1、ICS 67.120.30 B 52 道自中华人民共和国国家标准G/T 19783-2005 中2005-06-02发布4也由俨绒整Chinese miUen-handed crab 蟹中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局中国国家标准化管理委员会2005-10-01实施发布本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。前言本标准由全国水产标准化技术委员会谈水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位:上海水产大学。本标准主要起草人:李思发、赵金良、邹曙明、蔡完其、王成辉。GB/T 19783-2005 I GB/T 19783-2005 中华绒萤蟹1 范围本标准规定了中华绒
2、整蟹的主要外部形态特征、生长与繁殖、遗传学特性以及检测方法。本标准适用于中华绒整蟹的种质检测与鉴定。2 规范性引用文件是否可使用这些文件的最新GB 17716-1999青GB/ T 18654. 12 3 术语和定义3. 1 3. 2 3. 3 3.4 3.5 3. 6 3. 7 3. 8 下列术语和定义头胸甲长car 头胸甲背面前第-但IJ齿宽first ob 头胸甲前侧缘左、右第背甲后半长第3步足长节长meropodit length of the third peraeopod 第3步足长节的长度。第3步足前节长propodit length of the third peraeopod
3、 第3步足前节的长度。第4步足指节长dactylopodit length of the fourth peraeopod 第4步足指节的长度。GB/ T 19783- 2005 4 名称和分类4. 1 学名中华绒莹蟹CEriocheirsnensis H. Milne-Edwards)。4.2 分类位置甲壳纲CCrustacea)，十足目CDecapoda)，爬行亚目CRaptantia)，方蟹科(Grapsidae)，绒整蟹属(Eriocheir)。5 主要外部形态特征5. 1 外形特征头胸甲明显隆起。额缘有4个尖齿，齿间缺刻较深，居中一个特别深，呈V或U形。第四侧齿明显。整足钳掌与钳趾基
4、部内外均有绒毛。第4对步足前节狭长，趾节呈尖爪状。雌蟹腹脐圆形，雄蟹腹脐为三角形。2 背面黄褐色或青褐色，腹部灰白或银白色。整足绒毛棕褐色，步足刚毛呈金黄色。中华绒整蟹的外部形态见图1和图20a) 雌性b) 雄性图1中华绒萤蟹外形(背面)a) 雌性b) 雄性图2中华绒萤蟹外形(腹面)GB/T 19783一20055. 2 可量性状中华绒莹蟹成蟹的主要形态性状比值见表1。表1中华绒鳖蟹主要形态性状比值项目额宽/头胸甲长第一侧齿宽/头胸甲长背甲后半长/头胸甲长体高/头胸甲长第3步足长节长/头胸甲长第3步是前节长/头胸甲长第4步足指节长/头胸甲长6 生长与繁殖6.1 生长中华绒整蟹体长与体重关系式参
5、见附录A。6. 2 繁殖6. 2. 1 中华绒整蟹生殖泪游一般在9月份10月份。6. 2. 2 性成熟雌蟹可进行一次交配，多次产卵。6.2.3 不同体重中华绒整蟹的抱卵量见表2。体重Ig200 7 遗传学特性7. 1 细胞遗传学特性体细胞染色体数2n=146o7. 2 生化遗传学特性表2中华绒整蟹抱卵量平均值标准差O. 239土0.010O. 624 :l: 0. 017 0.531 :l: 0. 011 O. 522土O.012 0.761士0.0450.509土0.028O. 437 :l: 0. 025 抱卵量/位700 000 7. 2. 1 中华绒整蟹肌肉中乳酸脱氢酶(LDH)的电泳
6、图谱见图3，表现为1条谱带。Ldh + 。图3中华绒整蟹肌肉中LDH同工酶电泳酶谱7.2. 2 根据对各水系中华绒整蟹8种同工酶17个座位的测定，中华绒整蟹群体的多态座位比例为31.25%，平均杂合度为O.099 90. 104 1。7. 3 分子遗传学特性中华绒萤蟹随机引物Opp17(TGACCCGCCT)的扩增产物电泳图谱见图4。扩增的947bp片段为中华绒整蟹所特有，但在其不同地理群体中表现有不同的出现频率参见附录B。3 GB/ T 19783-2005 M一一分子量标记()./8 检测方法8. 1 繁殖力测定在繁殖季节，将样品，在解剖镜下分8. 2 染色体测定按GB/T18654 8.
7、 3 同工酶测定按GB17716- 1 8. 4 随机扩增多态8.4.1 样品的采集与取O.1 gO. 3 g肌95%乙醇保存。3Ommol川/儿LTri川iM .0 g卵，3个缓冲液配制方法为:SDS和100Op.g/mL卜30O叩g/mL川自的9畸蛋白酶K，i混昆匀古寸千.作用过夜必吁12h)。混合液中加入等体积饱和酣，使样品写唱国分?昆匀，10000M把离心8min，吸取上清液;加入等体积的酣-氯仿-异戊醇?昆合液，混合比例为24: 24 :r，由/5J后吸取上清液;加入等体积的氯仿，棍匀后吸取上清液;加入等体积的异丙醇或2倍体积的无水乙醇，产生絮状DNA沉淀。静置5min，小心倒出异丙
8、醇或乙醇，获得DNA沉淀，并用70%的乙醇洗涤，干燥，加入500L的无菌重蒸水，再加入25 mg/mL的RNA酶A溶液(元DNA酶活性)2L，于370C温育1h后，置于40C冰箱保存备用。8. 4. 3 基因组DNA的PCR扩增在0.5mL薄壁管中加入总体积为25LPCR反应棍合液:2.0L3.0L PCR扩增缓冲液配制方法为:100mmollL Tris- HCICpH9. 0) , 500 mmollL KC1, 30 . 0 mmollL MgC12, 0. 001%明胶, 1L 2.5 mmollL dNTP棍合液，1L2L5mollL引物，约25ng150 ng基因组DNA，O.6
9、U 2 UTaq酶。于PCR扩增仪上反应，循环程序为:第一个程序为930C940C变性5min;第二个程序为GB/T 19783-2005 93C-94C 45 s , 36C 45 s , 72C 90 Sj第二个程序进行40个-45个循环后，72C延伸5min10 min。扩增反应结束后，直接电泳或4c暂时保存至电泳分析。8.4.4 PCR扩增产物的电泳分离与观察于1.5%琼脂糖凝胶上进行电泳，取10LPCR扩增产物，用移液器将样品加入样品孔中。DNA分子量标记同时点在旁边的孔中。在1V / cm 10 V / cm凝胶的电压下进行电泳。当澳酣蓝指示剂迁移至足够分离DNA片段的距离时，停止
10、电泳。用0.5f-lg/mL的澳化乙链染色10min30 min后在紫外透射系统上观察、照相(巳加入终浓度为O.5g/mL澳化乙链染色液的凝胶可以直接在紫外透射仪上观察、照相)。5 GB/T 19783-2005 附录A(资料性附录)中华绒萤蟹体长与体重关系式雌性、雄性中华绒整蟹的体长与体重关系式分别以式(A.1)和式(A.2)表示。式中zW一一体重，单位为克(g);W = 6.0078 X 10-4L2.9724 . ( A.1 ) W = 1. 3990 X 10-3L2.753 0 (A.2) L一一头胸甲长，单位为厘米(cmO附录B(资料性附录)特异性分子标记在中华绒萤蟹不同地理群体中
11、的出现频率随机引物Opp17扩增的947bp片段在中华绒整蟹不同地理群体中的出现频率分别为:长江水系群体为87.50%、回江水系群体为78.26%、黄河水系群体为41.66 %、辽河水系群体为10.83%(见图B.l)。100 90 87.5 80 78.26 京70. 60 性5E非毫S5 O 40 西41. 66 30 20 10 。辽柯黄词长江阪江圄B.1随机引物。pp17扩增的947bp片段在中华绒萤蟹不同地理群体中的出现频率6 mCON-的hFH曲。国华人民共和国家标准中华绒整蟹GB/T 19783-2005 中当除中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张O.75 字数13千字2005年8月第一次印刷开本880X12301/16 2005年8月第-版峰定价10.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066. 1-23341 GB/T 19783-2005
