1、ICS 65160X 87 蝠亘中华人民共和国国家标准GBT 232242008烟草品种抗病性鉴定Identification of cultivar resistance to tobacco disease2008-12-31发布 2009-06-01实施丰瞀鹃鬻瓣警糌赞霎发布中国国家标准化管理委员会厘11刖 置本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会(SACTC 144)归口。本标准起草单位：中国烟草总公司青州烟草研究所。本标准主要起草人-孑L凡玉、王凤龙、张成省、钱玉梅、王静、陈德鑫、申莉莉。GBT 23224-2008烟草品种抗病性鉴定GBT 23224-2008
2、1范围本标准规定了烟草品种对由病原真菌、细菌、病毒和根结线虫等引起的主要病害的抗病性鉴定及抗性评价方法。本标准适用于各类型烟草品种的抗病性鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 23222烟草病虫害分级及调查方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。31致病性分化variation of pathogenicity病原物由于突变、杂交、适应性变异、不同
3、孢子细胞质的异质性等致使生理小种改变，导致致病性差异。32人工接种鉴定artificial inoculation for identification用人工繁殖或收集的病原物，按一定量接种，创造发病条件，根据接种对象发病程度确定品种抗病性强弱。33对照品种control cultivar为了检验试验的可靠性，在品种鉴定时附加的抗病品种和感病品种。4品种抗病性鉴定41黑胫病411田问病圃鉴定4111鉴定方法选择排灌方便，肥力水平中等，连年发病较重的烟田作鉴定圃，病圃应明确病原生理小种类别。每个品种种植l行，每行20株以上，至少3次重复，随机排列，每重复设抗病品种“革新三号”、中抗品种“金星60
4、07”和感病品种“小黄金1025”各1行为对照。另设当地种植的抗、中、感品种作为辅助对照，参鉴烟草品种在全生育期内不应使用杀菌剂，杀虫剂的使用根据病圃内害虫发生种类和程度而定。人工接种鉴定，接种体选用当地优势生理小种或根据试验需要选取菌株。烟草移至大田成活后(10 d20 d)用菌谷接种，每株接种量4 g。接种后若天气干旱应灌水，以使田间土壤含水量处于饱和状态。1GBT 23224-2008菌谷制作方法：将谷子煮至约一半谷粒开花，捞出，装入三角瓶，高压灭菌1 h。将已培养好的黑胫病菌种，接种到灭菌后冷却的谷子上，然后置于2830下培养15 d20 d即成。4112分级及调查方法病害严重度分级应
5、符合GBT 23222的规定。调查时间：于发病初期、盛期和末期各调查1次，每次均应调查各品种全部植株。412室内接种鉴定4121鉴定方法烟苗长至5片6片真叶时，移栽至直径大于10 cm的花盆，每盆2株。每品种10株20株，对照品种设置同4111，待烟苗成活后，每株按025 go50 g菌谷量接种，置于温度28、相对湿度80的条件下诱发病害。4122分级及调查方法病害严重度分级应符合GBT 23222的规定。调查时间：接种后第3 d、5 d、7 d、10 d调查病情。每次均应调查各品种全部植株。42青枯病421田间病圃鉴定4211鉴定方法选择排灌方便，肥力水平中等，连年发病较重的烟田作鉴定圃，观
6、察品种对青枯病的抗性。每品种种植1行，每行20株，至少3次重复，随机排列，设抗病品种“D101”、感病品种“长脖黄”为对照。各地增设当地抗、中、感品种为对照。参鉴烟草品种在全生育期内不使用杀菌剂，杀虫剂的使用根据病圃内害虫发生种类和程度而定。4212分级及调查方法病害严重度分级应符合GBT 23222的规定。调查时间：在田间发病初期、盛期和末期，进行田间调查，每次均应调查各品种全部植株。422室内苗期接种鉴定4221鉴定方法烟苗长至5片-6片真叶时，移栽至直径大于10 cm的花盆，待烟苗成活后，用伤根灌菌液的方法，每个品种至少5株烟苗，3次重复以上。对照品种设置同4211。每株灌20 mL的青
7、枯菌悬浮液(3108 CFUmL)。接种后置于温度2830，相对湿度80以上的环境中，观察发病情况。接种体制备：接种体选用当地流行病原菌或根据试验需要选取菌株。将4下保存于无菌水中的青枯菌，在肉汁培养基平板上划线，2830下培养24 h，挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28培养24 h后移至肉汁斜面，继续培养24 h后用无菌水稀释，至所需要的接菌浓度。4222分级及调查方法病害严重度分级应符合GBT 23222的规定。调查时问：接种后第7 d、10 d、15 d、21 d、30 d进行调查，每次均应调查各品种全部植株。43炭疽病431菌种的培养菌种的培养采用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基，26下
8、培养7 d，用培养产生的分生孢子制备悬浮液供接种用。432接种材料的准备将烟苗移栽到直径大于10 CITI的花盆内，每品种至少3次重复，每重复至少5株烟苗。433接种方法于烟苗5片6片真叶时进行炭疽菌孢子(1106 CFUmL)接种，用小型手持喷雾器将孢子悬浮?GBT 232242008液喷洒到植株上，以叶片正反面充分湿润为宜。接种后在保持温度2630、相对湿度80以上环境条件下生长。434分级及调查方法病害严重度分级应符合GBT 23222的规定。调查时间：接种后第5 d、10 d、20 d分别调查发病程度，每次均应调查各品种全部植株。44根结线虫病441温室接种鉴定4411接种体制备接种体
9、选用当地优势种及生理小种或根据试验需要选取，利用感病的番茄品种“Rutgers”接种繁殖根结线虫，在2530下生长55 d60 d后即可作为接种体使用。4412接种方法采用线虫卵或病土接种法。烟苗长至3片4片真叶时，移栽至直径大于10 cm的花盆内，烟苗每盆接种5 000个线虫卵；或将其栽人装有病土(病根及根际病土与消毒营养土按1：4混合)的花盆中，接种后按常规管理并防止其他病虫干扰。在室温为2530条件下生长。设感病品种“长脖黄”、抗病品种“T1706”和“NC95”为对照。设当地的抗病品种、中抗品种和感病品种为对照。每处理5株，随机排列，至少3次重复。4413分级及调查方法病害严重度分级应
10、符合GBT 23222的规定。调查时间：接种后2个月，拔出烟株，用自来水冲去根部泥土，调查全部烟株根结线虫病病情。442田间鉴定4421鉴定方法选择根结线虫连年为害较重的田块，在自然发病条件下，鉴定品种对根结线虫的抗性，每品种至少种l行，每行20株，随机排列，至少设3次重复，对照品种与4412相同。4422分级与调查方法病害严重度分级应符合GBT 23222的规定。调查时间：收获期拔根调查病情，调查全部烟株根结线虫病病情。45赤星病451温室苗期接种鉴定4511接种体的制备将烟草赤星病菌在PDA平板培养基上26培养7 d，用1葡萄糖液配成浓度为1105cFumL的孢子悬浮液作为接种液。4512
11、接种材料的准备将烟苗移栽至直径大于10 cm的花盆内，每品种20盆，每盆2株，至少设3次重复。4513接种方法于烟苗9片10片真叶时进行赤星病孢子(1105 CFUmL)接种，用小型手持喷雾器将孢子悬浮液喷洒到植株上，然后置于人工气候箱内，设定温度2630，相对湿度70。设感病品种“G140”、抗病品种“净叶黄”为对照，设当地种植的抗病品种、中抗品种和感病品种作为辅助对照。4514分级与调查方法病害严重度分级应符合GBT 23222的规定。调查时间：接种后第7 d、10 d、20 d调查发病程度。3GBT 23224-2008452田间鉴定4521鉴定方法选择排灌方便，肥力水平中等，连年发病较
12、重的烟田作鉴定圃，每个品种种植1行，每行20株以上，3次重复以上，随机排列。对照品种同4513。对照品种和参鉴品种烟株应适当多施氮肥，一般打顶不采收，在全生育期内不使用杀菌剂，杀虫剂的使用根据病圃内害虫发生种类和程度而定。在参鉴品种四周种植不少于2行的保护行品种，株行距与参鉴品种相同。保护行品种应选择发病较轻的品种。在发病较轻年份，可进行人工辅助接种。人工接种鉴定应在下部叶片开始成熟时进行，接种一般用浓度为1105 CFUmL的孢子悬浮液进行喷雾接种，孢子悬浮液的制备同4511。也可将带有赤星病菌的烟叶粉碎均匀，撒人田间。4522分级与调查方法病害严重度分级应符合GBT 23222的规定。调查
13、时间：自然发病于病发初期、盛期和末期各调查1次，若人工接种则于接种后每10 d调查1次，连续调查3次。调查方法：每处理定点调查5株，每株调查全部叶片。46烟草普通花叶病毒病(TMV)461接种体的制备接种体选用当地优势株系或根据试验需要选取，接种到系统寄主上繁殖保存。为了防止保存期病毒的致病性退化，在使用前15 d转接到“三生一NN”烟上复壮1次，备用。462鉴定方法于烟苗4片5片真叶时进行汁液摩擦接种，在第一片真叶上撤少许400目500目的金刚砂，然后用棉花蘸取病毒汁液，在叶片上轻轻摩擦。烟苗数量较大时可以用喷枪接种，接种前在病毒汁液中加入1金刚砂，高压喷射(压力为68 9476 Pa206
14、 8428 Pa)，喷口距接种物20 cm，每株喷接05 s。接种7 d后未见发病再回接1次。试验设3次重复，随机排列，每次重复15株烟苗以上。烟株保持在2528条件下生长，设“三生一NN”为抗病对照、“革新三号”为中抗对照、“G140”为感病对照。463分级与调查方法病害严重度分级应符合GBT 23222的规定。调查时间：接种后第7 d、14 d、21 d调查全部烟株发病情况。47黄瓜花叶病毒病471接种体的准备接种体选用当地优势株系或根据试验需要选取，接种到“三生一NN”上繁殖保存。为了防止保存期病毒的致病性退化，在使用前15 d转接到“三生一NN”上复壮1次，备用。472鉴定方法于烟苗4
15、片5片真叶时进行接种，方法同462。设“Ti245”、“铁把子”为抗病对照，“G28”和“亮黄烟”为感病对照。473分级与调查方法同463。48结果计算与评价病情指数和发病率计算应符合GBT 23222的规定，各次调查数据中以感病对照品种发病最先达到感病的调查数据为依据进行抗病性评价。感病对照的病情指数不低于60时方可认为试验及评价有效。品种抗病性评价标准如下：高抗或免疫(I)：病情指数为0；抗病(R)：病情指数为0120；4中抗(MR)：病情指数为20140；中感(Ms)：病情指数为40160；感病(s)：病情指数为60180；高感(HS)：病情指数为801100。GBT 23224-2008
