1、湖南省地方标准 DB43 朝鲜 蓟组培快繁技术规程 DB43/T 1285 2017 ICS 65.020 B 30 湖南省质量技术监督局 发 布 Technical Regulation of Tissue Culure and Rapid Propagation of the ArtichokesCynara scolymus L.） （ 2017-05-17实施 2017-03-17发布DB43/T 1285 2017 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 主要仪器设备 1 4 生产环境及设备消毒灭菌 1 5 组培育苗 2 6 档案管理 2 附录 A（资料性附录）
2、朝鲜蓟组培苗生产流程图 5 附录 B（资料性附录） MS培养基母液配制表 6 附录 C（资料性附录） 诱导、增殖和生根培养基配制表 7 附录 D（规范性附录） 田间管理档案 8DB43/T 1285 2017 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准 由常德市农林科学研究院 、常德市西洞庭 管理 区农业科学研究所 和常德市农学会提 出。 本标准 由湖南省农业 标准 化技术委员会归口 。 本标准起草 单位：常德市农林科学研究院 、常德市西洞庭 管理 区农业科学研究所、 常德市农学会 。
3、本标准起草 人：张平喜 、王中美 、邓正春 、李树举 、王 桢、 夏继国 、郑仕科 、 吴亚飞 、柏秀芳 、 禹淞 文、 邓爱华 、魏廷龙 、 余 凯 、刘志 文、 尤龙威、 陈祖宏 、肖宝刚 、丁云清 、李 琪 、胡 超 、 丁 华、 袁振中 、刘会桃 、 苏 帅 。 DB43/T 1285 2017 1 朝鲜蓟组培快繁技术规程 1 范围 本标准规 定了 朝鲜蓟组培 快繁的主要仪器设备、生产环境及设备消毒灭菌、组培育苗和档案管理 等 内容。 本标准 适用 于朝鲜蓟的组培 快繁技术 标准管理的 全过 程。 2 规范性引用文件 下列文件 对于 本文件的 应用 是必 不可 少的。 凡是注日期的 版
4、本 适用本文件。 凡是不 注日期 的引用文 件，其最新版 本（ 包括 所有 的 修改 单） 适用 于本文件。 GB 4285 农药安 全使 用标准 GB/T 8321 农药合 理使 用准则（ 所有部分 ） NY/T 496 肥料 合理 使用准则 通则 3 主要仪器设备 3.1 灭菌设备 高压蒸汽 灭菌 锅、器 械消毒器、 紫外灯 、烘干箱 等。 3.2 接种设备 超净工作台 、镊子 、剪刀 、解剖刀 、钢丝架 、酒精灯 等 。 3.3 培养设备 250ml培养容器 瓶（ 罐头瓶 ）、培养 架、 空调 、照 明灯 管。 3.4 实验设备 电子天 平（ 0.01mg）、 冰箱、 pH 5.0 7.
5、0精密试纸或酸度计 、温湿度 表、照 度计 、 烧杯 、试剂瓶 、 量筒、容 量瓶 、移 液枪或移 液管 等。 4 生产环境及设备消毒灭菌 4.1 接种室消毒灭菌 每月用高锰酸钾及 甲醛混合薰蒸。薰蒸时，房 间关闭紧密 ，用甲醛（10 mL/m 3 ）和 高锰酸钾 （ 5 g/ m 3 ） 熏蒸（ 23 ）d ，通风 无味后 （ 2 3）d 人员 方可 进入 。 接种前 用紫外灯 照 射 30min。 4.2 培养室消毒灭菌 DB43/T 1285 2017 2 每月用 高锰酸钾 及甲醛混合薰蒸 ，方法同 4.1。 4.3 超净工作台的消毒灭菌 接种前 用紫外灯 照 射 30min， 并用 7
6、5%酒精 擦拭 台面， 定 期清 洗超 净工作台 过滤膜。 4.4 接种器具的消毒灭菌 使 用 前将 镊子 、解剖剪 、接种纸 、解剖刀 进行 高温蒸汽消毒， 接种 过程 中采 用酒精灯 灼烧 消毒。 5 组培育苗 5.1 培养基制备 5.1.1 母液配制及保存 选用化学 纯或分 析纯 的化学 药 品，根 据 MS培养基配方 ， 分 别配制大 量元素 （ 20倍 ）、 微 量 元素 （ 100 倍）、 铁盐 （ 100倍）、 有 机 物 （ 100倍 ）、 植物 生长 调节物质 （0.1mg/mL 0.5mg/mL） 等化 合物 的母液（ 参 见 附录 A和附录 B）， 将 母液 保存在 4
7、的冰箱 里。 5.1.2 培养基配制 根据培养基配 方需求 ， 每 升培养基 中分 别加入琼脂粉 （ 5.5g）、 白糖 （ 40g）和 各类 母液， 依次溶 解 于蒸馏水 ，定 容后用 0.1mol/L HCl或 0.1mol/L NaOH溶 液调 节 pH 5.6， 定量分 装至 培养 瓶中 并封 口， 制备成 培养基，备用。 5.1.3 培养基灭菌 瓶装培养基 在 10h内 完成 灭菌，灭菌 方式采 用高压蒸汽灭菌， 在压 力 0.105MPa、 温度 121条 件下 灭菌（ 20 30） min。锅 内的灭菌 物以 不超过 锅的容 量 3/4为宜 ，高压 灭菌 时锅 内 使用 蒸馏水
8、。 5.1.4 培养基保存 灭菌后 的培养基 放入接种室 ， 常温 条件下 7d内使 用， 2 4条 件下 14d内 使用。培养基 应保存 于洁净 环境 中， 注意避光 和防尘 。 5.2 外植体接种 5.2.1 外植体的选择 选择农 艺性 状好 、无病 毒的朝鲜蓟 分蘖芽 。采样 时间 选择晴 天或 露水 干后采集 。 5.2.2 外植体消毒 将外植体 用流 水冲洗 干净 ，用 刀 片 削去茎尖周 围的 叶片和组 织， 留取 3cm 4 cm的 芽备用。 将 备用 芽用 75%酒精 消毒 10 s， 再 用 0.1% HgCl2（ 每 1000 mL该 溶液 加 2滴吐 温 80） 浸泡 8
9、 min，最 后用 无菌 水冲洗 （5 6） 次。 5.2.3 外植体切割 将表面 消毒 后的 外植体 切割 ， 留取 0.5cm，接入 培养基中 。茎 在接种前 用手 术剪刀剪 去两端 ，长 （1.0 2.0 ）cm 。 DB43/T 1285 2017 3 5.2.4 外植体接种 操作时 ， 先 将培养 瓶的 封口 膜 取下 ， 放在 一边 ， 将 培养瓶 口在 酒精灯外 焰上旋转灼 烧消毒。 将枪 式 镊子在 酒精灯 上灼 烧消毒 并冷却 后 ， 将 外植体接种到 培养基 中， 每 个培养 瓶 放 3个 外植体， 接种后 盖上 封 口 膜， 并标 注日期 。 5.3 组培苗培养条件 培养
10、室 的温度为 2327 ， 相对空 气湿度 为 70% 75%， 光照 强度 为 （2000 3000） Lux， 光 照时 间为 16h/d。 5.4 诱导分化与增殖 5.4.1 丛生芽的诱导 备用芽 段上 下两端 各去掉 少许部分 ， 留取 0.5cm左右 的 茎尖 ，按照 正常 生长方 向 接入在 EM1培养基 （ 参见 附录 C）中 诱导 丛生 芽 。培养 过程 中培养基消 耗 过多 或褐 化严重 可以 转接一 次，培养基不 变。 外植体接种 （ 35 ） d后 ， 切口处膨 大， 茎尖开始变绿 、 伸 长； （ 10 15） d后 ， 腋 芽开始萌 发、 伸 长 ； 30d后， 形成
11、至 少 8个叶片 的幼 苗。 5.4.2 丛生芽的增殖 将 5.4.1诱导出的 2cm长 的丛生 芽从 基部 切割 成带 （23 ） 片 叶的 芽块 ， 剔除褐 化 的组 织， 并转 入 增殖培养基 EM2（参见 附录 C）培养基 中扩 繁。 接种 7d左右 ， 腋 芽开始 分 化； 15d左右 ， 既 可以 形成丛 生 芽， 平均 20d继代 1次 ，增殖 系数 为 4.5 左右。 5.5 壮苗生根 将朝鲜蓟 丛生 芽块中 1.5cm以 上芽 切割 下来 ，转 入生根培养基 EM3（参见 附录 C）中 进行 壮苗生根 培养。 接种 7d左右 ，茎段 基部 根 原基突 起； 15d左右 ，从
12、根原基 长出不 定根， 平均 每株（ 35 ）条 ，平 均长 度 1.5cm，生根 率 80%左右。 5.6 炼苗 5.6.1 炼苗标准 当幼苗发育 到 （2 3） 片 叶、（ 3 5 ） 条 根， 叶片长约 （ 12 ） cm、根 长 （ 0.51） cm时， 即可 进 行炼苗 处理。 5.6.2 组培苗驯化 将装组培苗的培养 瓶从 培养 架 上取 下， 转 移到 日光温 室 中， 自然散 射光 下炼苗， 温度 控制 在 23 27， 每天 中午 在培养 瓶周 围 喷洒雾 水， 以保 湿降 温，封 口炼 苗（ 12 ）d 。 5.6.3 开瓶锻炼 封 口 炼苗 后打开 瓶口 ，向 瓶 内注入
13、 超过 培养基表 面 0.5cm高 的自来 水， 温度 控制 在 2327 ，（ 2 4 ） d 后 即 可 移 栽 。 DB43/T 1285 2017 4 5.7 移栽 5.7.1 基质准备 栽 培基 质采 用蛭石 ：珍珠 岩：细沙按 1:1:1的 混合 物，新 基质 不需 要消毒， 使用过 的基 质 用 2000 倍 高锰酸钾 溶液 浸泡 12h。使 用 128孔盘 种植 幼苗。 5.7.2 移栽种植 移 栽 前，用 自来 水把 根系上 的培养基 冲洗 干净 ，用 1000倍甲 基托 布津 或多 菌 灵浸泡 组培苗根 部， 放置于 通风 阴凉 处晾 干水 分至根 系发 白变 软 ， 再栽
14、入 已 准备 好的基 质中 。 栽 后将基 质浇透 水， 随 即拱膜 保 湿 ，（ 7 l0） d后 揭膜 通风炼 苗。 5.8 病虫害防治 苗 期 立枯 病育苗 前使 用 0.05%炭疽福 美作药 土防 治，或 50%多菌 灵、 70%甲基 硫 菌灵等 作药 土防 治， 每平方 米用 药 （8 9） g；幼 苗发 病前 期喷 药防 治， 选用 70%土 菌消（ 恶霉灵 ）可 湿 性 粉 1000倍液， 或 70%甲 基硫 菌灵 可湿 性粉 剂 800倍液 喷雾 防治 ，隔 周喷施 ，共 喷两 次。 蚂蚁 防治在 育苗 床周边 撒一 圈百 虫灵等 驱蚁 药即 可。 农药使 用 应符合 GB 4
15、285和 GB/T 8321（所 有部分 ）的规定 。 5.9 大田移栽标准 当苗高 （8 10） cm， 叶片 数 （3 4） 片时， 带基 质 移栽到 大田。 肥料 使用 应符 合 NY/T 496的规 定。 6 档案 管理 6.1 生产 操作档案 对主要 农事活动 应逐项如实记载 。记载 内容 见附录 D.1。 6.2 投入品使 用档案 对 主要 投入品 的品 名、 种类 、 来源 ， 使用 日期 、用 量 、方法 、 效果 等应 逐项如实登记 。 记载 内容 见 附录 D.2。 6.3 物候期记载 档案 对 主要 物候 期应 如实记载 。记载 内容 见附录 D.3。 DB43/T 12
16、85 2017 5 附录 A （资料 性附录） 朝鲜蓟组培苗生产 流程 表 A.1 朝鲜蓟组培苗生产 流 程图 DB43/T 1285 2017 6附录 B （资料 性附录） MS培养基母液配制 表 B.1 MS培养基母液配制 表 母液名称 编号 化试名称 mg/L 扩 大倍数 扩大后 称量 /mg 母液定溶 体积/mL 配制培养基 吸取量 /mL/L A1 NH4NO3 1650 20 33000 A2 KNO3 1900 20 38000 A3 MgSO4 7H2O 370 20 7400 大 量 元素 A4 KH2PO4 170 20 3400 1000 50 大 量 元素 B CaCl
17、2 2H2O 440 20 8800 1000 50 C1 FeSO4 7H2O 27.8 100 2780 铁盐 C2 Na2EDTA 2H2O 37.3 100 3730 1000 10 D1 MnSO4 4H2O 22.3 100 2230 D2 ZnSO4 7H2O 8.6 100 860 D3 H3BO3 6.2 100 620 D4 KI 0.83 100 83 D5 Na2MoO4 2H2O 0.25 100 25 D6 CuSO4 5H2O 0.025 100 2.5 微 量 元素 D7 CoCl2 6H2O 0.025 100 2.5 1000 10 E1 甘氨酸 2 100
18、 200 E2 盐 酸 硫胺素 B1 0.1 100 10 E3 盐 酸 吡哆酸 B6 0.5 100 50 有 机 成 分 E4 烟 酸 0.5 100 50 1000 10 有 机 成 分 F 肌醇 100 100 10000 1000 10 DB43/T 1285 2017 7 附录 C （资料 性附录） 诱导、 增殖 和生根培养基配制 表 C.1 诱导 、增殖 和生根培养基配制 方法 编号 名称 配 方 琼脂粉/g/L 白糖/g/L pH EM1 丛 生 芽 诱导培 养基 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+ 柠檬酸30mg/L+肌醇 50mg/L 5 40 5.6 E
19、M2 丛 生 芽 增殖培 养基 MS+NAA0.5mg/L+椰 子 汁 10%+柠檬 酸 30mg/L+肌醇 50mg/L 5 40 5.5 EM3 生根培养基 1/2MS+NAA1.0mg/L+ CD1.0mg/L 1 + 活 性 炭 2.0g/L+肌醇 50mg/L 5 30 5.5 DB43/T 1285 2017 8附录 D （规范性 附录） 田间管理 档案 表 D.1 生产 操作档案 丘 块 名称 面积(667 ) 品 种 序号 土壤种类、肥力、前茬作物 操作日期 (月、日) 操 作 内容 与方法 完成情况 及效果 记载人 1 2 表 D.2 投入品使 用档案 丘块名称 面积(667 ) 品种 序号 品名 种类 来源 使用日期 （月、日） 用量 方法 效果 记载人 1 2 表 D.3 物候期记载 档案 面积(667 ) 品种 育苗期 (月、日) 移 栽 期 (月 、 日 ) 始 收 期 (月 、 日 ) 终收期 (月、日) 记载人
