1、中华人民共和国环境保护行业标准HJ/T 77-2001多氯代二苯并二嗯英和多氯代二苯并吠喃的测定同位素稀释高分辨毛细管气相色谱/高分辨质谱法Determination of polychlorinated dibenzo-p-dioxins andpolychlorinated dibenzo-p-furans by isotope dilution HRGC/HRMS2001门0一19发布2002一01一01实施国家习屯境钧护总局发布801HJ/T 77-2001前言为贯彻中华人民共和国环境保护法、中华人民共和国大气污染防治法、中华人民共和国固体废物污染环境防治法，配合危险废物焚烧污染控制标
2、准和生活垃圾焚烧污染控制标准等有关国家环境标准的实施，保障人民群众身体健康，制定本标准。本标准应用同位素稀释、高分辨毛细管气相色谱(HRGC) /高分辨质谱(HRMS)联用技术测定液态、固态、气态和生物组织中的2,3,7,8一位氛取代及四至八抓代二苯并二嗯英及吠喃，本标准参考了当前国际上通用的美国EPA 1613二嗯英标准分析方法。本标准由国家环保总局科技标准司提出。本标准由中国科学院水生生物研究所负责起草。本标准由国家环境保护总局负责解释。802HJ/r 77-2001多氮代二苯并二唔英和多氮代二苯并映喃的测定同位素稀释高分辨气相色谱/高分辨质谱法1主题内容与适用范围1.1方法适用于用高分辨
3、气相色谱/高分辨质谱(HRGC/HAMS)联用技术测定液态、固态、气态和生物样品中四至八氯代二苯并二嗯英(PCDDs)及二苯并吠喃(PCDFs );本方法参考了美国EPA 1613方法。1.2本方法适用于表1中所列的17种2,3,7,8一位抓取代二苯并二嗯英及吠南的检测，对每个异构体的最低检测限(MI)见表2,2引用标准当下列标准和规范在本标准中引用时，与本标准同效。GB 16157-1996固定污染源排气中颗粒物测定和气态污染物采样方法HJ/T 47-1999烟气采样器技术条件HJ/T 48-1999烟尘采样器技术条件当上述标准和规范被修订时，应使用其最新版本。3分析过程中的干扰和干扰消除3
4、.1应使用高纯溶剂(一般以进口农残级试剂)以满足超痕量分析的要求，必要时溶剂应在全玻璃系统中重蒸。此外，柱填料也可通过提取或溶剂洗脱来纯化。3.2玻璃器皿应正确清洗，防止通过玻璃表面吸附，造成目标化合物损失或污染样品。3.2.1玻璃器皿在使用后应立即使用洗涤剂清洗，然后再用溶剂淋洗。洗涤时，在玻璃器皿中放人洗涤剂并超声清洗30 s。玻璃器皿上可拆卸的部分，特别是分液漏斗上的聚四氟活塞，在用洗涤剂清洗之前应将其拆开单独清洗。3.2.2在用洗涤剂清洗之后、玻璃器皿应立即用甲醇淋洗，再用水洗净，然后依次用甲醉、丙酮和二抓甲烷淋洗。3.2.3切勿将用常规清洗方法清洗的玻璃器皿放人烘箱中烘烤。按上述方法
5、将玻璃器皿彻底清洗干净后，方可放人烘箱中烘烤。切忌对玻璃器皿进行反复烘烤，以防止在玻璃表面形成活性部位.导致对二蟋英的不可逆吸附。3.2.4索氏抽提装置在使用前应先用甲苯预抽提3h。分液漏斗常用二氮甲烷/甲苯(体积比4- 1)振荡2 min,沥干，再用纯二氯甲烷振荡2 min,3.3分析中使用的所有实验用品必须确保不含有任何干扰物，每分析20个样品后对参考物和空白对照考查一次。3.4多次使用过的玻璃器皿应根据所处理样品的特殊性对其编号，以便跟踪实验室内造成个别样品污染的来源，有助于判断曾用于处理过高浓度样品的一些玻璃器皿是否需要进一步清洗。xJ/T 77-20014安全问题4.1本方法中所用的
6、溶剂和试剂都具有一定的毒性，对健康具有潜在的危害，因此，应尽量减少与这些化学品的直接接触。4门.1动物暴露实验已发现2,3,7,8-TCDD具有很强的致畸、致癌和致突变性。它在水中的溶解度约为200 ng/kg，在有机溶剂中可溶解。.14%。从2,3 , 7 , 8-TCDD的毒理学数据和物理性质来看，操作二of,英化合物的人员一定要经过安全知识培训。4.1.2本方法极力推荐购买稀释过的标准溶液。制备储备液，应该在通风橱中进行，并且应戴上防毒面罩。4.2实验室应备有专门用于化学品安全操作的防毒面具;同时操作人员应具有个人安全数据表。4.3含二嗯英样品的处理与放射性物质或传染性物质同样重要。实验
7、室必须具备良好的通风条件，同时应严格控制出人实验室的人员。4.3.1防护设备:实验室应备有塑料手套、实验服、安全眼镜或口罩以及通风橱。在可能产生烟雾或尘埃的分析操作中，操作人员应戴上装有活性炭的呼吸器。在操作暴露样品或标样时应当佩戴眼镜等保护设备。在处理高浓度f a,英样品时，应当在乳胶手套内再加一双耐溶剂手套。4.3.2个人卫生:在每次实验后，应彻底将手和前臂洗净。4.3.3防护措施，隔离工作区应贴上标记;玻璃器皿应与工具隔离，并在通风橱的顶端安放塑料吸附纸以便监测污染状况。4.3.4废气的排放:气相色谱仪分流出的废气和质谱仪泵中抽出的废气应该用装有活性炭的柱子吸附，也可通人油脂或高沸点的醇
8、中吸收处理。4.3.5废物的处理:首先应尽量减少废弃的污染物。其次，废物缸中必须放人衬垫的塑料袋;勤杂工和其他工作人员必须经过废物处理安全操作的培训。4.3.6污染去除4.3-6.1个人的污染:用大量肥皂水或洗涤剂进行清洗。4.3.6.2玻璃器皿、工具和表面:分别用溶剂、洗涤剂和超纯水清洗。4.3.7实验服污染:集中收集到塑料袋中作废物处理。4. 3.8表面污染检查:用一片滤纸在工具和工作台的表面擦拭，然后经抽提后浓缩进行GC-ECD分析。如果在擦拭检测中擦拭片增重超过10 Jg，就必须对设备和工作台进行彻底清洗。5设备和材料5.1制备样品的装置5.，.，通风橱。5.1.2组织匀浆器:匀浆器应
9、带有不锈钢转轴和快速切削的刀片。5.1.3肉类粉碎机:内部的盘片上应有直径为3-5 mm的筛孔。5.1.4含水量测定装置。5.1.5天平称量精度:至少能精确称到0. 1 Mg.最小量程:至少能称量到10 mg,5.1.6 250,500和2 000 m1带有聚四氟活塞开关的玻璃分液漏斗。5.1.7带9。或140 mm沙芯的过滤装置。5.1.8索氏抽提器抽提容量为200 ml，外径为50 mmo5.1.9机械振荡器和带聚四氟瓶盖的盐酸消化瓶(50。一600 ml)。5.1. 10玻璃吸管。HJ/T 77-20015.1.11玻璃色谱柱5.1.11.1 150 mm长X 8 mm内径玻璃色谱柱。5
10、.1.11.2 200 mm长X 15 mm内径贮液器。5.1.11. 3 300 mm长X25 mm内径玻璃色谱柱。5.1.12旋转蒸发器，带有调温水浴加热器。5.1.12.1旋转蒸发器的真空源来自于蒸发器上的可调阀门和真空泵。5.1.12.2最好装备一个循环水泵和冷凝水装置，它能节约大量的水并保持恒定的水温和压力。5.1.13氮气吹干装置:安装在通风橱内并能将温度控制在。-60C范围内。5.2气相色谱仪5.2.1须有无分流或柱上进样器，并能程序升温。5.2.2毛细管气相色谱柱:RTX-2330(60 m长,0. 25 mm ID,O. I pm df)或DB-5 ms(60 m长，0.32
11、士0. 02 mm ID;O. 25 pm df)或其他固定相相当的毛细管色谱柱。5. 3质谱仪:应能在1。内分辨率达到10 000时，至少重复选择检测到12个精确的质量数。5.4数据处理系统:收集、记录和存储质谱数据。6试剂和标准6.1试剂以下试剂均应达到农残级。6门.1硫酸:优级纯。6.1.2盐酸:浓度220 g/I。6.1.3氯化钠:用纯水按5%(m/V)比例配制6.1.4无水硫酸钠。6.，.5高纯氮气。6.1.6溶剂:丙酮、甲苯、正己烷、甲醇、二氯甲烷和壬烷，均在玻璃器皿中重蒸，并用GC分析来确认对分析无干扰。6.1了石英砂(60/70目):用索氏抽提器抽提后，在450C至少烘烤4 h
12、.6.2提取6.3吸附剂6.31硅胶6.3.1.1活化硅胶:100-200目，用二氛甲烷清洗，在180至少烘烤lh，在干燥器中冷却，然后储存在带有螺帽.的玻璃瓶中。6.3.1.2酸化硅胶(44%，质量分数):将44. 0 g浓硫酸和56. 0 g活性硅胶放在一个干净的容器内混合，搅拌均匀，用带聚四氟螺帽的瓶子封装。6.3.1.3碱化硅胶:用30 mL 1 mol/L氢氧化钠和100 g活性硅胶在一个干净的容器内混合，搅拌均匀，用带聚四氟螺帽的瓶子封装。6.3.2氧化铝:酸性或碱性氧化铝都可用于样品纯化。6-3-2-，酸性氧化铝，在130 C加热活化至少12 h,6.3-2.2碱性氧化铝，保存在
13、130 C的密封的烧瓶中，必须在烘烤后的五天之内使用。6.3.3活性炭6.3-3.1将9. 0 g Carhopak C和41. 0 g Celite 545按18%(质量分数)比例混合，在130 C下活化6h后，储存在干燥器中备用。6.3.4弗罗里土柱6.3-4.1弗罗里土:分析纯，60-100 q,HJ/T 77-20016.3.4.2 1%水(质量分数)的弗罗里土:用1. 0 ml、的超纯水和99. 0 g的弗罗里土在一个干净的容器内混合，搅拌均匀，用带聚四氟螺帽的瓶子封装。6. 4 -Of英标准溶液:购买的标准溶液或混合物应标明它们的纯度、浓度和认证机构，或者从已知纯度和组成的物质中制
14、备(表3)。如果化学品的纯度为98%或更高，可以用重量来计算而无需重新计算标准的浓度。6.5用壬烷配制标准溶液6. 5. 1校正标准(CS1-CS5):制备出表4中所示的五种校正溶液(溶剂为壬烷);响应因子可以用这些溶液浓度来测定。6.6保留时间确定标准:用来确定二嗯英异构体的起始至结束保留时间，以及确证GC柱对异构体的分离效果。标准中至少应含有表5中所列的化合物。6.7标准参考物:该考察样品中应含有已知浓度二嗯英并且与分析基质相近的、已被认可的参考物质。了样品采集、保存、储存和有效期7.1采集的样品应放人棕色玻璃瓶中。水样(至少20 1以上)收集后经固相萃取(SPE)后放人冰箱中保存，固体样
15、品用大口径采样器采集。7.2水样在到达实验室前需保存在。-4C的黑暗处。如果样品的pH大于9，应用硫酸调至pH7-9固体、半固体、油和棍合相样品在到达实验室之前应在4C以下避光保存。样品到达实验室后，液体样品应储存在。-4C黑暗处。固体、半固体、油和生物组织样品均应储存在温度低于一10的暗处。了.3生物组织样品7.11野外采集的生物组织用铝箔纸包裹，运输过程中应在低于4C的温度下保存。7.3.2到达实验室后，样品应该保存在一1oC的暗处7.4焚烧装置尾气和空气采样7.4.飞焚烧装置尾气采样7.4-1.1采样内标为了检验采样过程的有效性和采样效率，在采样操作之前添加采样内标。供选用的内标物质为3
16、C或37C1标记的二嗯英(见表10)07.4.1.2过滤和吸附材料7.4门.2.1滤筒:玻璃纤维滤筒，要求对0. 3 pm颗粒物的阻留效率大于99. 95 o(穿透率小于0.0500)。使用之前分别用丙酮和甲苯进行超声波洗涤30 min，然后真空干燥。处理后的滤筒保存在干净的玻璃容器中，从每批处理滤筒中抽样进行二R$英空白检验7.4. 1.2.2吸附材料:使用市售XAD-2树脂或性能更好的吸附材料。使用之前，吸附材料用丙酮洗净后，再用甲苯进行索氏提取16h以上，然后用丙酮和甲苯(2次)超声清洗30 min，最后在真空干燥器中50 C以下加热8h，保存在密闭容器中。处理好的吸附材料要经过与采样分
17、析同样的操作进行空白实验，以确保其不含有任何影响二Of英分析的干扰成分。7.4.1.3采样装置焚烧装置尾气二RE,英采样装置(图4)包括采样管、滤筒托架、冲击瓶、树脂柱、冷凝水装置、微电脑烟尘平行采样仪等部分。本装置参考了国家环保总局HJ/T 48-1999烟尘采样器技术条件及中华人民共和国国家标准GB/T 16157-19M固定污染源排气中颖粒物测定与气态污染物采样方法等。7.4.1.3门采样管:采样管材料为硼硅酸盐玻璃或石英玻璃，采样嘴的内径应不小于4 mm，精度为0.1 mm。采样管内表面应光滑流畅。7.4. 1.3.2滤筒托架:滤筒托架用硼硅酸盐玻璃或石英玻璃制成，尺寸与滤筒相匹配，滤
18、筒取放应方便。部件整体应密封良好。7.4.1.33冲击瓶:四只。.5-1 L的冲击瓶串联，第一只为空瓶，第二只盛放100-300 ml甘二醇，HJ/T 77-2001第三只为空瓶，第四只盛放2/3瓶容量的硅胶。7.4. 1,3,4树脂柱:内径30-50 mm、长70-200 mm、容量100-150 ml的玻璃管。可装填2040 g吸附材料。7.4.1.3.5微电脑平行采样系统:该系统集测定烟气流速、自动选择采样点等多种功能于一体。尾气采样过程中，在装有滤筒时应能达到10.40 L/min的流量.可连续运行7h以上，具有恒定流量调节功能。采样完成后，能自动计算等速采样烟气流量、含氧量、含水量等
19、参数。7.4.1.4采样步骤7.4. 1.4.1采样之前对现场进行调查并测定废气参数，确定干排气分子量和采样嘴的大小，并估算采样量。采样量取决于废气中二嗯英的浓度水平和仪器检出限。一般不应少于3 m干烟气的采样量。7.4.1.4.2实验室准备工作包括玻璃部件的清洗、药品和试剂的准备等。干净的玻璃部件和树脂柱用铝箔封好待用。7.4. 1.4.3现场利用微电脑平行采样系统测量排气温度、流速、压力、水分含量、等速采样流量等参数，等速采样流量计算公式如下:Q.=0. 000 47dVB。十P,273+t)屿(273 -F- t,) T“.、，ii -下犷es下es下言es.1气1一人)七。十rJ式中:
20、Q,等速采样流量,L/min;d-一采样嘴直径，mm;V测点气体流速，m/s;B,大气压力，Pa;P排气静压,Pa;八一一流量计前气体压力，Pa;排气温度，C;t,-流量计前气体温度，C;从。干排气的分子量，kg /kmol ;X,排气中的水分含量(体积分数)，%。7.4. 1.4.4连接采样装置。堵住采样嘴，启动采样泵，检查系统的气密性。7.4.1.4.5根据实际情况决定是否添加采样内标，添加内标的种类参见表10。若采样系统已经得到实验验证并且操作人员已熟练掌握采样技术，则不必每次都添加采样内标。内标物质的添加量一般为1-20 ng,要求采样内标物质的回收率为70%-130%,超过此范围要重
21、新采样。7.4-1.4.6将采样管插人烟道，封闭采样孔，使采样嘴对准气流方向(其与气流方向偏差不得大于100)，然后开动采样泵，并迅速调整流量至等速采样流量。采样期间流量与测点流速的相对误差应在-5/-10%范围内，每隔60 min对等速采样流量作必要的调整。若滤筒阻力增大到无法保持等速采样，则应更换滤筒后继续采样。采样过程中，冲击瓶浸在冰水浴中，温度保持在6c以下，树脂吸附柱保持在30C以下。树脂吸附柱应注意避光。7.4.1.4.7达到所需的采样量后，迅速抽出采样管，同时停止采样泵，记录起止时间或采样体积等参数。7.4.1.4.8在避光处拆卸采样装置，尽量避免外界空气的棍人。取出滤筒保存在专
22、用容器中，用丙酮、甲苯冲洗采样管和连接管，冲洗液与冲击瓶中的吸收液一并保存在棕色试剂瓶中。树脂柱两端密封后避光保存。样品应尽快送至实验室分析。了.4.2空气采样7.礴.2，1采样原理空气中的二Oil英分布于颗粒物上或以气态形式存在，所以要同时使用过滤和吸附材料对空气中的HJ/T 77-2001=嗯英进行大流量采样。过滤材料支架和吸附材料容器采用不锈钢或玻璃制作，尺寸应与采样材料匹配，部件之间连接紧凑(见图5),7.42.2过滤及吸附材料7.4.2.2.1滤膜:玻璃纤维滤膜，使用之前分别用丙酮和甲苯进行超声波洗涤30 min，然后真空干燥。处理后的滤膜称重后用铝箔包严，密封在塑料袋中。7.4-2
23、-2.2聚氨醋泡沫(PUF):市售PUF有090 mm X 50 mm或060 mm X 70 mm等规格，密度0.016g/cm。使用之前用蒸馏水和丙酮洗净，然后用丙酮索氏提取16h以上，最后减压干燥，封装保存。7.4-2.3采样仪器7.4.2.3.1采样泵:采样泵应满足大流量空气采样的要求，负载流量应大于800 L/min，并具有恒定流量调节功能。7.4.23.2流量计:流量指示范围应能覆盖3001 300 L/min。有条件时附加使用累积流量计。定期对流量计进行校准。7.4.2.4采样步骤7.4-2.4，清洗采样器:用玻璃棉蘸丙酮擦洗采样器的滤膜支架和PUF容器。干燥后用铝箔包装待用。7
24、.4-2-4.2安放采样器:原则上应安装在距离地面1. 5 m以上的位置。为防止地面扬尘，可在设备附近铺设塑料布或其他隔离物。将2-3块聚氨醋泡沫装人PUF容器中，并将容器安装到采样器上。然后将滤膜装人支架。安装后应尽快开始采样。7.4-2-4.3采样量:空气采集量大约为1 000 m。采样流量为5001 000 L/min,累计采样24 h左右。采样时间应避免大风或下雨天气。7.4.2.4.4采样纪录:纪录采样点的环境情况，如采样时段的气压、温度、天气，采样日期、起止时间、采样流量等参数。7.4-2-4. 5样品保管:采样结束后，取下滤膜，用铝箔包严，密封在塑料袋中。聚氨醋泡沫连同其容器一起
25、用铝箔包严，密封在塑料袋中。样品应尽快送至实验室分析。8样品的制备8.1对所有样品都必须有按相同步骤处理的空白对照。8.1.1对于含有颗粒的样品，固体百分比和颗粒度大小应该分别予以测定。8.1.2液体样品:因为二嗯英可能吸附于悬浮颗粒上，液体样品的制备方法需考虑样品中固体的含量(图1),1.2.11.2.2没有肉眼可见颗粒的液体样品，用分液漏斗直接提取或者固相萃取法(SPE)提取。含肉眼可见颗粒物或悬浮固体少于百分之一的液体样品.先用SPE直接提取或过滤，再用索8.a式抽提器提取颗粒和滤膜，滤液也可用分液漏斗提取。8.12.3对于固体含量超过I%的液体样品，需要提供含10g固体的样品量。8.1
26、.3固体样品制备，通过索氏抽提器提取(图I).8.1.4多相样品:含有二嗯英的相需要过滤和离心，让其与不含二嗯英的相分开。含有机相的多相样品中，二u,!英主要存在于有机相中(图2),8.1.5多相样品需经研磨、匀浆和棍合(图z),8.1.6组织样品:鱼及其他组织的制备按后面章节中的规定步骤处理(图3),8.2悬浮固体百分比的测定:用来测定固体含量的样品就不能再用作二嗯英的测定。B-2.1液体和多相样品8211千燥并称取一片滤膜，结果保留三位有效数字。8.2.1.2充分混匀样品，过滤样品10. 0 mL,HJ/T 77-20018.2.1.38.2.1.48-2.28.2.2.1滤膜应在11。士
27、5C下至少干燥12h，然后置于干燥器中保存固体质量分数计算:固体的质量分数=干燥后的样品重量(9)一滤膜重量(g1、/尸1Vg100无水液体、固体、半固体样品及主要成分是水的多相样品，但不包括生物组织样品。2.2.2称取510 g样品置于称量杯中，结果保留三位有效数字。在(110士5)下至少干燥12h，并在干燥器中保存。3悬浮固体含量小于1%的液体样品的制备3.1无肉眼可见颗粒的水样通过以下程序制备:分别利用分液漏斗或SPE直接提取。含肉眼可见颗过滤后滤膜和已8.压粒及含悬浮颗粒少于1%的水样，采用下述程序制备:SPE提取或经过滤后进一步制备。颗粒用索氏抽提器提取，滤液用分液漏斗提取。SPE的
28、固相和滤膜用索氏抽提器提取。8.3.2样品制备和质量控制(QC)8.3.2门分别称量样品瓶的毛重与净重并精确至士1 go8.3-2-2在样品中加人稀释的标记标准添加工作液，让样品平衡1-2 h,8.3-2.3在使用SPE提取时，应在样品中加人5 MI，甲醇，封好摇匀后再进行提取。8.3.3颗粒过滤8.3.3.1在干净的过滤烧瓶顶上安装布氏漏斗。抽真空的情况下，将样品瓶中的样品全部通过布氏漏斗中的玻璃纤维膜。8.3-3.2用5 mL蒸馏水洗涤样品瓶两次，将全部颗粒都转移到滤膜上。8.3-3.3称取空样品瓶并精确至士1g，以差量法测出样品重量。8.3-3-4用分液漏斗提取滤液，用索氏抽提器提取含有
29、颗粒的滤膜。8-4制备含量大于1%固体的样品8.4.1在干净的烧杯或玻璃器中，称取充分混合的样品，固体含量至少为10 g,B-4.2往样品中加人稀释的标记标准添加工作溶液。8.4.3搅拌或振荡平衡1一2 ho8.4.4弃去多余的水。8.4.5对于粒径大于1 mm的颗粒样品，应在通风柜中将样品平铺在干净的铝悄上，待样品干燥后。8.4.6用索氏抽提器提取样品。8.5多相样品8.5.1测定固体百分比，确定可提供含有10 g固体的样品量。8.5.2用玻璃纤维滤纸过滤样品。8.53弃去所有水相。8.5.4如果样品颗粒粒径大于1 mm，在通风橱中将样品铺在干净的铝箱上，待样品干燥后研细并用索氏抽提器提取。
30、如果样品颗粒粒径小于1 mm，则干燥后用索氏抽提器直接提取。8.6样品研磨、匀浆或混合:颗粒粒径大于1 mm的样品，应将颗拉较径研至1 mm以下。8.6.1样品的研磨、匀浆或混合操作应在通风橱进行，避免实验室污染。8.6.2研磨:纸和纸浆、污泥和不定形的固体可以使用研磨机。某些情况下，可借助干冰或液氮使样品温度降低至冰冻状态有助于研磨，样品的研磨要在干净的研钵中进行，注意样品温度不能超过50C,8.6.3匀浆或混合:如果未充分研磨的颗粒或者研磨后粒径仍大于1 mm的颗粒，可用高速匀浆处理。B-6.4研细后的样品用索氏抽提器提取。8.78.了8.了.生物组织:生物组织样品需经匀浆处理。样品在冰冻
31、条件下匀浆更为有效。每次分析需要log生物组织样品(湿重)。实验室应匀浆处理至少20 g生物组织样品以备相同HJ/T 77-2001样品的再提取分析。8.7.3将组织切成小碎片在组织匀浆器中匀浆或在搅肉器中研碎样品。为了保证匀浆度，应至少研磨3次。B-7.4将大约10 g(湿重)匀浆组织转人干净、已称重的400500 mL烧杯中。在使用HCl消解时，则应将组织转人干净、已称重的500-600 mL大口瓶中，记录重量(10 mg精度)。8.7.5将剩余的匀浆组织转人干净瓶中，用四氟膜密封于一1Oc以下储存。9提取和浓缩9，1用分液漏斗提取滤液和不可见颗粒的液体9.1.1将添加了内标的样品或滤液置
32、于2L分液漏斗中，用5 mL蒸馏水淋洗样品瓶或烧瓶两次并将洗涤液加人分液漏斗中。9.1.2在样品中加人60 mL二抓甲烷，摇荡分液漏斗2 min。静置10 min以上以便有机相和水相分离。如果形成乳状而且大于有机相体积，则用下述方法来完成相分离:将二抓甲烷提取物通过一个装有约一半粉状无水硫酸钠的小柱中，并用溶剂洗涤玻璃漏斗，提取物最后转人用溶剂洗涤过的浓缩瓶中。如果形成乳状液，必须采用一些物理的方法以完成分离。使用的方法依样品而定，包括搅拌、玻璃毛过滤、相分离纸、离心、冰浴中超声、添加NaCl或其他的物理方法。另外，固相或其他提取技术可以阻止乳状液的形成。经验表明可溶有机物含量高的水样(如造纸
33、废水)，利用酸化可以减少乳状液的形成。在1 1.造纸工业废水样品中加人400 ml乙醇也可以减少乳状液的形成。9.1.3水样用60 mL二抓甲烷再提取两次，合并的提取液通过无水硫酸钠柱并转人浓缩瓶中。在第3次提取后，用至少20 mL二抓甲烷洗涤分液漏斗，洗涤液通过无水硫酸钠柱并转人浓缩瓶。重复洗涤至少两次。9.1.4进行大体积浓缩。9.2固体含量少于1%的样品处理方法9.2.1固相萃取的准备9.2.1.1过滤前在过滤器上加上固相萃取片。9.2.1.2用15 mL甲苯洗涤过滤器的边缘。抽真空直到出现几个液滴。降低真空度以使滤片浸湿约1 min，加大真空度抽去全部的甲苯。再用15 mL丙酮重复洗一
34、次，池片置空气中晾干。9.2-1.3以15 ml，甲醇再润湿滤片，润湿约I min,减压抽去大部分甲醉，保留约1 mm高度甲醇，以保持滤片的湿润。9.2.1.4加人约50 mL蒸馏水洗涤滤片，让大部分通过滤片，滤膜上最后要留一层水。9.2.2提取9.2-2.1将样品加人布氏漏斗中，抽真空开始提取。调整真空度使整个提取不少于10 min。对于颗粒物含量高的样品，过滤时间应为8h以上。9.2.2.2在样品快抽完时，加人约50 mL蒸馏水洗下样品瓶中所有的固体，通过滤片抽滤。9.2-2.3抽滤完全部样品和洗涤液后，用少量蒸馏水洗涤盛水槽的内壁。9.2.2.4将晾干的滤片置于玻璃平皿中。9.3索氏抽提
35、器提取固体样品9.3-，将约10g干燥样品装人提取滤纸筒中，上层用50 g石英砂盖住。9.3.2加人200-250 mL甲苯，加热开始回流并调节回流速度。9.3.3回流1624 h，冷却后拆开装置，记录收集的体积。9.3.4移去蒸馏烧瓶，并将收集管中的甲苯与烧瓶里的提取物合并。9.3.5浓缩提取物9.4生物组织提取:组织提取的两种方法HJ/r 77-20019.4.1索氏抽提9.4.1.1将20-30 mg无水硫酸钠加人烧杯中，并与约5g样品充分混和。用铝箔盖住平衡12-24 h,提取前再搅匀以防止结块。9.4.1.2加人200-250 mL二抓甲烷/正己烷(1:1)于回流瓶中。9.4.1.3
36、将样品和无水硫酸钠混合物转人样品提取滤纸筒，并装入索式抽提器中。9.4.1.4用溶剂清洗烧杯后一并转人收集管中。加热回流抽提1824 ho9.4.1.5抽提完毕，待冷却后再拆开装置。9.4.1.6定量转移提取物于大体积浓缩瓶中，旋转浓缩提取物使其体积至1-2 mI。9.4.1.7类脂含量测定按上述方法用二抓甲烷/正己烷(1 : 1)提取生物组织，旋转浓缩后，在60 C并于氮气流下吹至恒重，然后计算类脂含量，计算时需保留三位有效数字，计算公式如下:类脂的质量分数=残留物的重量(g)组织的重量(9)义1009.4.2 HCI消解和浓缩9.4.2.1加人200 ml- 220 g/1_ HCl和20
37、0 ml，二氯甲烷/正己烷(1:1)于样品中9.4.2.2密封摇荡1-3次。每隔10-30 s时间在通风橱中打开活塞放出多余的压力。9.4-2.3密封后再置于摇床上，调整摇床及摇速使酸、溶剂和生物组织稳定摇动，摇荡时间为12-24 h,9.4-2.4消解完毕，移走瓶子。静置，使溶剂和酸分层。9.4.2.5将溶剂通过玻璃漏斗倒人大体积瓶中，用25 mL正己烷清洗样品瓶。萃取液再用无水硫酸钠干燥后转人浓缩器中。9.4-2.6用大体积浓缩法浓缩溶剂至1-2 mL,9.5碱和酸再提取9-5.1将样品提取物置于分液漏斗中。9.5.2往提取物中加人50 mL 20%(m/V)KOH溶液并置于通风橱中摇荡2
38、 min，不时放气，分离水层。重复进行碱洗2-4次，直至水层无色。尽量减少提取物与碱的接触时间，以防止二P,t英的降解。9.5.3向提取物中加人50 mL 1Yo(m/V)NaCl溶液，反复洗涤2-4次，弃去水相。9.5.4向提取物中加人50 mL H,SO,，反复酸洗2-4次至水相无色。9.5.5再次加人1 0 o (m/V )NaCI溶液洗涤2-4次并弃去水相。9.5.6将提取物经过含有7-10 cm柱床高度的无水硫酸钠小柱。用30-50 mL正己烷清洗分液漏斗并通过该小柱。将提取物收集于圆底烧瓶中浓缩。9.6大体积浓缩9-6，1旋转蒸发9.6.2 K-D浓缩器:K-D浓缩器用于浓缩二氯甲
39、烷和正己烷溶剂。9.7溶剂交换9.7.1用硅胶、氧化铝、活性炭或弗罗里土色谱柱纯化的提取物要换成正己烷为溶剂。9.7.2将装有提取物的小管移到氮气吹干装置上，调节氮气流使溶剂表面仅轻微晃动。9.7.3将小管移人45C水浴继续浓缩。9.了.4当液体体积剩约1 mL时，加人所需溶剂2-3 ml并继续浓缩至约1 mL。重复再加溶剂浓缩一次。10提取物的纯化10-1二嗯英的纯化主要由三根色谱柱组成，即:多层酸化硅胶柱、氧化铝柱和弗罗里土柱。HJ/T 77-200110.1.1氧化铝和弗罗里土用于除去非极性干扰物，还可用来去除氯代二苯醚。10.1.2多层酸化硅胶柱主要用于除去组织样品中的类脂和非持久性污
40、染物，若类脂多于500 mg，应再用一根多层酸化硅胶柱重复纯化一次。10.2多层酸化硅胶柱纯化10.2.1按下列步骤填充色谱柱:从柱的底部向顶部装柱顺序依次为:2g无水硫酸钠，4g硅胶，10酸化硅胶，2g硅胶和5g无水硫酸钠。正己烷湿法装柱，轻敲色谱柱使这些吸附剂分布均匀。10-2.2用80 ml,正己烷预淋洗柱。当正己烷流至离无水硫酸钠层只有2-3 mm时，关闭柱阀，弃去洗脱液。检查色谱柱的沟流情况。如果出现沟流，重新装柱。10-2.3将已浓缩的提取物上柱。打开柱阀，直到提取物在无水硫酸钠上部只剩下2-3 mm，装提取物的瓶用正己烷荡洗三次，并分别加人色谱柱。10-2.4用245 mL正己烷
41、洗脱二嗯英，并收集洗脱液。10-2.5浓缩洗脱液以便进一步纯化。10.3氧化铝柱纯化步骤10.3.1从柱的底部向顶部装柱顺序依次为:2g无水硫酸钠，25 g碱性氧化铝，20 g无水硫酸钠，正己烷湿法装柱。10.3.2轻敲色谱柱使吸附剂分布均匀。10-3.3依次用100 m1的正己烷，预淋洗填充柱，当氧化铝的液面仍有2-3 mm时，关上活塞。10-3.4弃去淋洗液，检查色谱柱是否有沟流，如果有，则弃去此柱，重新装柱。10.3-5加人浓缩后的抽提液，打开活塞直至液面仅剩1 mm,10-3.6用200 mL正己烷/二抓甲烷(体积比为98 = 2)淋洗干扰组分，弃去淋洗液。10-3.7用200 mL正
42、己烷/二抓甲烷(体积比为1:1)洗脱，收集洗脱液。10.4弗罗里土柱纯化10.4.1用200 mL正己烷预淋洗活化的弗罗里土柱。10-4.2当柱内剩余溶剂离填料高度为2-3 mm左右时，将正己烷提取液加人柱中。10-4.3用200 ml正己烷淋洗干扰物并弃去洗脱液。10-4.4用300 mL二氯甲烷洗脱二嗯英并收集洗脱液，浓缩洗脱液供进一步纯化。10.4.5将提取物转移至。. 3 mL的锥形小管中进行最后的浓缩。浓缩提取物至约100 pL后再加人10川一含C,2-1, 2, 3,4-TCDD回收率内标，继续浓缩至恒重。室温下暗处保存以备GC/MS分析。11 HRGC/HRMS分析11.1建立的
43、操作条件要符合规定内标所允许的最小保留时间及表2中二嗯英的相对保留时间。11.1.1 GC操作条件:进样口温度:280 C ;传输线温度:260 C;初始温度:9000.5 min);升温程序:90-180 C, 25 C /min;180-260 C , 2 0C /min;260 C停留30 mina11.2离子丰度比和信噪比11-2.1所有的二嗯英异构体和CS1标准中标记化合物的离子丰度比应该在表8中的质量控制(QC)范围内。11.2.2二嗯英及CS1中标记化合物峰的信噪比必须大于10:1.11.2.3质谱分辨率达到10 000,xJ/T 77-200111.3异构体的确认11.3.1按
44、照图6-图7计算它们在相应的色谱柱上距2,3,7,8-TCDD和TCDF最近的异构体的GC峰重叠百分比。11.3.2确认离相距最近的流出异构体峰的峰底重叠应小于25 0a(在图6-图7中以100 X z/y表达)。11.4同位素稀释校正:提取前将17种2,3,7,8-X,取代二4英标记化合物加人样品中，- At,英异构体的参考化合物见表2,11-4.1对每个化合物的检定是用覆盖该浓度的校正曲线来进行的。用相对响应(RR) (标记对天然)与标准液中的浓度制出图表或者采用线性回归计算。相对响应依下述步骤进行确定，共采用五个校正点。11.4.2利用表7中M和M+2精确m/二的响应面积，测定单个二嗯英
45、异构体相对于它的标记物的响应。对每个校正标准，用以下公式计算:RR=(Al+A20(Al+A2, )X三鱼x c,式中:Al。和A2.天然二嗯英的M和M+2m/z的峰面积;Al和A2,标记物的M和M+2m/z的峰面积;c,校正标准中标记化合物的浓度(表4);c校正标准中天然二嗯英的浓度(表4),11-4.3分析校正标准CSl-CS5来校正分析系统，计算每种浓度下的RR.11.4.4线性:如果在五点校正范围中任何一种化合物的相对回收率(RR)都恒定(变异系数小于20%)，则可以选用它们的平均RR;否则，需要重新制作校正曲线。11-4.5响应因子(RF):校正时需要测定的RF用下列公式来计算:RF
46、=(AI，十A2,) X c(Al，+A2re) X c式中:A1。和A2,天然二A;t,英的M和M+2m/z峰面积;A1:和A2;,标记内标的M和M十2m/z峰的面积;。:标记内标的浓度(表4);校正标准中天然二A,l英的浓度(表4)e11.4.6分别进样1.。或2. 0 pL CSI-CS5校正标准，并在每种浓度水平上计算RF,11-4.7线性:在五点校正范围内，任何一种化合物的RF都恒定(变异系数小于35%)，则可选择其平均值为响应因子。11.5联合校正:利用含有天然二唔英，标记二嗯英以及内标的校正溶液(表4)，通过同位素稀释和内标法，利用单组分析的校正曲线来确认变化情况(表4)，如果不
47、能满足其中一种规定的校正限值，则需要重新校正。11.6数据储存:MS数据应该收集、记录并储存。116.1数据采集:应将每一个精确。/z的信号在整个检测过程中收集并存于储存设备中。11.6.2响应因子和多点校正:利用数据系统记录响应因子表(同位素稀释的响应比)和多点校正曲线。相对标准偏差(变异系数)用来检验校正的线性。11.7样品在分离纯化后要尽早进行分析测定，以减少蒸发、吸附或降解造成的损失。12仪器校正及实验运行12.1所有二嗯英及标记化合物的GC/MS运行参数每隔12h需要重新校正一次。CS3标定标准可用来校正系统运行状况。只有在仪器所有参数达标后，才能开始样品分析。HJ/T 77-200
48、112.2校正标准12.2.1所有二嗯英的二/z丰度比必须在表8所规定的范围内;否则，质谱必须重新调试直至-/Z丰度比处于规定范围内，并且重新校正。如果调试改变了质谱的分辨率，在重新校正前还应该先调分辨率。12-2.2标准中每个二Of,英异构体及标准物峰的SIN不能低于10，否则质谱必须重新进行调试校正。12-2.3利用同位素稀释法计算二嗯英的浓度。标记化合物的目录见表1，计算标记物浓度用内标法。12.3保留时间及GC分辨率12.3.1保留时间12.3.1.1绝对保留时间:在校正试验中，内标C z-1, 2 , 3 , 4-TCDD的绝对保留时间，应在标准的保留时间士15s的范围内。12.3.
49、1.2相对保留时间:在校正试验中，二嗯英异构体及标记物的相对保留时间应在表2所规定的范围内。12.3.2 GC分辨率12.3.2.1分别在不同的色谱柱上分析同位素标准。12.3.2.2 2,3,7,8-TCCD与其他四氯代二苯并二嗯英m/x319. 896 5同位素标记物之间及2,3,7,8-TCDF与其他四氯代二苯并峡喃。/x303.901 6同位素标准物之间的最低分离度在其各自柱上不能低于75%(图6及图7)e12.3.3 2,3,7,8-氯取代异构体的分离未达到要求，应调试GC并重新校正或更换GC柱再次重新进行校正实验。12.4当天的精确度及回收率12.4门提取过程的精确度及回收率需在同批样品分析之前进行。12-4.2用同位素稀释法计算二嗯英浓度。12-4.3将每个天然二嗯英及标记物浓度进行比较，但若有任何一种化合物浓度不在给定范围内，则表明此化合物的提取/浓缩过程运行不正常。这种情况下则需重新制备、提取及纯化同批样品并重复当天的精确度及回收率实验。12-4.4修正质量分析图并建立实验室运行流程图建立每种基质中各种二Af.英异构体的精确度报告。如:若R=95写,S=5%，则精确度为85%-
