1、 ICS 47. 020 u 04 备案号：45041-2014中华人民共和国船国自行业标准CB/T 3328. 1-2013 代替CB*3328. 1-1988 船舶污水处理排放水水质检验方法第1部分：耐热大肠菌群数检验法Test method for waste water quality of ship sewage treatment 一一Part I :Thermotolerant coliform counts 2013一12-31发布2014 - 07 -01实施哇字号啪啪暗Riii.lU!i:f.J,l!J:l:JI口: （J）!i：码口气中华人民共和国工业和信息化部真晶棕惧由
2、前仿冒发布CB/T 3328. 1-2013 目lj昌本部分按照GB/T1. 1一2009给出的规则起草。本部分代替CB*3328. 1-1988，与CB*3328. 1-1988相比主要技术变化如下za) 将“大肠杆菌”改为“耐热大肠菌群”：b) 增加了规范性引用文件（见2); c) 将2铀的培养温度提高至（44.5士0.5）（见3，原标准第2章）：d) 培养基灭菌的灭菌温度改为115，灭菌时间改为20min （见4.1. 2，原标准3.7) ; e) 增加了EC培养液的配置方法（见4.3) ; f) 增加“当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用”的要求（见4.的。本部分由全国船用机械标
3、准化技术委员会海上环境保护分技术委员会CSAC/TC137/SC9）归口。本部分起草单位：中国船舶重工集团公司第七0四研究所、南京中船绿洲机器有限公司、东台市东方船舶装配有限公司。本部分主要起草人：李安娜、盛伟群、张晓群、吕敬、陈海兵。本部分于1988年2月首次发布。I 1 范围船舶污水处理排放水水质检验方法第1部分：耐热大肠菌群数检验法CB/T 3328. 1-2013 本部分规定了船舶生活污水处理排放水中耐热大肠菌群数检验方法的原理、培养基种类及配制、仪器、检验手续、大扬菌群数的结果计算和精密度。本部分适用于船舶生活污水处理排放水水质的耐热大肠菌群数检验，也可用于其他废水、词、海水等的大肠
4、菌群数的检验，2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注目期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。HJ/T 347-2007水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法3 原理耐热大肠菌群是总大肠菌群中的一部份，主要来自粪便，是在（37土0.5）下培养（24士2)h，产酸和产气的，并且在提高温度至（44.5士0.5）下培养(242) h，仍能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染
5、的情况。多管发酵法以最可能数(Most Probable Number, MPN）表示试验结果，其原理见盯T347-20070 4培养基和试荆4. 1 单倍乳糖蛋白陈培养液4. 1. 1 成分单倍乳糖蛋白陈培养液的成分见表lo表1单音字L糖蛋白陈培养液培养基名称蛋白陈牛肉浸膏乳糖氧化铀数量10 g 3 g 5 g 5 g CB/T 3328. 1-2013 Lt 培养基名称1. 6 %澳甲盼紫乙醇溶被蒸馆水 数量1 mL 1000 此4. 1.2 制法将蛋白胀、牛肉浸膏、乳糖、氧化锅加热溶解于lOOOmL蒸锢水中，调节PH为7.27.4，再加入1.6 % 澳甲酌紫乙醇榕液lmL，充分混匀，分装
6、于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115灭菌20min，贮存于暗处备用。4.2 三倍乳糖蛋白陈培养液按4.1配方比例三倍除蒸馆水外，配成三倍浓缩的乳糖蛋白陈培养液，？如j法相同。4.3 EO培养液4.3. 1 成分EC培养液的成分见表2。表2EC培养液培养基名称数量I-=-且h品一膜陈20 g 乳糖5 g 胆盐三号1. 5 g 磷酸氢二锦（K.HPO.)4 g 磷酸二氢悍（班I.PO.)1. 5 g 氧化铀5 g 蒸馆水1000 mL 4.3.2 制法将表2规定的成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中，在115灭菌20min，灭菌后PH应为6.9。4
7、.4 培养基的存放在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。5仪器耐热大肠菌群检验方法用仪器见表3。2 CB/T 3328. 1-2013 表3检验方法用仪器一- r二一序号仪器名称要求一二民二隔水式恒温培养箱温度在（2050）2 热空气灭菌烘箱温度在(170士10）3 高压蒸汽灭菌器温度在1214 恒温水浴锅一5 电冰箱一6 药物天平精确至o.lg 7 发酵试管5支每支155mm 8 酒精灯一9 酸度计（PH计精度为士0.1个单位10 接种器11 果样瓶500mL小口玻
8、璃瓶12 其他细菌培养所用的材料脱脂棉、牛皮纸、绳等6 步骤6. 1 水样接种量6. 1. 1 将水样充分混合后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一种水样量要有五管。6. 1.2 相对未受污染的水样接种量为lOmL、lmL、0.lmL。受污染水样接种量根据污染程度接种lmL、0. lmL、O.OlmL或0.lmL、O.OlmL、O.OOlmL等。使用的水量见表4o表4接种用水量参考表接种量水样种类检测方法mL 100 50 10 0. 1 10-2 10-3 10-230 表6最可能数（MPN）表出现阳性份数MPN指数95 %置信界限出现阳性份数MPN指
9、数95 %置信界限lOml lml 0. lml /lOOmL 下限上限lOml lml 0. lml /lOOmL 下限上限。2 - 4 2 I 26 9 78 。1 2 0.5 7 4 3 。27 9 80 。2 .0.5 7 4 3 l 33 11 93 。2 。4 0.5 11 4 4 。34 12 93 1 。2 0.5 7 5 。23 7 70 l 。1 4 0.5 11 5 。1 34 11 89 I 。4 0.5 11 5 。2 43 15 110 4 CB/T 3328. 1-2013 表6（续出现阳性份数MPN指数95 %置信界限出现阳性份数MPN指数95 %置信界限lOm
10、l lml 0. lml /lOOmL 下限上限lOml lml 0. lml /lOOmL 下限上限6 O. 5 15 5 。33 11 93 2 。6 0.5 15 5 1 46 16 120 2 。5 0.5 13 5 2 63 21 150 2 。7 17 5 2 。49 17 130 2 。7 17 5 2 1 70 23 170 2 9 2 21 5 2 2 94 28 220 2 2 。9 2 21 5 3 。79 25 190 2 3 。12 3 28 5 3 110 31 250 3 。8 1 19 5 3 2 140 37 310 3 。1 11 2 25 5 3 3 18
11、0 44 500 3 1 。11 2 25 5 4 。130 35 300 3 1 14 4 34 5 4 1 170 43 190 3 2 。14 4 34 5 4 2 220 57 700 3 2 1 17 5 46 5 4 3 280 90 850 3 3 。17 5 46 5 4 4 350 120 1000 4 。13 3 31 5 5 。240 68 750 4 。1 17 5 46 5 5 1 350 120 1000 4 。17 5 46 5 5 2 540 180 1400 4 1 1 21 7 63 5 5 3 920 360 3200 4 1 2 26 9 78 5 5
12、4 1600 640 5800 4 2 。22 7 67 5 5 5 ;:?:2400 8精密度5支发酵管同一个稀释度为lmL水样时，一次全部阴性可能性小于1%。5 的FON创的的F。国华人民共和船舶行业标准中船舶污水处理排放水水质检验方法第1部分：耐热大肠菌群数检验法CB/T 3328. 1-2013 * 中国船舶工业综合技术经济研究院出版北京市海淀区学院南路70号邮政编码：100081网址：电话：010-62185021船舶标准化管理研究与咨询中心发行版权专有不得翻印开本88012301116 印张0.62字数3.85千字2014年9月第1版2014年9月第一次印刷印数1-300阴阳刷刷阳刷刷刷刷刷刷刷刷剧回翻剧翩翩翩刷刷刷刷刷刷创刷刷刷刷刷M固国酣刷刷刷刷刷刷刷剧剧酣剧圄回刷刷刷川剧刷刷刷刷刷刷因回阴阳刷刷配刷刷剧目国翩翩刷刷刷刷如刷刷刷刷圃EE翻皿圃田园田园田园皿定价45元船标出字第2013316号CB/T 3328. 1-2013
