1、湖南省地方标准DB43斑马鱼室内养殖技术规程Regulations of Indoor Feeding for ZebrafishDB43/T 10222015 ICS 65.150B 51湖南省质量技术监督局 发 布2015-04-08 发布 2015-05-08 实施DB43/T 10222015 I 目 次 前言1 范围 12 规范性引用文件 13 术语和定义 14 环境要求 14.1 水质 14.2 光照 14.3 水温 15 饵料培育 25.1 丰年虫培育 25.2 草履虫培育 26 养殖设备 27 亲鱼饲养 28 繁殖 28.1 雌雄鉴别 28.2 亲鱼选择 28.3 产卵受精 2
2、8.4 鱼卵收集 29 斑马鱼培育 39.1 受精卵孵化 39.2 鱼苗培育 39.3 幼鱼饲养 39.4 成鱼饲养 310 病害防治 311 饲养管理记录 3附录A（资料性附录） 水中饱和溶解氧计算方法 4附录B（资料性附录） 斑马鱼雌性与雄性对比图 5附录C（资料性附录） 斑马鱼繁殖盒 6附录D（资料性附录） 斑马鱼胚胎不同发育时期的特征 7附录E（资料性附录） 斑马鱼病害症状与治疗方法 9附录F（资料性附录） 斑马鱼饲养管理记录表10DB43/T 10222015 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009中的规则起草。 本标准某些内容可能涉及专利。本标准发布机构不承担识别这些专利
3、的责任。 本标准由湖南省植物保护研究所提出。 本标准由湖南省畜牧水产局归口。 本标准起草单位：湖南省植物保护研究所。 本标准主要起草人：刘勇、陈昂、陈源、严清平、张德咏、奚庆、赵炜、卓凌。 DB43/T 10222015 1 斑马鱼室内养殖技术规程 1 范围 本标准规定了斑马鱼（Danio rerio）室内养殖的环境条件、饵料培育、养殖设备、亲鱼饲养、繁殖、子代培育、病害防治和饲养管理记录。 本标准适用于试验用斑马鱼的室内养殖。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用
4、于本文件。 GB 14942 食品容器、包装材料用聚碳酸酯成型品卫生标准 NY 5051 无公害食品 淡水养殖用水水质 NY 5072 无公害食品 渔用配合饲料安全限量 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 成鱼 Adult fish 性腺发育成熟的斑马鱼。 3.2 亲鱼 Parent fish 具有繁殖能力并用于繁殖的成鱼。 4 环境要求 4.1 水质 使用存放24 h以上并经曝气处理的自来水（以下简称去氯水），pH为6.58.0，溶解氧含量不低于空气饱和值的60%，水的硬度（以CaCO3计）为（10250）mg/L。水质其他要求应符合NY 5051的规定。水中饱和溶解氧计算
5、方法参见附录A。 4.2 光照 每天光照时间为14 h，黑暗时间为10 h。 4.3 水温 斑马鱼饲养与孵化的水温应控制在（25.028.5），采用空调或加热棒调节水温。 DB43/T 10222015 25 饵料培育 5.1 丰年虫培育 用去氯水配制浓度为（1525）的NaCl溶液，将丰年虫卵加入NaCl溶液中，放入丰年虫卵的量为（24）g/L水，pH为8.09.0，孵化温度为（2530），持续曝气、光照，光照强度为（15002000）Lx。（1836）h孵出丰年虫。 5.2 草履虫培育 将草履虫种源接种到含有 0.1%酵母粉的培养液中，28 静置培养（47）d，当草履虫密度大于100个/m
6、L水时，即可饲喂斑马鱼鱼苗。 6 养殖设备 养殖缸为70 L（长宽高为0.6 m0.3 m0.4 m）左右的方形玻璃缸，初次使用前应用20 mg/L高锰酸钾溶液或40 mg/L次氯酸钠溶液浸泡养殖缸30 min，并用清水冲洗干净。 7 亲鱼饲养 亲鱼饲养密度应小于0.5 g/L水，每天交替投喂鲜活饵料（丰年虫等）和配合饲料，配合饲料质量应符合NY 5072的规定，每天投喂4次，早上与下午各2次，日投喂量为斑马鱼体重的（46）%。1周换水1次，1次换水量为1/2。 8 繁殖 8.1 雌雄鉴别 斑马鱼经3个月养殖达到性成熟，雌性较肥大，体色较淡，条纹偏蓝、间隔有银灰色条纹，怀卵期间腹部膨大；雄性较
7、修长，体色偏黄，条纹偏黄、间隔有柠檬色条纹，身体细长扁平。斑马鱼雌性与雄性对比图参见附录B。 8.2 亲鱼选择 选择养殖（612）个月、体长大于3 cm、健康活泼的成鱼，此外，雌鱼应挑选腹部膨大的怀卵成鱼。 8.3 产卵受精 在繁殖前3 d，将雌鱼和雄鱼分开养殖。在繁殖前1 d，将1尾雌鱼和2尾雄鱼置于繁殖盒内，用隔板将雌雄鱼分开，黑暗条件12 h后，将隔板抽出，使斑马鱼在光照刺激下产卵受精。繁殖盒材质应符合GB 14942的规定。斑马鱼繁殖盒参见附录C。 8.4 鱼卵收集 1尾雌鱼1次可产卵（100600）枚。采用直径1 cm左右的皮软管将受精卵吸出，并用去氯水冲DB43/T 1022201
8、5 3 洗两遍（去氯水温度与繁殖用水的温度一致），剔除死卵和杂质，在转移受精卵时，应尽量减少与卵一同吸入的水量。 9 斑马鱼培育 9.1 受精卵孵化 将胚胎置于经过消毒处理的培养皿内静置养殖，胚胎密度以（12）枚/mL水为宜。胚胎孵化过程中，应及时剔除培养皿中的死胚胎。斑马鱼胚胎不同发育时期的特征参见附录D。 9.2 鱼苗培育 斑马鱼孵出后3 d内无需喂食。 鱼苗孵出后（412）d移至玻璃缸内静态养殖，以每100 mL水放养（2025）尾为宜，每天投喂2次，饵料直径应小于50 m，如草履虫、或经200目筛过滤的蛋黄水等，每次投喂草履虫约30个/ml水，及时清除养殖缸内的食物残渣，水质浑浊时应及
9、时更换饲养用水。 （1321）d，每天投喂（45）次，饵料直径应小于 100 m，可在投喂草履虫或蛋黄水的基础上投喂丰年虫，每次投喂草履虫约30个/ml水，丰年虫约50个/ml水，及时清除食物残渣等，每天更换1/3养殖水。 9.3 幼鱼饲养 （2190）d为幼鱼阶段，养殖密度应小于50尾/L水，采用循环水养殖，可在养殖缸内加装循环水装置，以过滤缸内杂质并增氧，养殖用水明显浑浊时，更换1/2养殖水。每天投喂（45）次，饵料直径为（150450）m，可投喂丰年虫或配合饲料，每次投喂丰年虫约400个/尾鱼，日投喂的配合饲料为斑马鱼体重的（24）%。 9.4 成鱼饲养 养殖90 d后，进入成鱼养殖阶段
10、，养殖密度以1 g/L水为宜，采用循环水养殖，养殖用水明显浑浊时更换1/3养殖水。每天投喂（23）次，饵料直径（6001000）m，可投喂鲜活饵料（丰年虫等）和配合饲料等，每次投喂丰年虫约1200个/尾鱼，日投喂配合饲料的量为鱼体重的（46）%。 10 病害防治 斑马鱼常见病害有烂鳃病、烂鳍病、丝绒病和分枝杆菌病等。斑马鱼病害症状与治疗方法参见附录E。 11 饲养管理记录 每天记录一次水温、pH 值和水中溶解氧含量，每天记录投饵时间、饵料和投饵量等，每次换水时记录水质硬度，斑马鱼饲养管理记录表格参见附录F。 DB43/T 10222015 4附录A （资料性附录） 水中饱和溶解氧计算方法 不同
11、大气压和不同水温下饱和溶解氧（DO，mg/L）的计算公式如下： 式中：p当地实测大气压，hPa； po标准大气压，hPa； T水温，取值范围为（040）。 DB43/T 10222015 5 附录B （资料性附录） 斑马鱼雌性与雄性对比图 雌性斑马鱼 雄性斑马鱼 DB43/T 10222015 6附录C （资料性附录） 斑马鱼繁殖盒 斑马鱼繁殖盒材质符合食品级PC材质标准，包括内缸、外缸、隔板、繁殖盒盖，内缸下面为网状结构，斑马鱼产卵后通过内缸的网孔落入外缸底部，可有效避免亲鱼吞食鱼卵。 DB43/T 10222015 7 附录D （资料性附录） 斑马鱼胚胎不同发育时期的特征 发育时期 特征
12、图片 合子期 新受精的卵子完成首个合子细胞周期，非卵黄胞质开始向动物极流动，促使胚盘和卵黄颗粒丰富的植物极胞质分离 卵裂期 胞质分裂，在胎盘底部不完全切开，卵裂球仍通过胞质桥结构相连。这一时期的6次卵裂通常按规则的方向发生。 囊胚期 指从128-细胞期或第8次合子细胞分裂开始形成球形胚盘直到第14次卵裂为止的这一时期。胚胎进入囊胚中期转变、卵黄合胞体层形成、外包开始。 原肠胚期 外包运动继续，内卷、聚合和延伸等形态学运动形成上、下胚层和胚轴，持续到外包运动结束。 DB43/T 10222015 8发育时期 特征 图片 体节期 体节、原始咽弓和神经原节发育，原始器官发生，斑马鱼胚胎开始运动，尾部
13、出现。 咽囊期 种系期胚胎，体轴由先前绕卵黄囊的弯曲状态开始伸直，色素沉着，循环系统和鳍开始发育。 孵化期 原始器官的形态发生，软骨在头和鳍中发育，胚胎陆续孵化 DB43/T 10222015 9 附录E （资料性附录） 斑马鱼病害症状与治疗方法 病害 症状 治疗方法 寄生虫烂鳃病 鳃部明显浮肿，鳃盖张开困难，鳃丝局部溃烂，病鱼呼吸困难。 用（ 5080）mg/L的晶体敌百虫溶液浸浴病鱼（ 1015）min，并对养殖缸和其他饲养器具消毒。 真菌性烂鳃病 鳃丝发白，严重时有絮状菌丝粘附。 每1 L水中加入5 g食盐和5 g小苏打，混匀后浸浴病鱼（1520）min，或用 70 mg/L 的孔雀石绿
14、溶液浸浴病鱼（1530）min，并对养殖缸和其他饲养器具消毒。 烂鳍病 鳍边缘变得不透明、出血，然后膜脱落，鳍刺裂开。 每100 L 水中放入（35）片放痢特灵浸浴病鱼30 min，或用0.008 g/L的高锰酸钾溶液浸浴病鱼30 min，同时对养殖缸和其他饲养器具消毒。 丝绒病 游动缓慢，鱼鳍紧贴身体，镜检可发现鱼鳍和鳃部有腰鞭毛虫。 用0.8 g/m3的阿的平药浴3d，并对养殖缸和其他饲养器具消毒。 分枝杆菌病 头部和体表充血、出血、溃疡，腹部肿胀，体表或鳃苍白，竖鳞，鳍破损。内部器官上有白色结节。 应及时剔除病鱼，对养殖缸和其他饲养器具消毒，防止疾病蔓延。处理鱼、饲养器具和水时要戴手套。 DB43/T 10222015 10 附录F （资料性附录） 斑马鱼饲养管理记录表 投饵 日期 养殖缸号 水温 （） pH 水中溶氧量（%） 水硬度 （mg/L） 换水 饵料/投饵时间 投饵量 备注 记录人 注：水中溶氧量（%）为水中溶解氧含量与水中饱和溶解氧含量的百分比；硬度以CaCO3计；若记录当天换水，则在相应表格中填写“”。
