1、河北省地DB13方标准DB 13/T500-2004商品肉鸡传染性法氏囊病防治技术规程2004-03-10发布2004-03-10实施河北省质量技术监督局发布DH 13/C500-2004青本标准附录A、附录H为规范性附录。本标准由河北省畜牧局提出。本标准起草单位:河北科技师范学院.本标准主要起草人:李佩国、张建文、李蕴玉、杨宗泽、张艳英、张香斋、史秋梅、曹旺斌.DH 13/T500-2004商品肉鸡传染性法氏囊病防治技术规程1范围本标准规定了商品肉鸡传染性法氏囊病的诊断和防治。木标准适用于肉鸡饲养场和动物诊疗单位对肉鸡传染性法氏囊病的防治.2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成
2、为本标准的条款。凡是注日期的引用文件.其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而.鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.NY5035无公害食品肉鸡饲养兽药使用准则NY/T5038无公害食品肉鸡饲养管理准则中华人民共和国动物防疫法(第八届全国人大常委会1997年7月3日颁布)3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。商品肉鸡传染性法氏囊病(IBD)由传染性法氏囊病病毒(IBDV)所引起的一种急性、接触性、主要侵害雏鸡的传染病.该病毒对鸡的体液免疫中枢器官一法氏囊侵害严重，使病鸡法氏囊的淋巴细胞生成受到
3、抑制。不能产生免疫球蛋白，导致免疫机能障碍。因而，使鸡群对疫苗接种的抗体反应性降低，并对多种其他疾病易感性增高.出现免疫抑制现象。是目前危害商品肉鸡业的一种重要疫病之一4诊断4. 1流行特点4.1.1发病日龄主耍发生于2周龄以上的雏鸡，以3周龄-6周龄时最易感.4.1.2发病率和病死率发病率和病死率与流行毒株的毒力及鸡的日龄、母源抗体、有无继发感染、饲养管理水平、环境卫生条件、应激因素、防治措施等方面的因素直接相关.一般易感鸡群发病率可达S%一10096.病死率一般为20%30%e4. 1.3传染途径IHD病毒主要通过直接接触及病毒污染的种蛋、饲料、饮水、器具等经消化道、呼吸道猫膜而感染。4.
4、 2临诊症状a)该病潜伏期为2d3d,易感鸡群感染后发病突然，病程7d-Bd，典型发病鸡群的死亡曲线呈尖峰式。该病在初发鸡群，多呈显性rw染，症状典型;一旦暴发性的流行后.多转入不显症状的亚临诊型，死亡率低，以致常不易被发现。b)病初可见有病鸡啄自己肛门周围羽毛，随即出现腹泻、排出白色猫稠或水样稀粪、精神不振、饮食欲减退、翅膀下垂、羽毛蓬乱、怕冷、在热源处扎堆等症状。严重者头下垂，闭眼呈昏睡状。DH l3/f500-2004c)部分患该病的鸡脱水严重，常见趾爪干燥、眼窝凹陷，最后衰竭死亡。4.3病理变化4. 3. 1剖检病变a)病死鸡尸表脱水，胸肌色泽发暗.腿肌和胸肌常见条纹或斑块状紫红色出血
5、。b)翅膀皮下、心肌、肌胃浆膜下、肠砧膜、腺胃砧膜的乳头周围，特别是腺胃和肌胃交界处戮膜有暗红色或淡红色的出血点或出血斑;c)肾脏肿大、苍白，表面上常见散在的小坏死点:d)感染2d-3d后.法氏囊水肿或出血。表面有黄色胶冻物包裹，内褶肿胀、出血，有炎性分泌物或黄色干酪样物，水肿、出血严重者常呈紫葡萄状;感染Sd7d后.法氏囊会逐渐萎缩。0变异的毒株所致的病变，还常见脾脏明显肿大，盲肠、扁桃体多肿大，偶见山血.感染后3d内法氏囊迅速萎缩.4.3.2组织学病变a)法氏囊滤泡的皮质和髓质部出现淋巴细胞变性和坏死.淋巴细胞明显减少，淋巴滩泡的皮质部变薄，儿乎被网状细胞和结缔组织所代替，做质部呈网状且有
6、大小不等的雍泡，班泡腔内有团块状玻璃样物.囊上皮细胞也开始增殖并表现为腺样构造:b)脾脏的淋巴小节和腺样鞘动脉周l淋巴细胞变性、坏死.严重时全部淋巴细胞消失.网状内皮细胞增生;c)胸腺的淋巴细胞变性、坏死:dj盲肠扁桃体的淋巴细胞大1减少;e)肾脏的肾曲细管扩张.上皮细胞变性、坏死:0肝脏的血管周围有轻度的单核细胞浸润。4. 4病原学检验4. 4. 1病料的采集、运送和保存从死亡或扑杀临床症状出现后ld“-3d(最好未经药物治疗)的肉仔鸡，采取法氏囊、脾脏作病料.若病料送到实验室需要6h以上时.应将其置冰瓶中运送，采集或收到的病料来不及处理时.应置-40以下低温保存。4. 4. 2病毒分离4.
7、 4. 2. 1样品处理将病料剪碎后置于盛有灭菌砂粒的乳钵中研磨.用生理盐水或0.5%浓度的水解乳蛋白液配成棍悬液.3000r/min离心沉淀30min。取上清液用20氯仿处理.加入青、链霉素各1000IU / ml.置4作用61r10h后进行样.钻无菌检验。4. 4. 2. 2样品接种取经处理且无菌检验合格的样品，以。.2m1每胚的量绒毛尿囊膜(CAM)途径接种9日龄-11日龄无特定病原(SPF)鸡胚。每个样品接种4个5个鸡胚.于37环境中孵育，每日照蛋。或将样品以口服、滴眼方式接种于24日龄-35日龄肉仔鸡。4. 4. 2. 3病变观察a)感染鸡胚常于接种后3d-Sd死亡.7d以后死亡者极
8、少，主要出现以下肉眼病变:1)腹部水肿性扩张;2)肤充血或点状出血.趾关节和大脑部偶有出血:3)肝有斑驳状坏死和出血(晚期):4)心呈半煮熟样，心肌色淡:5)肾充血并有少量斑驳状坏死;DH 13/f500-20046)肺极度充血:7)脾苍白，偶有小坏死灶;8)绒毛尿囊膜上偶见小出血区:.9)氏囊无任何明显变化.b)肉仔鸡接种后主要出现以下肉眼病变:1)法氏囊感出现水肿和出血.体积和重量增大约两倍，第3d-4d体积开始缩小.第Sd恢复到原来的重量.以后迅速菱缩，至第8d时仅为原来重量的1/3左右，感染后第2d-3d法氏囊的浆膜上盖有淡黄色胶样渗出物，表面上的纵行条纹变得明显，法氏囊由白色变为奶油
9、黄色，在菱缩过程中变成深灰色。感染的法氏囊常有坏死灶，有时粘膜面有出血斑或出血点，偶尔可见整个法氏囊广泛出血;2)脾轻度增大.表面上有均匀散布的小坏死灶:3)脸胃肌胃交界处的粘膜中偶见出血。4. 4. 3病毒的鉴定4. 4. 3. 1病毒的形态学鉴定取经4. 4. 2. 1方法收获的样品，差速离心处理后，以磷钨酸或醋酸铀负染，进行电镜观察。若在淋巴细胞和异嗜性白细胞的胞浆中靠近细胞核处见有卵圆形的包涵体，在包涵体中有许多直径为20nm-62nm，呈晶格状排列，近似六角形，二十面体对称结构等典型法氏囊病病毒特征的病毒颗粒.有时也在胞浆中可见一些散在的病毒颗粒.分离到的病毒则为法氏囊病病毒。4.4
10、.3.2血渭学鉴定按附录A规定的病毒琼脂扩散试验方法和附录B规定的免疫荧光抗体试验方法进行测定.4. 3. 3病毒感染仔鸡鉴定取经4. 4. 2. 1收获的样品感染仔鸡，当出现4. 2和4. 3所述临诊症状、病理剖检及组织学病变则可作出诊断.5防治5.1养殖环境卫生5.1.1每批鸡出栏后应对鸡舍、笼具及用具进行清洗、消毒，消毒剂的选择应符合1中华人民共和国兽药典及相关法规的规定。5.1.2清理完毕到下次进鸡前应空舍至少2周。5.1.3应实行全进全出制饲养.同一养殖场不能饲养其他禽类。5.1.4最好采用网上平养.对地面散养鸡舍要及时清除潮湿的垫料和类便，并在固定地点高温堆肥处理。5.1.5育雏舍
11、的温度要恒定，饲养密度要合理，保持舍内通风良好。5. 2饲养方式有条件的商品肉鸡养殖场应封闭饲养。从肉仔鸡育雏到出栏整个饲养过程中将养殖人员同时封闭在肉鸡养殖允许的空间内.使整个养殖空间与外界环境相对隔离。5. 3饮水管理采用自由饮水的方式。确保饮水器不漏水.防止垫料和饲料霉变。饮水器要每日清洗、消毒，消毒剂应符合中华人民共和国兽药典及相关法规的规定.5.4喂料管理采用自由采食或定期饲喂的方式。不应饲喂发霉变质的饲料。每次添料童应很据需要确定，及时清除散落的饲料.保持饲料新鲜。5.5免疫DB 13/I500-20045. 5. 1疫苗免疫所用疫苗必须是取得农业部批准文号的产品.严格按照疫苗要求
12、的条件进行储存和运输。5. 5. 2免疫程序养鸡场应采用附录A规定的琼脂扩散试验方法测定母源抗体水平后，结合本场的实际情况及当地传染性法氏雍病的发病规律确定适合本场的免疫程序。通常可采用下述程序进行免疫:当琼脂扩散试验阳性率在50%以下时。首次免疫时间应在7日龄-14日龄进行，间隔1周2周后进行第2次免疫;当琼脂扩散试验抗体阳性率在50%以上时。首免时间在21日龄进行，间隔1周2周后，进行第2次免疫。疫苗可采川中等毒力株活疫苗。5.5.3免疫途径活毒疫苗采用滴鼻、点眼、滴口或饮水免疫.饮水免疫时要求水质洁挣，不应含有氯及其他消毒剂和金属离子，在饮水中加入2%的脱脂奶粉.停水时间要合适(存夏季4
13、h，秋冬季6h)以保证在30min内，最多不超过1h饮完。5.B药物防治5. 6. 1允许使用国家兽药管理部门批准的法氏囊病高免血消、高免卵黄液和针对该病的中草药制剂，使用方法按相应产品使用说明进行.5. 6.2建立并保存治疗记录.包括发病时间及症状，治疗用药的商品名称和有效成分，生产厂家及生产日期.治疗时间、剂量、疗程、疗效及停药时间。记录应在清群后保存2年以上.8病死鸡处理6. 1深埋法8.1.1场地的选择选择远离住宅、农牧场、水源、草原及道路的僻静地方:土质宜干而多孔(沙土最好)，以便尸体加快腐败分解;地势高、地下水位低.并避开山洪的冲刷;场地应筑有2m高的围墙.墙内挖一个5l深的围沟，
14、设有大门。平时落锁。6.1.2挖坑坑的长度和宽度以能容纳所要掩埋的尸体即可，从坑沿到尸体表面不得少于1.5m-2m,6.1.3掩埋坑底铺以2cm-5cm厚的石灰.将尸体放入。并将污染的土层、装尸体的塑料袋一起抛人坑内，然后再铺2cm-Scm厚的石灰，填土夯实.尸体掩埋后，上面应作。.5。高的坟丘.B. 2焚烧法按十字形挖两条沟，沟长2. 6m。宽0. 6m.深0. Sma在两沟交叉处坑底堆放千草和木柴，沟沿横架数条粗湿木棍.将尸体放在架上.在尸体的周围及上面再放上木柴，然后在木柴上倒以煤汕，并压以砖瓦或铁皮.从下面点火。直到把尸体烧成黑炭为止，并把它掩理在坑内二DH 13/C500-2004附
15、录A(规范性附录)琼脂扩散试验UGP)试验.1试剂a)琼脂、氯化钠、苯酚、碳酸氢钠(分析纯);b)法氏囊标准阳性抗原、法氏囊标准阳性血清、法氏囊标准阴性血清、蒸馏水(双蒸)。A. 2待检抗原取4. 4. 1采集的病料.按4. 4. 2. 1方法处理过的上清液即为待检抗原.A. 3仪器a)平皿若干。b) 1m1, lOml移液管;c) 250m1锥形瓶若干:d)分析天平(感量O.OOIg).4步骤A. 4. 1琼脂板制备称取琼脂1g,氛化钠88,量取苯酚0. 1m1.燕馏水100m1加入250m1锥形瓶中.水浴溶化后用5. 6%碳酸氢钠调pH 6.8pH 7.2.分装备用。需用前将其溶化，倒入平
16、皿内，制成厚度3mm的琼脂板.冷却后置4冰箱内保存.A. 4. 2打孔首先在纸上画好七孔图案，把图案放在带有琼脂板的平皿下面，照图案在固定位置打孔，打孔用2mm和3mm直径薄壁圆型金属小管.外周孔径为2mm，中央孔径为3mm.孔间距3mm.打孔切下的琼脂用针头挑出.A. 3. 3抗原及血清的添加点样前在装有琼脂的平皿上贴上胶布或用琼脂墨水写上日期及编号，中央孔7加入标准阳性血清0. 02m1, 1. 4孔加入标准阳性抗原，2. 3. 5. 6孔各加入待检抗原.添加最以孔满而不溢为宜.待孔中液体吸千后将平皿倒置.在37C条件下培育?2小时判定结果。AS判定标准A. 5. 1阳性当检验用标准阳性血
17、消与阳性抗原孔之间有明显致密的沉淀线时，待检抗原与阳性血清孔之间形成沉淀线.或者阳性抗原的沉淀线末端向毗邻的待检抗原孔内侧偏弯者，此待检者抗原判为阳性.A. 5. 2阴性待检抗原与阳性血清之间不形成沉淀线，或者阳性抗原的沉淀线向毗邻的特检抗原孔直伸或向外侧偏弯者，此待检抗原判为阴性.DH 13/f500-2004附录日(规范性附录)直接免疫荧光杭体试验试剂丙酮、磷酸缓冲液、pN9. 0缓冲甘汕;标准抗传染性法氏囊病病毒的多价荧光抗体。a)b)仪器B1B.2荧光显微镜;载玻片;盖玻片:恒沮箱。司日目司B. 3步骇B.3.1样品制备将待检病理组织做成冰冻切片或触片，用冷丙酮固定于玻片上。B. 3. 2对照B. 3. 2. 1用荧光抗体染正常的组织切片或触片作为阴性对照，显微镜下观察应无荧光。B.3.2.2将按B. 3. 1方法制备的样品角未标记的抗血清处理，再用荧光染色作为空白对照，显微镜下观察应不出现荧光。B.3.3操作方法在待检样品的触片上直接滴加荧光抗体后，置37 C染色30 min60min,用磷酸缓冲液(PBS)充分洗涤，除去未结合荧光抗体，加pH9. 0缓冲甘油1滴，用盖玻片封固，在荧光显微镜下进行观察。B. 4判定标准抗原所在部位呈黄绿色荧光者判为阳性;无荧光或不出现荧光者判为阴性.
