1、湖南省地方标准DB43DB43/T 10662015 ICS 65.150B 50湖南省质量技术监督局 发 布渔业水体中氯硝柳胺的测定Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric Method液相色谱-串联质谱法Determination of Niclosamide in Fisheries Water2015-09-20 实施2015-07-20 发布DB43/T 10662015 I 目 次 前言1 范围 12 规范性引用文件 13 方法原理 14 试剂与材料 15 仪器与设备 16 采样 27 分析测定 28 灵敏度、准确度和精密度 4
2、附录A （资料性附录） 氯硝柳胺多反应监测色谱图 5DB43/T 10662015 II 前 言 本标准按GB/T 1.12009的规则编制。 本标准某些内容可能涉及专利，本标准发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。 本标准起草单位：农业部渔业产品质量监督检验测试中心（长沙）、湖南省水产科学研究所。 本标准主要起草人：黄向荣、万译文、李小玲、索纹纹、肖维、洪波、刘伶俐、陈湘艺、黄华伟、曾春芳、杨霄、何咏。 DB43/T 10662015 1 渔业水体中氯硝柳胺的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了渔业水体中氯硝柳胺(Niclosamide)的液相
3、色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于我省渔业水体中氯硝柳胺的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 SL 187 水质采样技术规程 3 方法原理 水体中的氯硝柳胺经乙腈提取，二氯甲烷液液萃取浓缩后，用带有电喷雾离子源的液相色谱串联质谱仪负离子模式测定，外标法定量。 4 试剂与材料 本方法所用试剂除另有说明外，均为分析纯；实验用水应符合GB/T 6682一级水的规定。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2
4、二氯甲烷：色谱纯。 4.3 乙酸：色谱纯。 4.4 氯化钠。 4.5 溶解液：水+乙腈=30+70 (V+V)。 4.6 氯硝柳胺标准品：纯度应大于98.0%。 4.7 标准储备液（1.0mg/mL）:准确称取适量的氯硝柳胺标准物质，用乙腈配制成浓度为 1.0 mg/mL的标准储备液，4避光保存。保存期不超过6个月。 4.8 标准中间溶液：准确吸取0.1 mL氯硝柳胺标准储备液，用乙腈稀释定容至100mL，得到1.0 g/mL的氯硝柳胺标准中间溶液，4避光保存，保存期不超过3个月。 4.9 标准工作溶液：准确吸取适量的标准中间溶液，用溶解液稀释成 0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng
5、/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的氯硝柳胺系列标准工作溶液，现配现用。 4.10 微孔有机过滤膜：0.22 m。 5 仪器与设备 5.1 液相色谱-质谱联用仪，配有电喷雾离子源（ESI）。 DB43/T 10662015 25.2 分析天平：感量0.00001 g和0.01 g。 5.3 旋转蒸发仪。 5.4 涡旋混匀器。 5.5 分液漏斗：250 mL。 5.6 茄形瓶：250 mL。 6 采样 按SL 187的规定执行。 7 分析测定 7.1 样品提取 准确量取50mL水样，置于250mL分液漏斗中，加入10g氯化钠，摇匀，准确加入乙腈40mL、乙酸100L后振荡混
6、匀2min，在分液漏斗中加入30mL二氯甲烷，具塞，剧烈振荡2min，静置分层，收集有机相于250mL茄形瓶中，继续在分液漏斗中加入40mL乙腈、30mL二氯甲烷，振摇2min，合并两次提取液，混匀后于旋转蒸发仪中45 下旋转蒸发近干。用1.0mL溶解液溶解，涡旋混匀后过微孔有机过滤膜。 7.2 液相色谱-串联质谱测定 7.2.1 液相色谱条件 色谱柱：C18 (1502.1 mm，粒径3 m)，或其它等效柱。 流动相：A相：乙腈；B相：水（V/V）。 流动相梯度洗脱条件见表1。 进样量：10 L。 流速：0.2 mL/min。 柱温：35 。 表1 流动相梯度洗脱条件 时间（min） A (
7、%) B (%) 0 30 70 6 30 70 9 90 10 12 70 30 15 70 30 7.2.2 质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源。 扫描方式：负离子扫描。 检测方式：多反应监测。 电离电压：3.0 kV。 离子源温度：350 。 DB43/T 10662015 3 雾化温度：60 。 氯硝柳胺保留时间、定性定量离子对见表2。 表2 氯硝柳胺保留时间、定性定量离子对 7.2.3 测定 取适量标准工作溶液及样品提取液注入液相色谱-质谱联用仪，化合物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。 7.2.3.1 定性 样品中待测化合物色谱峰的保留时间与相应浓度标准校准溶液的色谱峰的保留时间
8、偏差在2.5%之内。在相同实验条件下，样品中待测化合物的定性离子对的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液图谱中对应的定性离子对的相对丰度比较, 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差见表3。 表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K50% 20%K50% 10%K20% K10% 允许的相对偏差 20% 25% 30% 50% 7.2.3.2 定量 以色谱峰峰面积峰值按外标法进行单点或多点校准测定。在上述参考条件下，氯硝柳胺多反应监测色谱图参见附录A，氯硝柳胺标准溶液的多反应监测色谱图参见附录A中图A.1、空白水样中添加氯硝柳胺的多反应监测色谱图参见附录A中图A.2。 7.2.
9、4 空白试验 除不加试样外，采用完全相同的分析测定步骤进行平行操作。 7.3 结果计算 样品中待测化合物含量测定值扣除空白背景值后，按下式计算： 10002 =VAVACCsiis C试样中待测化合物的含量，单位为微克每毫升（g/mL）； Cs标准工作溶液中待测化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； Ai试样中待测化合物的峰面积； As标准工作溶液中待测化合物的峰面积； Vi试样最终定容体积，单位为毫升（mL）； V2试样体积，单位为毫升（mL）。 化合物 保留时间（min） 定性离子对(m/z) 定量离子对(m/z) 氯硝柳胺 5.49 325289 325171 325289 DB
10、43/T 10662015 4计算结果需扣除空白试样，平行测定用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。 8 灵敏度、准确度和精密度 8.1 灵敏度 氯硝柳胺在渔业水体中的定量限为0.5 ng/mL。 8.2 准确度 本方法在0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL的添加浓度的回收率为（70110）%。 8.3 精密度 本方法的批内变异系数10%，批间变异系数15%。 DB43/T 10662015 5 附录A （资料性附录） 氯硝柳胺多反应监测色谱图 RT: 0.00 - 9.98 SM: 5G0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5
11、.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5Time (min)01020304050607080901000102030405060708090100Relative Abundance5.497.65 8.06 8.48 9.064.744.41 9.731.25 3.333.081.00 2.00 3.910.25 0.67 2.495.496.98 7.48 7.81 8.65 9.234.413.743.492.832.991.910.83 1.250.33NL: 2.36E5m/z= 288.50-289.50 F: - c ESI SRM ms2
12、325.189 135.199-135.201, 170.999-171.001, 288.999-289.001 MS STD-5_141022100335NL: 1.38E5m/z= 170.50-171.50 F: - c ESI SRM ms2 325.189 135.199-135.201, 170.999-171.001, 288.999-289.001 MS STD-5_141022100335图A.1 氯硝柳胺标准溶液（10 ng/mL）的多反应监测色谱图 RT: 0.00 - 9.98 SM: 5G0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
13、 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5Time (min)01020304050607080901000102030405060708090100RelativeAbundance5.576.231.58 4.740.750.42 1.33 2.00 2.581.08 6.652.99 7.734.99 9.734.243.66 3.993.49 8.988.23 8.65 9.485.656.404.82 8.237.153.49 9.239.397.731.75 2.99 8.730.42 3.99 9.811.00 2.742.411.33 2.16NL: 6.44E3m/z= 288.50-289.50 F: - c ESI SRM ms2 325.189 135.199-135.201, 170.999-171.001, 288.999-289.001 MS STD-2NL: 3.57E3m/z= 170.50-171.50 F: - c ESI SRM ms2 325.189 135.199-135.201, 170.999-171.001, 288.999-289.001 MS STD-2图A.2 空白水样中添加氯硝柳胺（1.0ng/mL）的多反应监测色谱图
