GBZ T 240.12-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第12部分:体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验.pdf
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1、ICS 13. 100 C 52 , 中华人民共和国国家职业卫生标准GBZ/T 240.12-2011 化学晶毒理学评价程序和试验方法第12部分:体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验Procedures and tests for toxicological evaluations of chemicals一Part 12: In vivo mammalian bone marrow chromosome aberration test 2011-08-19发布2012-03-01实施中华人民共和国卫生部发布数码防伪目lJJ=t 根据中华人民共和国职业病防治法制定本部分。GBZ/T 240(化学
2、品毒理学评价程序和试验方法现分为以下四十四部分:一一第1部分:总则;第2部分:急性经口毒性试验;一一第3部分:急性经皮毒性试验;一一第4部分:急性吸入毒性试验;第5部分:急性眼剌激性/腐蚀性试验;一一第6部分:急性皮肤刺激性/腐蚀性试验;一一第7部分:皮肤致敏试验;第8部分:鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验;一一第9部分:体外哺乳动物细胞染色体畸变试验;一一第10部分:体外哺乳动物细胞基因突变试验;一一第11部分:体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验;第12部分:体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验;一一第13部分:哺乳动物精原细胞/初级精母细胞染色体畸变试验;一一第14部分:啃齿类动物显性致死试验;
3、一一第15部分:亚急性经口毒性试验;一一一第16部分:亚急性经皮毒性试验;一一第17部分z亚急性吸人毒性试验;第18部分t亚慢性经口毒性试验;一一第19部分:亚慢性经皮毒性试验;一一第20部分:亚慢性吸入毒性试验;一一第21部分:致畸试验;一一第22部分:两代繁殖毒性试验;一一第23部分:迟发性神经毒性试验;一一第24部分:慢性经口毒性试验;一一第25部分z慢性经皮毒性试验;第26部分:慢性吸人毒性试验;第27部分:致癌试验;一一第28部分:慢性毒性/致癌性联合试验;一第29部分:毒物代谢动力学试验;第30部分:皮肤变态反应试验-局部淋巴结法;一一第31部分:大肠杆菌回复突变试验;-一第32部
4、分z酵母菌基因突变试验;一一第33部分z果蝇伴性隐性致死试验;一一第34部分:枯草杆菌基因重组试验;一一第35部分:体外哺乳动物细胞程序外DNA合成(UDS)试验;一一第36部分:体内哺乳动物外周血细胞微核试验;GBZ/T 240.12-2011 I GBZ/T 240.12-2011 E 第37部分:体外哺乳动物姊妹染色单体交换试验;一一第38部分z体内哺乳动物骨髓细胞姊妹染色体交换试验;一一第39部分:精子畸形试验;第40部分:繁殖/生长发育毒性筛选试验;-一第41部分:亚急性毒性合并繁殖/发育毒性筛选试验;一一第42部分z一代繁殖试验;二一第43部分z神经毒性筛选组合试验;第44部分:免
5、疫毒性试验。本部分为GBZ/T240的第12部分。本部分由卫生部职业卫生标准专业委员会提出。本部分由中华人民共和国卫生部批准。本部分起草单位:湖南省劳动卫生职业病防治所、中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所。本部分主要起草人:陆丹、孙金秀、常兵、林铮。GBZ/T 240.12-2011 化学晶毒理学评价程序和试验方法第12部分:体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验1 范围GBZ/T 240的本部分规定了体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验的目的、试验概述、试验方法、数据处理与结果评价、评价报告和结果解释。本部分适用于检测化学品对骨髓细胞的遗传毒性。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必
6、不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GBZ/T 224 职业卫生名词术语GBZ/T 240. 1 化学品毒理学评价程序和试验方法第1部分:总则3 术语和定义GBZ/T 240.1界定的术语和定义适用于本文件。3. 1 染色单体型畸变chromatid-type aberration 染色单体断裂或染色单体断裂重组的结构损伤。3.2 染色体型畸变chromosome-type aberration 为在两个染色单体的相同位点均出现断裂或断裂重组改变的结构损伤。3.3 核内复制endoreduplicat
7、ion 在DNA复制的S期之后,细胞核未进行有丝分裂就开始了另一个S期的过程。其结果是染色体有4,8,16,倍的染色质。3.4 3.5 3.6 裂隐gap 染色体或染色单体损伤的长度小于一个染色单体的宽度,为染色单体的最小的错误排列。染色体数目畸变chromosomal numerical aberration 染色体数目发生改变,不同于正常核型。多倍体polyploidy 哺乳动物染色体数目正常是二倍体,在化学诱变剂的作用下,染色体数目成倍地增加成三倍体、四GBZ/T 240.12-2011 倍体等。3. 7 染色体结构的畸变chromosomal structure aberration
8、通过显微镜可以直接观察到的发生在细胞有丝分裂中期的染色体的结构变化。如染色体中间缺失和断片,染色体互换和内交换等。4 试验目的本试验是一项致突变试验,用来检测整体动物骨髓细胞染色体畸变,以评价受试样品致突变的可能性。5 试验概述动物通过适当的途径接触受试样品,一定时间后处死动物。动物处死前,用细胞分裂中期阻断剂处理,处死后取出骨髓,经低渗、固定后制备骨髓细胞染色体标本,经染色,在显微镜下观察中期分裂相细胞,分析细胞染色体畸变。6 试验方法6. 1 试剂6. 1. 1 O. 1 %秋水仙素:置于棕色瓶中,冰箱保存。6. 1. 2 0.9 %氧化铀溶液。6.1.3 0.075 mol/L氯化饵溶液
9、。6. 1. 4 固定液:甲醇与冰醋酸以3: 1 混合,临用时现配。6. 1. 5 姬姆萨(GiemS)染波:Giemsa染料甲醇甘油3.8 g 375 mL 125 mL 配制:将Giemsa染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨,再加入甲醇至315mL,待完全溶解后,再加入125mL甘油,混合均匀。置37oc恒温箱中保温48h。保温期间振摇数次,促使染料的充分溶解。取出过滤,两周后使用。6. 1.6 磷酸缓盐冲液(pH7.4): 1/15 mol/L磷酸氢二锅溶液:磷酸氢二铀(Na2HP04)9.47 g溶于1000 mL蒸悟水中。1/15 mol/L磷酸二氢饵溶液:磷酸二氢饵(KH2P04)49
10、.07 g溶于1000 mL蒸锢水中。取1/15mol/L磷酸氢二锅溶液80mL与1/15mol/ L磷酸二氢饵溶液20mL混合。6. 1. 7 Giemsa应用液:取1份Giemsa染液与9份1/15mol/L磷酸缓盐冲液混合而成。临用时配制。全部试剂除注明外,均为分析纯,试验用水为蒸懵水。6.2 受试样晶处理受试样品一般应新鲜配制。如果有资料证明以溶液贮存稳定,可以不必新鲜配制。固体受试样品应溶于或悬于适当的溶剂或载体中,并进行稀释。液体受试样品可直接使用或稀释后使用。根据受试 GBZ/T 240.12-2011 样品的理化性质(水溶性/脂溶性)确定受试样品所用的溶剂或载体。但所用溶剂或载
11、体在使用剂量水平对实验动物应不产生毒作用,且不与受试样品发生任何化学反应。通常用蒸锢水、等渗盐水、植物油、食用淀粉、竣甲基纤维素销等。如非常用的溶剂或载体,应有参考资料说明其成分及选做溶剂的原因。6.3 对照6.3.1 每次试验每一性别都应设置相应的阳性和阴性对照(溶剂/载体),除不使用受试样品外,其他处理与受试样品组一致。6.3.2 阳性对照组动物体内应能形成可被检测的高于背景的骨髓细胞染色体结构畸变。阳性对照组剂量设置应使致染色体畸变效应明显,但以不能使看片者一看即知编码玻片底细。可只取一个采样点来证明阳性对照。最好使用与受试样品化学分类相关的阳性对照化合物。常用的阳性对照物有:一一甲磺酸
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