1)洗脱，收集洗脱液于刻度样品管(5.7)中，于40.C水浴中用氮气吹干仪吹干，用乙腊(4.4)定容至1mL，摇匀后，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.2 测定7.2.
7、1 液相色谱条件a) 色谱柱:SunFire C18 3.5m , 150 mmX2.1 mm (内径)或相当者;b) 流动相及流速见表1; c) 柱温:30.C;d) 进样量:20L.表1液相色i普梯度洗脱条件时间/min流速/cL/min)水(含0.4%乙酸)/c%)乙脯/c%)0.00 200 60.0 40.0 15.00 200 35.0 65.0 15.01 200 60.0 40.0 25.01 200 60.0 40.0 2 GB/T 18932.25-2005 压电压口电出口室出撞室怡且-Z刑FK萄量流酣E阳何噩量能能撞撞碰论且J压)电仰黯-E非A、电压黯栩即对腿脚放剧咱Z、
8、mm.，;和对任;汪汪对于源描测川阳阳-mp离子扫监059mlu离性离子应mm们vf量定雾离反50.队64定孔的喷-4多阳山尤如也品七表素A式式电压压流温利况相条源方方雾气气气源离刊种E子描测喷化帘助子性XY刷离扫检电雾气辅离定J呵，2UhwdUDUUO表吨，J定性定量碰撞去簇聚焦碰撞室名称离子对/离子对/能量/电压/电压/出口电压/Cm/z) Cm/z) V V V V 335/160 20 青霉素G335/160 45 200 11 335/176 23 351/160 20 青霉素V351/160 40 200 11 351/192 15 402/160 22 苯哇青霉素402/160
9、45 200 11 402/243 20 436/160 22 邻氯青霉素436/160 50 200 11 436/277 22 415/199 21 乙氧茶青霉素415/199 45 200 11 415/256 23 470/160 21 双氯青霉素470/160 50 200 11 470/311 21 7.2.3 液相色i骨串联质谱测定7.2.3. 1 定性测定在相同试验条件下，样品中待测物质与同时检测的标准品具有相同的保留时间，并且所选择的两对离子丰度比相一致，则可判定为样品中存在该残留。7.2.3.2 定量测定在仪器最佳工作条件下，用青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、
10、邻氯青霉素、双氯青霉素标准储备溶液配成的基质棍合标准榕液(4.的分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素的总离子流图参见图A.L青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素的保留时间和离子丰度比见表3。3 GB/T 18932.25-2005 表3六种青霉素的参考保留时间和离子丰度比青霉素名称青霉素G青霉素V苯
11、瞠青霉素邻氯青霉素乙氧荼青霉素双氯青霉素7. 3 平行试验按上述步骤，8 结果计算式中:C一一从标准工V一一试样溶液定9 精密度定性离子对/m/z)335 / 160 335/ 176 35 1/ 160 35 1/ 19 2 402/ 160 本部分的精密度数据是按照GB/T6379 计算。9. 1 重复性离子对丰度比/%)100 87 100 9. 6 100 保留时间/min7.44 9.21 10. 56 12.49 13. 05 15. 60 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(斤，蜂蜜中青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素
12、含量范围及重复性方程见表4。如果两次测定值的差值超过重复性限(r)，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，蜂蜜中青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯哗青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素含量范围及再现性方程见表4。4 GB/T 18932.25-2005 表4六种青霉素含量范围及重复性和再现性方程青霉素名称含量范围/(g/kg)重复性限再现性限R青霉素G140 Ig r= 1. 0027 Ig m一1.094 6 Ig R=O. 8860 Ig m 0.627 7 青霉素V140 Ig r=O. 9809 Ig
13、 m-1. 148 0 Ig R=O. 957 2 Ig m一O.645 1 苯嗖青霉素140 Ig r=O. 757 9 Ig m一0.9166 Ig R=O. 813 7 Ig m一0.6173 邻氯青霉素280 Ig r=O. 936 4 19 m一1.086 2 Ig R=O. 8489 Ig m一0.5625 乙氧茶青霉素O. 520 Ig r= 1. 0233 Ig m一1.151 1 IgR=0.8311Igm一0.6066 双氯青霉素280 Ig r= 1. 017 1 Ig m一1.138 3 Ig R=O. 801 8 Ig m一0.5164 注:m为两次测定结果的算术平均
14、值。5 GB/T 18932.25-2005 附录A(资料性附录)六种青霉素标准物质的总离子流圄六种青霉素标准物质的总离子流图，见图A.l。12.49 8.0e5 7.44 10.56 6.0e5 5.0e5 .13.05 7.44 min为青霉素G;9.21 min为青霉素V;4.0e5 -l 11 10.56 min为苯睡青霉素;3. Oe5 11 11 I1 1111 11 12.49 min为邻氯青霉素:13.05 min为乙氧茶青霉素;1I 1 1 I1I1 I1 15.60 min为双氯青霉素。1. Oe5 I Il，J ,1 vL 2 4 6 8 10 12 14 16 18 2
15、0 r/min 圄A.1六种青霉素标准物质的总离子流图6 附录B(资料性附录)回收率GB/T 18932.25一2005本部分中青霉素G、青霉素V、乙氧荼青霉素、苯瞠青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素添加浓度及平均回收率的试验数据见表B.l。表B.1 六种青霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据青霉素名称添加浓度/g/kg)回收率/%)1. 0 92. 1 10 91. 6 青霉素G20 91. 9 40 91. 3 1. 0 88.4 10 88.1 青霉素V20 90.7 40 86.1 0.5 94.3 5.0 92.2 乙氧荼青霉素92.3 10 20 93.2 1. 0 90. 9 10
16、89.2 苯略青霉素20 92.0 40 87.8 2.0 88.6 邻氯青霉素20 87.1 40 89.0 80 87.8 2.0 90.3 20 87.0 双氯青霉素88.2 40 80 89.0 mCON-R.N的-H阁。华人民共和国家标准蜂蜜中青霉素G、青霉素V、乙氧萦青霉素、苯睡青霉素、邻氯青霉素、双氯青葛素残留量的测定方法渡相色谱，串联质谱法GB/T 18932.25-2005 国中峙中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销9峰印张O.75 字数13千字2005年2月第一次印刷开本880X1230 1/16 2005年2月第一版定价10.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话，(010)685335339峰书号，155066. 1-22372 GB/T 18932.25-2005
